幽门螺杆菌VacA基因型与耐药性分析

目的探讨幽门螺杆菌(H.pylori)VacA基因型在各种胃肠疾病中的分布及其对常用抗生素的敏感性。方法从胃十二指肠疾病患者胃黏膜标本中分离培养H.pylori,用PCR测定VacA基因型,并采用琼脂稀释法进行对阿莫西林、克拉霉素、甲硝唑3种抗生素的药物敏感性试验。结果 108株H.pylori菌株,VacAs1a阳性85株(78.7%),VacA s1b阳性22株(20.4%),VacA m1阳性29株(26.9%),VacA m2阳性77株(71.3%),VacAs1a/m2阳性66株(61.1%),未发现s2型菌株。其中,慢性胃炎患者VacAs1a阳性率为65.4%(34/52),消化性溃疡患者VacAs1a阳性率为90.0%(36/40),胃癌患者VacAs1a阳性率为93.8%(15/16)。对阿莫西林、克拉霉素、甲硝唑的耐药率分别为18.5%、5.6%、65.7%,对阿莫西林耐药的20株菌株中,19株为VacAs1a型。结论 H.pylori菌株VacA基因型绝大多数为s1a/m2型,该型菌株存在于各种胃肠疾病中。本地区幽门螺杆菌对克拉霉素的耐药率较低,对甲硝唑的耐药率较高,而对阿莫西林耐药的菌株多数为VacAs1a型。

幽门螺杆菌VacA基因型与胃疾病

目的:探讨幽门螺杆菌(H .pylori)VacA基因型在各种胃肠疾病中的分布及关系。方法:从胃十二指肠疾病患者胃粘膜标本中分离培养H .pylori,PCR测定VacA基因型。结果:10 8株H .pylori菌株,VacAs1a阳性为85株( 79% ) ,VacAs1b阳性2 2株( 2 0 % ) ,VacAm1阳性2 9株( 2 7% ) ,VacAm2阳性77株( 71% ) ,VacAs1a/m2阳性6 6株( 6 1.1% ) ,未发现s2型菌株。其中,慢性胃炎患者VacAs1a阳性率为6 5 .4 % ( 34/ 5 2 ) ,消化性溃疡患者VacAs1a阳性率为90 % ( 36 / 4 0 ) ,胃癌患者VacAs1a阳性率为94 % ( 15 / 16 )。结论:H .pylori菌株VacA基因型绝大多数为s1a/m2型,该型菌株存在于各种胃肠疾病中。

医学微生物学理论课教学方法探讨

医学微生物学是一门重要的医学基础学科.针对学科知识量大,内容繁杂,传统教学中学生学习被动、依赖性强、积极性不高的问题,采用多元化教学方法,通过改变教学方式,激发学生的学习兴趣;利用CAI课件组织教学,强化课堂教学效果;注意知识更新,加强与临床学科的联系,为培养适应现代化建设的高素质人才打下良好的基础.

人类乳头瘤病毒与疾病

人类乳头瘤病毒(Human Papillomaviruses,HPVs)是人类最早认识的肿瘤病毒,HPV不但可引起良性肿瘤,还可导致人体不同部位皮肤和粘膜口皮的恶性病变,部分将导致恶性肿瘤,如宫颈癌、喉癌和皮肤鳞癌等。

鼻咽癌和肾综合征出血热患者外周血T淋巴细胞亚群的研究

目的：探讨鼻咽癌和肾综合征出血热患者外周血T细胞水平的变化。方法：用流式细胞仪直接免疫荧光法检测健康成人、鼻咽癌（放疗前后）和肾综合征出血热患者外周血T细胞亚群（CD3^3＋、CD4^＋、CD^8＋）的百分率，并进行比较。结果：鼻咽癌患者放疗前后外周血CD8^＋细胞百分率与健康对照组相比明显升高，CD4^＋／CD8^＋比值明显降低，均有显著性差别（P〈0．001）；肾综合征出血热患者与健康对照组相比CD4^＋细胞百分率降低（P〈0．01）、CD8^＋细胞百分率升高、CD4^＋／CD8^＋比值下降（P〈0．001）。结论：鼻咽癌和肾综合征出血热患者体内存在免疫调节功能异常。

幽门螺杆菌感染途径的探讨

为了检测幽门螺杆菌(H.pylori)感染的慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌患者的粪便是否存在活的幽门螺杆菌,探讨H.pylori的传播途径.我们收集胃粘膜快速尿素酶试验强阳性患者60例的胃粘膜和新鲜粪便,进行细菌的分离培养和PCR检测.结果发现52份胃粘膜分离到H.pylori(52/60,86.7%),粪便标本6份H.pylori检出阳性(6/60,10%),其中4份来自慢性胃炎患者,2份来自消化性溃疡患者.粪便培养阳性的患者胃粘膜培养均阳性.PCR检测表明同一患者两种标本分离菌株的细胞毒素相关蛋白基因(CgsA)和空泡毒素信号序列sla基因(VacA sla)一致,其中4株为Ca6A+和VacA sla+,另2株Ca6A-和VacAsla+,所有6株菌的尿素酶A亚单位基因(UreA)均阳性.由此可见,活的幽门螺杆菌存在于感染者的粪便中,该菌可能通过粪-口途径传播.……

幽门螺杆菌重组VacA蛋黄抗体的体外活性

目的:制备幽门螺杆菌(Helicobacter pylon)重组VacA的鸡蛋黄抗体IgY(VacA-IgY),了解其理化特性和生物学活性,评价其抗H pylori感染的作用．方法:以纯化的重组VacA免疫产蛋鸡,水稀释法提取蛋黄抗体(VacA-IgY),硫酸铵沉淀法纯化IgY．将一定浓度的VacA-IgY在不同温度的水浴中维持一定时间,评价其耐热性;在不同 pH的Tris-HCI中孵育一定时间,评价其耐酸性;加入胃蛋白酶并作用一定时间后,评价其对酶消化的耐受作用．以上评价均采用ELISA 法测定抗体效价变化．采用Hela细胞体外培养 MTT法分析VacA-IgY对H pylori细胞毒活性的中和作用．结果:本实验制备的VacA-IgY在70℃水浴 15 min后活性保持约50％;在pH≥5时,抗体活性几乎无改变,pH<5时,抗体活性下降较快,pH2．0左右,抗体活性几乎丧失;pH4．0时, 60 kU／L胃蛋白酶作用1 h,抗体活性几乎无变化,2 h后活性仍保持50％以上．VacA-IgY能浓度依赖性地中和H pylori菌体蛋白的Hela细胞毒活性．20 mg／L超声提取物即可降低1／2的 Hela细胞增殖能力,80-320 mg／L的VacA-IgY 能完全中和H pylori菌体蛋白的Hela细胞毒活性(P<0．01)．结论:成功制备了重组VacA的IgY,且具有较好的耐热性、耐胃酶消化和一定的耐酸性; 在其体外具有中和H pylori细胞毒活性的作用．

幽门螺杆菌重组VacA蛋黄抗体的制备

目的研制高效价、高特异性的抗细胞空泡毒素VacA的鸡蛋黄抗体(IgY),为研制幽门螺杆菌(H.pylori)治疗性抗体奠定基础。方法用纯化的重组细胞空泡毒素抗原免疫22周龄洛曼产蛋母鸡,取免后所产鸡蛋,将蛋黄稀释、离心,收集上清,加硫酸铵沉淀。以ELISA间接法检测抗体效价,Bradford法检测蛋白含量,SDS-PAGE法检测相对分子质量及纯度。结果母鸡初次免疫后76d,抗体效价达到1∶6400,最高可达1∶12800。蛋黄抗体经纯化浓缩后,用SDS-PAGE分析,出现2条蛋白带,纯度可达80%以上,其含量为25·66mg/ml。结论已成功制备了抗重组细胞空泡毒素的特异性蛋黄抗体。

抗重组VacA IgY体内抗幽门螺杆菌感染的实验研究

目的在构建H.pylori的基因工程菌pQE30-v-DH5a的基础上,诱导表达VacA重组蛋白,以此为抗原,制备抗VacA的蛋黄抗体(VacA IgY)。通过小鼠口服试验,证实VacA IgY治疗H.pylori感染的作用,为进一步制备抗H.pylori感染的IgY制剂提供实验依据。方法用重组H.pylori VacA蛋白免疫母鸡,水稀释结合氯仿有机沉淀法提取IgY,ELISA法测定其针对VacA的效价。建立H.pylori感染的Balb/c小鼠动物模型,治疗组在小鼠灌喂菌液后灌喂不同剂量的VacA IgY。以H.pylori培养和病理切片观察胃黏膜H.pylori定植和炎症反应程度。结果制备了高效价的IgY(1∶12800)。动物实验阳性对照组H.pylori的总感染率为70.4%,12周后的感染率为88.9%。治疗组的感染率与同期阳性对照组相似,胃黏膜的炎症反应程度比阳性对照组弱,随IgY剂量的增加,炎症减弱明显,IgY剂量为4mg/ml时,能达到较理想的治疗效果。结论成功制备了高效价的特异性VacA IgY,小鼠体内实验证实了口服VacA IgY具有治疗H.pylori感染的作用,可用于制备口服制剂。

留学生医学微生物学教学的实践与探索

通过分析医学留学生的特点,针对性地从选择合适教学内容、综合应用多媒体、灵活选择教学方法、充分利用实验的互补性等方面,经多年探索与实践,提出了积极、有效改进留学生教学的教学方法及手段,提高了留学生医学微生物学教学质量,并为完善留学生医学教育提供参考。

抗重组幽门螺杆菌VacA单克隆抗体的制备

目的制备抗重组幽门螺杆菌致细胞空泡毒素抗原(VacA)的单克隆抗体(mAb)。方法用基因工程菌pQE30-v-DH5α大量表达重组蛋白VacA,经Ni2+-NTA树脂纯化后,Western blot鉴定抗原性,免疫家兔后ELISA法检测血清VacA抗体鉴定其免疫原性。用重组VacA免疫Balb/c小鼠。取免疫鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞融合,HAT选择性培养和间接ELISA进行筛选,并检测所分泌抗体的效价和分析Ig类别。结果获得4株能稳定分泌VacA mAb的杂交瘤细胞,能分泌IgG2b、IgM和IgG1 3类抗体,轻链均为κ型。其中,IgG1 mAb经Western blot鉴定能与重组VacA发生特异性反应。结论应用纯化的重组VacA,成功获得了能稳定分泌幽门螺杆菌VacA单克隆抗体的杂交瘤细胞,并制备了单克隆抗体。为进一步研制检测VacA的试剂盒及探讨VacA的致病机制奠定了基础。

网络在医学微生物学教学中的促进作用

网络的飞速发展使传统的教学模式发生了巨大的变化，目前已渗透到医学微生物教与学的各个环节，在教学中发挥着重要的促进作用。网络不但使教学管理高效快捷，使教师知识结构更新加速，而且促进学生自主学习，更突破时空限制，促进师生间的及时交流，促进微生物学的教学改革。

抗幽门螺杆菌VacA IgG经胎盘传递探讨

目的探讨母体细胞空泡病毒(VacAIgG)经胎盘传递给新生儿的状况,为预防儿童幽门螺杆菌(H.pylori)感染提供资料。方法以克隆表达的H.pylori细胞空泡毒素毒性基因片段蛋白为抗原,建立检测血清VacAIgG的间接免疫吸附试验(EIA),同时检测母体血和脐血中的VacAIgG。结果胃、十二指肠溃疡、慢性胃炎H.pylori阴性者,母体血和新生儿脐血VacAIgG均阴性。胃、十二指肠溃疡H.pylorin阳性者,母体血VacAIgG阳性率为86%,慢性胃炎患者阳性率为66%,显著高于胃不适患者(P分别<0.005及<0.001),但二者之间无显著性差异。胃、十二指肠溃疡、慢性胃炎和胃不适H.pylori感染者,母体血和新生儿脐血VacAIgG同时阳性分别为66%、80%和60%,相互间无显著性差异(P>0.005)。结论母体产生的VacAIgG可通过胎盘传递给胎儿,对预防新生儿H.pylori感染引起的细胞损伤具有重要意义。

幽门螺杆菌感染途径的探讨

目的检测幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌患者的粪便是否存在活的Hp,以探讨Hp的传播途径。方法收集60例胃粘膜快速尿素酶试验强阳性患者的胃粘膜和新鲜粪便,进行Hp的分离培养和PCR检测。结果52份胃粘膜标本分离到Hp,阳性率86.7%;6份粪便标本分离到Hp,阳性率10.0%,其中4份来自慢性胃炎患者,2份来自消化性溃疡患者。粪便培养阳性的患者胃粘膜培养均阳性;PCR检测同一患者两种标本分离菌株的细胞毒素相关蛋白基因(CagA)和空泡毒素信号序列s1a基因(VacA s1a)一致,其中4株为CagA+和VacA s1a+,另2株VacA s1a+和尿素酶A亚单位(UreA)基因阳性。结论Hp感染者的粪便中有活的Hp存在,该菌可能通过粪-口途径传播。

两种纯化幽门螺旋杆菌VacA-HpaA融合蛋白包涵体方法的比较

目的比较Ni2+-NTA树脂和切胶纯化重组VacA-HpaA融合蛋白的纯化效果,探讨纯化蛋白包涵体的简易方法。方法克隆并表达重组pQE30-vacA-hpaA-DH5α工程菌,获得重组VacA-HpaA融合蛋白的包涵体,分别进行Ni2+-NTA树脂和切胶纯化,获得可溶性重组蛋白,Western blot鉴定其抗原性;用纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,ELISA法检测小鼠血清抗VacA、HpaA和VacA-HpaA的IgG水平,鉴定其免疫原性。结果两种方法均能纯化重组VacA-HpaA融合蛋白包涵体,得到可溶性的重组蛋白,Ni2+-NTA树脂纯化法获得的可溶性重组蛋白的纯度为95.8%,得率为63.5%;切胶纯化法获得可溶性重组蛋白的纯度为93.3%,得率为75.2%。Western blot鉴定纯化蛋白均具有良好的抗原性。ELISA法检测显示小鼠血清均能与重组蛋白VacA、HpaA和VacA-HpaA发生反应,两组IgG水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),均具有良好的免疫原性。结论切胶纯化重组VacA-HpaA融合蛋白包涵体是一种简单、经济的可行方法,有利于重组蛋白包涵体的纯化。

IL-1β-31、IL-10-819和TNF-α-1031基因多态性与幽门螺杆菌感染相关性胃溃疡及胃癌易感性的关系

目的分析人群中IL-1β-31、IL-10-819和TNF-α-1031基因多态性与幽门螺杆菌(H.pylori)感染相关性胃溃疡及胃癌易感性之间的关系,为临床诊断及预防该病提供新的思路和方法。方法选取H.pylori阳性的51例胃溃疡患者、43例胃癌患者和100例健康对照者,采用PCR-限制性长度片段多态法和多重引物特异PCR法,检测其IL-1β-31、IL-10-819和TNF-α-1031位点,分析其多态性。结果在胃溃疡组中TNF-α-1031各基因型的频率分布与健康对照组比较,差异有统计学意义。在胃癌组中TNF-α-1031各基因型的频率分布与健康对照组比较,差异有统计学意义;Logistic回归分析表明,与携带TNF-α-1031T/T者相比,携带TNF-α-1031C/C者发生胃溃疡的危险性为OR=5.84(95%CI:1.00～33.84),发生胃癌的危险性为OR=6.95(95%CI:1.19～40.63)。在疾病组和健康对照组中,IL-10-819和IL-1β-31各基因型频率的分布差异无统计学意义。结论 TNF-α-1031基因多态性与胃溃疡、胃癌的易感性相关。