胆固醇氧化酶PsCO4异源表达、纯化及酶学性质分析

胆固醇氧化酶专一性催化胆固醇为胆甾-4-烯-3-酮,广泛的应用于临床以及食品加工行业。本论文将来源于Pimelobacter simplex的胆固醇氧化酶PsCO4,分别转化到大肠杆菌宿主BL21（DE3）、Rosetta（DE3）和C41（DE3）中,在不同温度（15℃、25℃、37℃）及IPTG诱导浓度（0.01mmol/L、0.1mmol/L、0.5mmol/L）下异源表达Ps CO4。结果表明,转入Rosetta（DE3）菌株的PsCO4蛋白,在IPTG浓度为0.1mmol/L、15℃下经18h诱导表达,PsCO4可溶性表达量最高（0.63mg/ml）。异源表达的胆固醇氧化酶PsCO4最适温度为30℃,最适pH为7.5。通过TLC,GC-MS检测出Ps CO4催化胆固醇生成胆甾-4-烯-3-酮。以胆固醇和β-谷甾醇、豆甾醇和孕烯醇酮为底物,测定PsCO4对四种底物的催化反应动力学参数,胆固醇k（cat）/Km为0.08s-1·μM-1分别高于β-谷甾醇（0.04s-1·μM-1）、豆甾醇（0.005s-1·μM-1）和孕烯醇酮（0.02s-1·μM-1）。