玉米赤霉烯酮对山羊睾丸间质细胞的毒性机制研究

【目的】探究玉米赤霉烯酮(ZEA)对山羊睾丸间质细胞活力、形态及细胞凋亡相关基因表达的影响,明确其对山羊睾丸间质细胞的毒性作用,为后续揭示ZEA对雄性山羊生殖系统的毒性机制提供理论依据。【方法】以山羊睾丸间质细胞为试验材料,采用不同浓度ZEA处理细胞24 h,以CCK-8法检测细胞增殖情况并筛选出最适浓度;然后通过光学显微镜、透射电子显微镜、细胞划痕试验、实时荧光定量PCR、JC-1试剂盒及ROS试剂盒分别检测ZEA处理山羊睾丸间质细胞的形态特征、超微结构变化、损伤愈合能力、细胞凋亡及氧化应激相关基因表达、线粒体膜电位及胞内活性氧(ROS)水平的变化。【结果】随着ZEA浓度的升高,山羊睾丸间质细胞活力呈剂量依赖效应极显著下降(P<0.01,下同),ZEA的半数抑制浓度(IC_(50))在20μmol/L附近,故选取20μmol/L作为后续试验的处理浓度。经20μmol/L ZEA处理后,山羊睾丸间质细胞大量死亡,细胞皱缩呈圆珠状,细胞间连接松散;核膜出现破损,内质网断裂、结构模糊,线粒体破裂,形成自噬囊泡,细胞核皱缩、深染;细胞愈合能力降低,划痕培养18 h后的细胞迁移率约80%;细胞中的Bcl-2、caspase-3和SOD2基因相对表达量显著上升(P<0.05),Bax、HO-1、Nrf2、GPX1和CAT基因相对表达量极显著上升;JC-1检测发现细胞中的红色荧光数量减少,荧光强度较弱,而绿色荧光数量明显增多且荧光强度较强;ROS检测显示细胞ROS水平极显著升高,即细胞氧化应激程度加剧。【结论】ZEA通过诱导山羊睾丸间质细胞形变及线粒体、内质网等细胞超微结构损伤,降低其损伤修复能力,促使线粒体膜电位水平降低和加剧氧化应激程度,而发挥其毒性作用。

紫玉米秸秆青贮饲料对热应激奶山羊能量利用、血浆代谢和抗氧化参数的影响

试验采用4×4拉丁方试验设计,选取8只体况良好的经产萨能奶山羊[体重(41.50±1.84)kg;平均数±标准差]随机分为4组,四种日粮处理分别为(粗饲料均占日粮干物质50%):粗饲料为稻草组(NC)、黏玉米秸秆青贮饲料组(PC1)、黏玉米秸秆青贮饲料+1 g/d商业紫玉米花青素提取物组(PC2)及紫玉米秸秆青贮饲料组(AR)。每期试验周期持续21 d,其中最后7 d为样品采集期。结果表明:1)羊舍平均温度、湿度与温湿指数分别为30.54℃、72.66%及82.28。2)黏玉米和紫玉米秸秆青贮饲料蛋白和能量价值参数差异均不显著(P>0.05)。3)NC组显示较低水平(P<0.05)的消化能、代谢能、总能表观消化能与总能利用率;AR组消化能利用率显著(P<0.05)高于其他组。4)NC组葡萄糖显著(P<0.05)低于PC2组和AR组;但尿素氮显著(P<0.05)高于其他组。5)PC2与AR组谷胱甘肽S-转移酶显著(P<0.05)高于NC和PC1组;PC2与AR组丙二醛显著(P<0.05)低于NC和PC1组。由此可见,紫玉米秸秆青贮饲料可提高热应激奶山羊的消化能利用率,改善能量利用;对血浆代谢参数无副作用影响,但可提升抗氧化参数,有缓解奶山羊热应激的潜力。