[Hg(SCN)_4]^(2-)对蛋白质的荧光猝灭反应及其分析应用

在pH=1.4～3.4的酸性介质中,[Hg(SCN)4]2-配阴离子可与牛血清白蛋白(BSA)、γ-球蛋白(γ-G)和血红蛋白(Hb)等蛋白质反应形成复合物,从而引起蛋白质荧光的猝灭.荧光猝灭的程度在一定范围内与Hg(Ⅱ)的浓度呈线性关系,可用于Hg(Ⅱ)的测定.该方法有较高的灵敏度,检出限(3σ)分别为4.4 ng/mL(BSA)、6.5 ng/mL(γ-G)和12.9 ng/mL(Hb),其中以BSA体系灵敏度最高.研究了[Hg(SCN)4]2-与蛋白质相互作用对荧光光谱的影响、适宜的反应条件和影响因素;结合吸收光谱的变化、温度的影响以及某些热力学参数讨论了荧光猝灭反应的机理;并以[Hg(SCN)4]2--BSA体系为例考察了共存物质的影响.结果表明,该方法具有良好的选择性.以BSA为探针采用荧光猝灭法测定了红药水中汞溴红和乙肝疫苗中硫柳汞的含量,结果令人满意.

X射线荧光光谱法测定铝锂合金中多元素含量

选择铝锂合金系列标样建立校准曲线,通过基本参数法校正基体效应和光谱干扰,结果表明,校正后多数元素校准曲线的标准偏差(SD)和品质因子(K)变得更小,曲线的离散度降低,线性关系得到较大改善,由此建立了波长色散X射线荧光光谱法测定铝锂合金中Mg、Si、Ti、Cr、Zr、Fe、Cu、Zn、Mn等9种元素含量的新方法。各元素的检出限均低于4.5μg/g。对E986铝锂合金标准样品进行精密度考察,各元素测定结果的相对标准偏差均低于0.9%;对铝锂合金实际样品进行分析,测定值与湿法及火花源原子发射光谱法的测定值吻合较好,能够满足铝锂合金中各元素的检测要求。

二安替比林甲烷分光光度法测定钒基合金中钛含量

钒-铬-钛合金是一种具有耐中子辐照、低活化特性、耐液态金属腐蚀、高温强度高等优点的新材料，在聚变反应堆、航空航天、高温等领域都具有广阔的应用前景。钒基合金中加入一定量钛可显著改善合金耐中子辐照损伤的能力。因此为保证材料的质量，需要对钛含量进行准确测定。

过氧化氢分光光度法测定镍钛铌合金中钛

镍钛铌合金是一种重要的功能材料,其中的钛含量对合金性能影响显著。实验以过氧化氢为显色剂,采用分光光度法测定镍钛铌合金中高含量钛。样品用稀硫酸溶解,加入过氧化氢在室温下形成黄色络合物,于410nm处测定吸光度。试验优化了酸度、过氧化氢用量、显色时间等影响体系显色的因素。在优化的试验条件下,钛质量浓量在70.0~80.0μg/mL范围内符合朗伯比尔定律,显色体系的表观摩尔吸光系数为1.5×102 L·mol-1·cm-1。样品溶液无需分取而直接测定,避免了稀释带来的误差。镍的本色干扰采用基体匹配法消除。按照实验方法测定两个镍钛铌合金样品中钛,测定结果的相对标准偏差(RSD,n=6)分别0.40%和0.30%,并与滴定法测定结果相一致。方法实现了镍钛铌合金中高含量钛的准确测定。

偶氮胂Ⅲ光度法测定铝合金中微量钪

在pH 1.8的HCl-KCl缓冲溶液中,钪与偶氮胂Ⅲ形成稳定的紫红色络合物,其最大吸收峰在680nm处。研究了酸度、偶氮胂Ⅲ用量、反应时间、共存元素等因素对显色反应的影响。结果表明：酸度和偶氮胂Ⅲ用量对体系吸光度影响较大,最佳pH值和偶氮胂Ⅲ体积范围分别为1.5~2.0和1.5~2.5mL;温度对显色反应影响不大,室温下显色5min即可测定,且吸光度在120min内基本保持不变;铁、钛、锆严重干扰钪的测定,采用铜铁试剂沉淀分离的方法可消除其影响。在最佳条件下,钪在0~1.0μg/mL范围内符合比尔定律,表观摩尔吸光系数为1.8×104 L·mol-1·cm-1。方法用于铝合金中微量钪的测定,相对标准偏差（RSD）不超过2%,测定结果与标样认定值或对比方法（电感耦合等离子体原子发射光谱法）测定结果基本一致。

火焰原子吸收光谱法测定钒基合金中铬的含量

应用火焰原子吸收光谱法(FAAS)测定钒基合金(V-Cr-Ti三元合金)中铬的含量。取样0.1000g,用硫酸(1+1)溶液5mL及硝酸2mL加热溶解后蒸发至冒硫酸烟。冷却后移至100mL容量瓶中,加水定容。分取适量样品溶液(其中含Cr约为0.1~0.5mg)置于另一100mL容量瓶中,加入20g·L^-1硫酸钾溶液10mL(作为对共存元素V和Ti的抗干扰试剂,同时起到增敏作用明显提高信号强度),加水定容为100.0mL(溶液中含硫酸<0.5%),按仪器工作条件测定溶液中铬的含量。在优化的试验条件下,铬的质量浓度在1.00~5.00mg·L^-1内与相应的吸光度之间呈线性关系。应用此方法测定了实际样品中铬的含量,测定值的相对标准偏差(n=6)为0.64%,以实际样品为基体,按照标准加入法在2个浓度水平上进行回收试验,测得回收率的平均值为97.1%。

镉-碘化钾-罗丹明B体系分光光度法测定微量镉

目前低含量镉的测定方法主要有分光光度法、分子荧光法、电化学法、电感耦合等离子体发射光谱法、原子吸收光谱法等。其中分光光度法以其准确、灵敏、操作简便、分析成本低易于普及等优点,在分析检测中得到了广泛的应用。分光光度法测定镉的试剂较多,常用的有双硫腙、溴苯并噻唑偶氮萘酚、吡啶偶氮二乙氨基酚等,这些试剂在显色后大多需要使用毒性较大的有机溶剂进行配合物的萃取,这不仅操作繁琐,而且对操作者健康不利。已知镉的卤离子配合物可与碱性染料形成三元离子缔合物,本文选用罗丹明B作显色剂,研究了在聚乙烯醇存在下,碘化镉配阴离子与罗丹明B的显色反应,发现在聚乙烯醇存在的酸性介质中,镉与碘化钾及罗丹明B反应形成紫红色三元离子缔合物,该缔合物的最大吸收波长为592nm,摩尔吸光系数为2.38×10~5 L·mol^(-1)·cm^(-1),镉的质量浓度在0~0.12μg·mL^(-1)范围内符合比耳定律。方法用于铝合金中微量镉的测定,准确度良好。

[Hg(SCN)_4]^(2-)配阴离子二级散射和倍频散射光谱法测定蛋白质

在pH=1.0~4.5的稀硫酸介质中,[Hg(SCN)4]2-配阴离子能与人血清白蛋白(HSA)、α-糜蛋白酶(α-Chy)、牛血清白蛋白(BSA)、溶菌酶(Lyso)和γ-球蛋白(γ-G)等蛋白质反应形成复合物,此时将引起二级散射(SOS)和倍频散射(FDS)的显著增强.最大SOS峰和最大FDS峰分别位于668 nm和396 nm附近,散射增强(ΔI)在一定范围内与蛋白质的质量浓度成正比,两种方法对不同蛋白质的检出限(3σ)分别在17.30~43.53 ng/mL(SOS)和18.38~54.04 ng/mL(FDS)之间.据此发展了用SOS和FDS法灵敏、简便、快速测定血清中总蛋白的新方法.考察了共存物质的影响,结果表明该方法具有较好的选择性.

火焰原子吸收光谱法测定纯铜和铜合金中铅

以往采用火焰原子吸收光谱法(FAAS)测定纯铜和铜合金中铅时,多采用分离富集法对铅进行富集或者采用标准加入法绘制校准曲线以消除基体的影响,操作较为繁琐。实验考察了不同含量铜基体对铅测定的影响,结果表明,当溶液中铜的质量浓度不大于20mg/mL时,铜对铅测定的影响基本可忽略,当溶液中铜的质量浓度为20~80mg/mL时,铜对铅测定的干扰不可忽略。因此实验提出,对于铅质量分数不小于0.05%的样品,采用铅标准溶液系列直接制作校准曲线,对于铅质量分数小于0.05%的样品,采用不含铅的高纯铜进行基体匹配绘制校准曲线的方法以消除基体干扰,最终实现了FAAS对纯铜和铜合金中质量分数大于0.002%的铅的测定。考察了酸介质和酸度对测定的影响,最终选择硝酸(1+1)溶解样品。根据不同样品量和不同的稀释因子,通过计算设计了3种系列标准溶液绘制校准曲线,使得校准曲线用标准溶液中酸的浓度与样品溶液中酸的浓度相同从而避免了酸度对测定的影响。将实验方法应用于纯铜、铜合金标准样品中质量分数在0.004%~2.7%之间铅的测定,测得结果与认定值基本一致,相对标准偏差(RSD,n=7~9)为0.7%~1.8%。

Pd(Ⅱ)与还原型辅酶Ⅰ和溶菌酶相互作用的荧光和共振瑞利散射光谱研究

在弱酸性介质中,Pd(Ⅱ)能分别与还原型辅酶Ⅰ(NADH)和溶菌酶(Lyso)形成1∶1和2∶1的复合物,并导致NADH和Lyso的荧光猝灭,但不能引起共振瑞利散射(RRS)的变化和增强.但是当Pd(Ⅱ)与NADH和Lyso同时作用并形成n(Pd(Ⅱ))∶n(NADH)∶n(Lyso)=2∶2∶1的三元复合物时,不仅能使Lyso的荧光猝灭,而且能引起RRS显著增强并出现最大散射波长位于309 nm附近的RRS光谱.研究了Pd(Ⅱ)-NADH-Lyso反应体系的荧光和RRS光谱特征,适宜的反应条件,探讨了反应机理及Pd(Ⅱ)与NADH和Lyso的结合位点和结合模式,考查了荧光猝灭和RRS增强的原因.当Pd(Ⅱ)和Lyso过量时,散射增强(ΔI)在一定范围内与NADH的质量浓度成正比,对NADH的检出限为5.7 ng/mL(8.6×10-9mol/L).同样当Pd(Ⅱ)和NADH过量时,散射增强(ΔI)在一定范围内与Lyso的质量浓度成正比,检出限为15.1 ng/mL(1.06×10-9mol/L).因此RRS光谱不仅可为研究金属离子与不同生物分子之间的相互作用提供新的信息,而且也为高灵敏度定量测定痕量NADH和Lyso这样的生物分子创造了条件.

光电直读光谱法测定金属材料中杂质的防污染措施

光电直读光谱法测定杂质时,制样、测试过程中产生的污染会导致仪器描迹、仪器校准、试样测试数据重复性差,导致测定结果不准确。本文分析了光电直读发射光谱法测定杂质过程中污染产生的影响、判定、来源,针对不同的污染情况,采取了相应的物理、化学清洁、连续测试防污染措施。试验结果表明,这些防污染措施是有效的。

[Hg(SCN)4]^2-与蛋白质相互作用的共振瑞利散射光谱及其分析应用

在pH1.0～4.5的稀硫酸介质中,[Hg(SCN)4]2-配阴离子与人血清白蛋白(HSA)、α-糜蛋白酶(α-Chy)、牛血清白蛋白(BSA)、溶菌酶(Lyso)和γ-球蛋白(γ-G)等蛋白质反应形成复合物,此时将导致共振瑞利散射(RRS)的显著增强,也能引起吸收光谱的变化和荧光猝灭,同时还观察到圆二色(CD)光谱特征的改变.本文主要研究[Hg(SCN)4]2--蛋白质复合物的RRS光谱特征、适宜的反应条件和影响因素,以及分析化学性质,并以[Hg(SCN)4]2--Lyso体系为例,结合吸收、荧光和圆二色光谱的变化,对复合物的结合位点、结合模式以及散射增强的原因进行了讨论.RRS法具有较高的灵敏度,它对不同蛋白质的检出限在4.6～10.8ng/mL之间,据此建立了以[Hg(SCN)4]2-配阴离子作探针测定人血液和尿液中蛋白质的新方法.

普罗帕酮与曙红Y的双荧光猝灭反应及其分析应用研究

曙红Y(EY)是一种荧光染料,它具有强的荧光,而普罗帕酮(PPF)也是一种荧光物质.在pH 2.5～3.8的酸性溶液中,EY的最大发射波长(λem)位于549 nm,PPF的λem则在419 nm处,两者的荧光光谱相距较远而能很好地分开.当PPF与EY反应形成复合物时,观察到两者的荧光均发生猝灭,因此这是一种双荧光猝灭的反应体系.当用EY作探针测定PPF时,检出限(3σ)为9.4 ng/mL;反之当用PPF作探针测定EY时,检出限为259.7 ng/mL,前者具有很高的灵敏度,后者灵敏度较低,因此方法更适合于对痕量PPF的定量测定.研究了荧光猝灭反应的适宜条件、影响因素和分析化学特性,并探讨了反应机理和复合物的组成和结构,结果表明两者通过静电引力、疏水作用、芳基堆积作用和氢键作用而形成1∶1的复合物.荧光猝灭是一种静态猝灭过程.因此以EY作探针荧光猝灭法测定PPF为例,考察了方法的分析应用.

某些芳香族氨基酸作探针荧光猝灭法测定秋水仙碱

在适当的酸性介质中,秋水仙碱(COL)能与色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)和苯丙氨酸(Phe)等芳香族氨基酸反应并形成结合产物,此时将引起上述氨基酸的荧光发生猝灭,最大猝灭波长分别位于350nm(Trp),304nm(Tyr),284nm(Phe).其荧光猝灭值(ΔF)在一定范围内与秋水仙碱成正比.当用Trp和Tyr作探针时,荧光猝灭法测定秋水仙碱具有高灵敏度,其检出限分别为15.1ng/mL(3.78×10-8mol/L)和19.8ng/mL(4.96×10-8mol/L).文中研究了适宜的反应条件和影响因素,考察了共存物质的影响,表明方法有良好的选择性,可用于秋水仙碱的测定.文中讨论了复合物的组成、结合力和结合模式.通过温度的影响以及Stern-Volmer作图,判断该反应为静态猝灭反应,它们的结合常数(K)在25℃时分别为9.7×106(COL-Trp),8.9×106(COL-Tyr)和6.3×105(COL-Phe).其作用力主要是芳基堆集作用和氢键结合作用,而芳基堆集作用是发生荧光猝灭的主要原因.