重组戊型肝炎氢氧化铝佐剂疫苗的磷含量与免疫效力关系研究

目的探索氢氧化铝佐剂戊肝疫苗的免疫原性与疫苗中PO_4^(3-)浓度的关系,并分析抗体滴度与抗原在羊淋巴液中吸附率有无相关性。方法用不同浓度PO_4^(3-)处理氢氧化铝佐剂制备试验疫苗,腹腔免疫Balb/c小鼠,ELISA法定量检测免疫后不同时间血清抗体滴度,同时采用钼酸铵还原法检测试验疫苗离心沉淀中的磷含量,根据兰格缪尔方程计算抗原在含不同浓度PO_4^(3-)的佐剂表面的最大吸附量(Γm)。试验疫苗在羊淋巴液中的抗原吸附率采用ELISA法检测。结果随疫苗中PO_4^(3-)浓度增加,抗原最大吸附量(Γm)减小,抗原在羊淋巴液中的吸附率下降,免疫血清抗体滴度渐次增加,直至达到平稳状态。结论在一定范围内增加疫苗磷酸根含量可减小抗原在羊淋巴液中吸附率,降低佐剂对抗原的吸附程度,提高疫苗免疫抗体滴度。

蝎毒活性肽BmK AS的基因克隆与表达

目的克隆东亚钳蝎活性肽BmKAS的基因,在大肠杆菌中进行表达。方法利用PCR技术从蝎尾cDNA pool中扩增BmKAS基因,通过基因工程方法构建表达载体pET28a-BmKAS,在E.coli中进行表达,表达产物为包含体。采用分步稀释复性法对表达产物进行体外变复性。结果BmKAS以包含体的形式得到表达,表达量的质量约占菌体总蛋白质量的31%。表达产物复性后,通过离子交换柱层析进一步纯化,达到了电泳纯,收率为1.6 mg.L-1。结论首次对具有多种药理活性的蝎毒活性肽BmKAS进行了表达,并对表达产物进行体外变复性研究,获得了毫克级的收率,满足了深入研究需要。

瓜儿豆胶和刺槐豆胶抑制阿斯巴甜甜感强度的机制探索

目前大分子水溶胶对于味觉物质的影响机制研究主要集中于胶体自身的性质以及胶体结构与味物质的相互作用.本文选择了食品中常用的瓜儿豆胶(GG)和刺槐豆胶(LBG),研究了这两种非离子水溶胶对甜味剂阿斯巴甜(APM)感官甜度的影响,并探索了其中的物理化学机制.感官实验结果表明,高浓度的瓜儿豆胶和刺槐豆胶对阿斯巴甜的甜度有抑制作用,且随着水溶胶浓度的增高,达到高分子临界交叠浓度C*后,抑制作用更明显.基于人工受体模型,利用等温滴定量热(ITC)技术发现,两种水溶胶存在条件下阿斯巴甜与受体模型相互作用的结合常数急剧减小.另外,通过对甜味剂存在下非离子水溶胶的水分分布、扩散性质的考察,发现随水溶胶浓度增加,体系的结合水含量均增多,尤其是水溶胶浓度达到临界交叠浓度(C*)后增多的现象更明显;同时,分子的扩散也受到了阻碍,从而导致阿斯巴甜感官甜度的降低.本研究表明,探索大分子水溶胶对甜味剂分子与受体结合差异性的影响、溶液中水分子的弛豫性质及赋存状态、结合体系的粘度及扩散性质的研究,为理解大分子水溶胶对甜味影响的物理化学机制提供更多的信息.

氢氧化铝佐剂对重组大肠杆菌表达的戊型肝炎239抗原的吸附研究

目的:探索氢氧化铝佐剂对重组大肠杆菌表达的戊型肝炎239抗原(HEV239)的吸附力种类以及在戊肝疫苗制备研究中的应用。方法:用兰格缪尔吸附方程计算在不同浓度氯化钠(NaCl)或乙二烯乙二醇(EG)条件下,HEV239在氢氧化铝佐剂表面的最大吸附量(Γm),根据Γm随NaCl或EG浓度变化趋势判断吸附作用力的种类。配制添加多羟基化合物且含不同浓度磷酸盐的试验疫苗,计算Γm并绘制其随磷浓度变化的曲线。ELISA法定量检测并计算含不同浓度磷的试验疫苗与羊淋巴液作用12h后抗原的吸附率。结果:HEV239的Γm随离子强度(NaCl浓度)或疏水物质浓度(EG体积)增加而降低,也随磷酸盐浓度增加而降低。疫苗在羊淋巴液中的抗原吸附率随磷酸盐浓度增加而降低,最终达到稳定水平。结论:HEV239在氢氧化铝佐剂表面的吸附受到静电引力和疏水作用力的双重影响。利用此机理向疫苗中添加磷酸盐和多羟基化合物可降低疫苗抗原在制剂中的吸附量和在羊淋巴液中的吸附率。