氧化亚铁硫杆菌铁氧化系统分子生物学研究进展

氧化亚铁硫杆菌（Thiobacillus ferrooxidans,简称T.f）是目前研究最多、最具经济价值的浸矿微生物。由于该菌的能量代谢对于生物浸矿起决定作用,因此其机制的研究必然能促进对该菌生理特性的认识及其遗传改造。氧化亚铁硫杆菌生长方式代表了迄今所知的能够进行生长的热力学极限,可供该菌生长利用的△Eh仅有340mV,氧化Fe2+所能得到的能量很少。在 Fe2+氧化过程中,电子通过电子传递链最终传递给氧,

维生素 C 对 LDL 受体活性的影响

研究了维生素Ｃ（ＶＣ）对培养的人皮肤成纤维细胞低密度脂蛋白（ＬＤＬ）受体活性的影响。从ＬＤＬ受体饱和分析和Ｓｃａｔｃｈａｒｄ作图以及单点分析表明，ＶＣ可增加细胞ＬＤＬ受体量，但不影响受体对ＬＤＬ的亲和力。提示ＶＣ通过增加ＬＤＬ受体活性而促进胆固醇代谢，具有一定的抗动脉粥样硬化作用。

大肠杆菌磷酸果糖激酶基因在野生型专性自养嗜酸性氧化硫硫杆菌Tt-Z2中的表达

利用PCR技术扩增E .coliK 12磷酸果糖激酶 1基因 (pfkA) ,将该基因与广泛寄主的IncQ质粒pJRD2 15连接构建重组质粒pSDK 1,该质粒可与pfk基因缺陷株E .coliDF10 10互补 .通过接合转移的方式将其导入专性自养极端嗜酸性氧化硫硫杆菌Tt Z2中并得到表达 .pSDK 1在宿主Tt Z2中有较好的稳定性 ,在无选择压力条件下连续传5 0代仍可保留 6 8% .酶活性测定表明 ,pSDK 1的pfkA基因在缺陷株E .coliDF10 10中表达水平略高于出发菌株E .coliK 12 ;而在氧化硫硫杆菌中则以较低水平进行表达 .葡萄糖可促进含pSDK 1的氧化硫硫杆菌Tt Z2的生长 ,而对照菌株的生长则未受明显影响 .说明重组菌可部分利用葡萄糖作为碳源而生长 .

大肠杆菌磷酸果糖激酶基因在极端嗜酸性氧化硫硫杆菌中的表达

构建了含大肠杆菌磷酸果糖激酶 (EC 2 .7.1 .1 1 )基因pfkA的重组质粒pSDK 1 ,利用大肠杆菌pfk缺陷株筛选含目的基因的重组质粒 ,通过接合转移的方式将其导入氧化硫硫杆菌Tt Z2中 ,接合转移频率达 2 6× 1 0 - 6 。重组质粒在Tt Z2中有较好的稳定性 ,在无选择压力条件下传代 5 0次基本保持稳定 (重组质粒保留 68%以上 )。酶活性测定、SDS PAGE及RT PCR结果表明 ,pfkA基因在氧化硫硫杆菌中得到表达 ,但其表达水平低于大肠杆菌。葡萄糖可促进含pSDK 1的氧化硫硫杆菌Tt Z2的生长 ,而对照菌株的生长则未受明显影响 。

维生素C对培养人胚成纤维细胞LDL受体活性的影响

研究了维生素Ｃ对培养的人胚皮肤成纤维细胞低密度脂蛋白（ＬＤＬ）受体活性的影响。从ＬＤＬ受体饱和分析和Ｓｃａｔｃｈａｒｄ作图以及单点分析表明，维生素Ｃ可增加细胞ＬＤＬ受体数量，但不影响受体对ＬＤＬ的亲和力。提示维生素Ｃ可通过增加ＬＤＬ受体数量而促进胆固醇的代谢，具有一定的抗动脉粥样硬化作用。

大肠杆菌磷酸果糖激酶基因在氧化硫硫杆菌Tt-7中的表达

专性自养极端嗜酸性氧化硫硫杆菌缺乏EMP、ED途径以及三羧酸循环的关键酶 (如磷酸果糖激酶等 ) ,不能氧化有机物获得能量 .本文利用PCR技术扩增E .coliK 12磷酸果糖激酶 1基因 (pfkA) ,将该基因与广泛寄主的IncQ质粒pJRD2 15连接构建重组质粒pSDK 1,该质粒可与pfk基因缺陷株E .coliDF10 10互补 .通过接合转移的方式将其导入氧化硫硫杆菌Tt 7中并得到表达 .pSDK 1在宿主Tt 7中有较好的稳定性 ,在无选择压力条件下连续传 5 0代仍可保留 75 % .酶活性测定表明 ,pSDK 1的pfkA基因在缺陷株E .coliDF10 10中表达水平〔(96 .6± 0 .6 6 )U/g蛋白〕略高于原始菌株E .coliK 12〔(85 .9± 1.12 )U/g蛋白〕 ;而在氧化硫硫杆菌中则以较低水平进行表达〔(12 .4± 0 .73)U/g蛋白〕 ,并且其表达水平不受培养基中葡萄糖的影响 .实验表明 ,在无机盐培养基中加入葡萄糖时 ,含质粒pSDK 1的氧化硫硫杆菌Tt 7可利用培养基中的葡萄糖而加快生长 ,而对照菌株的生长则未受明显影响 ;但是重组菌利用葡萄糖的速度较缓慢 .图 5表 2参

乳腺癌与其周围正常组织17β羟类固醇脱氢酶活性的比较

测定了１６例乳腺癌及癌旁正常组织标本的１７β羟类固醇脱氢酶（１７β－ＨＳＤ）活性和Ｅ２水平。结果显示，癌组织１７β－ＨＳＤ活性较正常组织明显下降，而Ｅ２水平升高。提示该酶活性及Ｅ２水平的改变与乳腺癌有关，但二者的变化无明显相关性（ｒ＝－０．３５４，Ｐ＞０．１）

9-顺-维甲酸对肺癌细胞周期及周期因子表达的影响

目的 探讨 9 顺 维甲酸对肺癌细胞周期及周期因子cyclinD1和cdk4表达的影响。方法 用 9 顺 维甲酸处理细胞 2 4h后 ,在观察细胞生长、流式细胞仪分析细胞周期的基础上 ,用RT PCR方法分析细胞周期因子cyclinD1和cdk4表达的变化。结果 9 顺 维甲酸作用于肺癌细胞 2 4h以后 ,细胞增殖减慢 ,G0 G1期细胞明显增多 ,S期细胞减少 ;PG ,SPC A1和L78细胞的cyclinD1表达下降显著 ;PG ,A549和L78细胞的cdk4表达下降显著。结论 9 顺

一株中度嗜热嗜酸硫氧化杆菌的分离和系统发育分析

从云南腾冲温泉酸性水样分离得到一株中度嗜热嗜酸硫氧化杆菌MTH 0 4 ,对分离菌株进行了形态、生理生化特性研究及 1 6SrDNA序列分析。该菌株为革兰氏阴性细菌 ,短杆状 ,菌体大小 (0 6～ 0 8) μm× (1～ 2 ) μm ,化能自养 ,可利用硫磺、四硫酸盐、硫代硫酸盐为能源生长 ,不能利用蛋白胨、葡萄糖、酵母粉 ,也不能进行混合型生长。最适生长温度在 4 0℃～ 4 5℃之间 ,最适生长pH 2 0～ 3 0 ,代时 8h。以 1 6SrDNA序列同源性为基础构建了包括 1 3株相关种属在内的系统发育树 ,结果表明 ,MTH 0 4与喜温硫杆菌 (Thiobacilluscaldus)处于同一进化树分支中 ,相似性达 99 5

氧化亚铁钩端螺旋菌在固体平板上的培养及形态观察

用底层加入嗜酸性异养细菌Heterotroph Acidiphilium SJH的琼脂糖双层培养基,成功地培养得到氧化亚铁钩端螺旋菌(Leptospirillum ferrooxidans)的单菌落,并在电镜下观察到了该菌的形态。

9-顺-维甲酸对肺腺癌细胞cyclin D1、cdk4转录的影响

目的:检测9-顺-维甲酸处理前后人肺腺癌细胞株PG、A_(549)、SPC-A_1的cyclinD1、cdk4转录水平的变化,探讨9-顺-维甲酸抑制肺腺癌细胞生长的分子机制。方法:采用相对定量逆转录PCR方法,分析细胞周期因子cyclinD1、cdk4转录的变化。结果:9-顺-维甲酸既可以降低PG、A_(549)的cyclinD1转录(P<0.01),又可以降低PG、SPC-A_1的cdk4的转录(P<0.01或P<0.05)。结论:9-顺-维甲酸对肺腺癌细胞的生长抑制作用,与其调控细胞周期因子cyclinD1、cdk4的表达密切相关。

极端嗜酸性专性化能自养硫细菌有机质代谢的研究进展

极端嗜酸性专性化能自养硫细菌具有独特的生理特性,在农业、细菌冶金、含硫废水处理以及环境保护等方面发挥着重要作用,但这类细菌在其特殊能源缺乏时不能代谢有机质,生长缓慢,代时长,细胞得率低,限制了它在实际生产中的应用效率。对其进行遗传改造,构建能够利用有机质快速生长的基因工程菌,将为这类细菌的工业化应用提供一条可行的途径。主要对极端嗜酸性专性化能自养硫细菌有机质代谢的研究进展进行了综述,其中包括有机化合物的抑制作用、有机化合物的有限利用、中心代谢途径及物质的转运等,还包括专性化能自养硫细菌有机质代谢遗传改造研究的最新进展。

9-顺维甲酸对人肺腺癌细胞维甲酸受体转录的影响

目的：观察９－顺维甲酸（９－ｃｉｓ－ＲＡ）处理前后人肺腺癌细胞株ＰＧ和Ａ５４９维甲酸受体（ＲＡＲｓ）及维甲类Ｘ受体 （ＲＸＲｓ）不同时相ｍＲＮＡ转录水平的表达。方法：用ＲＴ－ＰＣＲ相对定量检测人肺腺癌细胞株ＰＧ和Ａ５４９加９－ｃｉｓ－ＲＡ前后ＲＡＲｓ和ＲＸＲｓ ｍＲＮＡ转录水平。结果：应用９－ｃｉｓ－ＲＡ后，两细胞株的ＲＡＲα和ＲＡＲβ－ｍＲＮＡ转录水平较对照组明显增高，其余受体转录无明显变化。结论：受体ＲＡＲα和ＲＡＲβ可能与９－ｃｉｓ－ＲＡ对两细胞株的生长抑制和诱导凋亡作用有密切关系。

9-顺-维甲酸对人肺鳞癌细胞分化和凋亡的影响

目的 :研究 9 顺 维甲酸 (9 cis RA)对人肺鳞癌L78细胞、A2细胞分化和凋亡的影响。方法 :以 1和 5 μmol/L 9 cis RA处理肿瘤细胞株 ,分别于 0、12、2 4、36、4 8、72h检测对照组和用药组细胞数及细胞HE染色后的形态变化 ,应用流式细胞术分析细胞周期分布、Bcl 2表达和凋亡细胞数。结果 :9 cis RA可抑制肺鳞癌细胞生长 ;用药后细胞分化征明显 ,可见凋亡细胞。流式细胞计数显示 ,用药组细胞G0 /G1百分率明显升高 ,S期细胞百分率下降 ,细胞凋亡率增加 ,Bcl 2的表达下降。结论 :9 cis RA能抑制人肺鳞癌L78细胞、A2细胞增殖 ,诱导细胞分化和凋亡。

骨形态发生蛋白2对体外培养结肠癌HT-29细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨骨形态发生蛋白2对体外培养的结肠癌细胞增殖、凋亡的影响。方法重组人骨形态发生蛋白(rhBMP-2)不同浓度(分别为1 ng/ml、10 ng/ml、100 ng/ml)、不同时间干预细胞,采用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法(MTT法)检测rhBMP-2对细胞增殖的影响;Hoechest 33342染色观察细胞形态变化;An-nexinV/PI染色流式细胞仪分析细胞凋亡。结果BMP-2对HT-29细胞有抑制增殖,诱导凋亡的作用,呈剂量依赖性,100 ng/ml浓度24 h内抑制作用最强。随时间延长抑制作用无显著性差异。BMP-2作用24 h后Hoe-chest 33342染色可见核固缩、核碎裂等细胞凋亡表现增加明显。AnnexinV/PI染色流式细胞仪分析显示作用24 h后细胞凋亡较对照组有显著性差异。结论BMP-2在一定作用时间、浓度条件下对结肠癌HT-29细胞有明确的抗增殖促凋亡作用。

正常人胚肺HELF、人肺腺癌细胞A549和转染RARβ表达载体的A549蛋白质组差异分析

目的:观察人肺腺癌细胞A549、正常人胚肺HELF、转染RARβ表达载体的A549细胞在蛋白质组学中的差异。方法:固相pH梯度双向凝胶电泳分离A549、HELF、RARβA549细胞的总蛋白,银染显色,应用软件对所得结果进行统计学分析。结果:A549的平均蛋白质点数为(1154±86)个,HELF的平均蛋白质点数为(1338±79)个,RARβA549的平均蛋白质点数为(987±64)个,不同胶间蛋白质点的位置偏差在IEF为(2.97±0.34)mm,在SDSPAGE方向为(2.73±0.45)mm,差异表达分析发现,A549细胞和HELF细胞双向电泳分离图谱有893个蛋白质点匹配;A549中有329个点未被匹配,HELF细胞中有445个点未被匹配。A549和RARβA549进行匹配,有634个点相互匹配,A549有520个点未被匹配,RARβA549有205个点未被匹配。方差分析结果:F=15.488,P<0.05。A549组与HELF组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);A549组与RARβA549组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:人肺腺癌细胞A549、正常人胚肺HELF、转染RARβ表达载体的A549细胞中存在差异蛋白。

表皮生长因子受体、多胺与肺癌的关系

探讨表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）和多胺（ＰＡ）对人肺癌及正常肺组织生长、分化的影响。方法放射性配体结合法检测ＥＧＦＲ含量；高效液相色谱分析法测ＰＡ含量。结果肺癌组织中ＥＧＦＲ的含量（５．６２±４．２６ｆｍｏｌ／ｍｇ膜蛋白）高于非癌肺组织（３．９０５±２．２７９ｆｍｏｌ／ｍｇ膜蛋白），有显著性差异（Ｐ＜０．０１）；肺癌组织ＰＡ的含量亦高于正常肺组织（Ｐ＜０．０１）。结论ＥＧＦＲ和ＰＡ可促使肺癌发展。

子宫肌瘤组织17β-羟类固醇脱氢酶活性的测定

为研究１７β－羟类固醇脱氢酶（１７β－ＨＳＤ）与子宫肌瘤的关系，用３Ｈ－Ｅ２（终浓度０．５ｍｏｌ／Ｌ）作底物，以３Ｈ－Ｅ２氧化为３Ｈ－Ｅ１的量表示１７β－ＨＳＤ的活性，经薄层层析后分别测定３Ｈ－Ｅ２、３Ｈ－Ｅ１的每分记数。结果显示，子宫内膜增殖期肌瘤组织Ｅ２含量低于正常肌层，而分泌期高于子宫肌层，但差别无显著性；分泌期子宫肌瘤Ｅ２转换率最低，提示此时１７β－ＨＳＤ活性最低。３３．３３％（４／１２）肌瘤患者子宫内膜反应不符合正常月经周期表现，４１．６％（５／１２）患者伴卵巢滤泡囊肿，９１．６％（１１／１２）属多发性子宫肌瘤。表明Ｅ２含量与１７β－ＨＳＤ活性改变有关，是子宫肌瘤发生。

LDL-ACM复合物对胃癌细胞株(SGC-7901,NKM-45)的细胞毒作用

以低密度脂蛋白（LDL）作为脂溶性抗癌瘤药物阿克拉霉素（ACM）的载体，用四甲基偶氮唑蓝比色分析（MTT）、3H－TdR掺入及细胞蛋白质合成法研究了LDL－ACM复合物和游离ACM对胃癌细胞株（SGC－7901，NKM－45）以及正常人胃成纤维细胞的细胞毒作用。结果显示，LDL－ACM复合物对癌瘤细胞的杀伤作用明显强于游离ACM，对SGC－7901的杀伤作用尤其显著；而该复合物和游离ACM对胃成纤维细胞的作用无明显差异；LDL－ACM复合物对癌瘤细胞DNA及蛋白质合成的抑制作用显著大于游离ACM。提示LDL受体介导的药物细胞毒作用强于单独使用游离ACM，用LDL作为药物载体进行癌瘤导向治疗具有广阔发展前景。