虎杖的微生物发酵转化及其发酵产物提取分离的研究

利用能产生β-葡萄糖苷酶的一株根霉菌种与虎杖共发酵，将虎杖苷转化为白藜芦醇，同时将结合蒽醌苷转化为大黄素。通过优化乙醇浸渍与大孔树脂吸附等方法使白藜芦醇和大黄素分离提取达到最佳提取效果。

芽孢杆菌发酵炮制中药红花增强溶血栓药效研究

目的利用具有高纤溶酶活性的地衣芽孢杆菌C213发酵炮制中药红花以增强整体溶血栓药效的研究。方法应用系统数值化及数值系统调控技术对发酵炮制条件进行优化,用角叉菜胶法进行了小鼠尾部血栓实验及测定了大鼠纤溶及凝血指标。结果在同等剂量下(1000U·mL-1)A红发组(红花与C213共发酵组)比其余各组均有缩短血栓长度(P<0.01);明显延长凝血酶原时间(PT)(P<0.05)、凝血酶时间(TT)(P<0.05)和活化的部分凝血活酶时间(APTT)(P<0.01);显著缩短优球蛋白溶解时间(ELT)(P<0.01)的作用。结论红花通过C213菌种发酵炮制后可提高纤溶活性、抗凝作用,增强溶血栓药效。

γ-多聚谷氨酸产生菌高效诱变育种的研究

设计了几组不同的诱变条件对γ多聚谷氨酸生产菌BacilluslicheniformisATCC9945A进行诱变,诱变后将所有菌株混合,以此未经筛选的混合菌共同发酵,并以终产量为指标对发酵条件进行连续的定向调控,使发酵条件逐渐向高产正突变株倾斜,产量得以逐步提高.同时在混合菌状态下找到适合高产正突变株的发酵条件,以此发酵条件作为筛选平板,对混合菌分离纯化,选育到γPGA高产菌Zγ29,产量是出发菌株的4.14倍,筛选条件即为该突变株的最佳发酵条件.

重组葡激酶的高效表达与纯化

通过发酵和纯化条件的研究,建立适合重组葡激酶工程菌的发酵和纯化工艺.对重组葡激酶工程菌发酵过程中的pH、饱和氧浓度、补料以及诱导时间进行考察,获得该工程菌的高效表达条件.在此条件下,重组葡激酶表达水平在50%以上,并以活性可溶性状态存在于细胞内;经渗滤,超滤浓缩、透析,DEAE-Sepharose FF层析和SP-Sepharose FF层析后,经SDS-PAGE和HPLC分析,纯度达到99%.在还原条件下进行SDS-PAGE分析,测得该酶相对分子质量为15.5kD,等电聚焦显示其等电点为8.4.

虎杖中虎杖苷的微生物发酵转化研究

从中药材虎杖中筛选到一株具有转化虎杖苷能力的根霉菌株T-34,利用该菌株产生的β-葡萄糖苷酶能将虎杖苷转化为白藜芦醇.虎杖的液体发酵动力学研究结果显示:根霉菌T-34能够直接利用虎杖煮提液中的碳源、氮源等作为其生长所需的营养,并且产生的β-葡萄糖苷酶与底物虎杖苷的转化具有相对应的关系,用HPLC测得虎杖苷的转化率达98%.

静注人免疫球蛋白生产工艺中活化凝血因子Ⅺ的形成与去除

目的调查活化凝血因子Ⅺ(activated coagulation factorⅪ,FⅪa)在静注人免疫球蛋白各个生产环节中的分布及含量,分析其在生产过程中的主要形成过程、去除过程及其影响因素。方法采用底物显色法对合并血浆、组分Ⅰ+Ⅱ+Ⅲ(fractionⅠ+Ⅱ+Ⅲ,FⅠ+Ⅱ+Ⅲ)上清液、FⅠ+Ⅱ+Ⅲ沉淀溶解液、FⅠ+Ⅲ沉淀溶解液、FⅠ+Ⅲ上清液、FⅡ沉淀溶解液、FⅡ精制滤过液以及超滤配制后、低pH孵放后制品的FⅪa含量进行检测。添加硅藻土对合并血浆的FⅪ进行激活,将FⅠ+Ⅱ+Ⅲ沉淀溶解液采用双层滤纸过滤或离心进行FⅪa去除。结果FⅠ+Ⅱ+Ⅲ分离阶段合并血浆FⅪ被激活形成FⅪa,其激活量为合并血浆的2500倍。FⅠ+Ⅲ分离阶段可去除合并血浆FⅪ活化后形成的约99.8%的FⅪa。结论FⅠ+Ⅱ+Ⅲ分离阶段为FⅪa形成的主要阶段,该阶段硅藻土启动内源性凝血途径形成FⅪa;FⅠ+Ⅲ分离阶段为FⅪa去除的主要阶段,该阶段废弃吸附了FⅪa的硅藻土以去除工艺中形成的FⅪa;硅藻土为FⅪa形成与去除的主要影响因素。