表达绿色荧光蛋白的坦布苏病毒的构建与鉴定

报告病毒在高通量抗病毒药物筛选、活体动物体内成像及新型疫苗研发等方面具有重要应用价值。通过反向遗传操作技术,以坦布苏病毒JXSP株感染性克隆为基础,采用两种策略构建报告病毒,即分别在病毒基因组5′UTR和C蛋白基因、N S5基因和3′UTR间引入外源基因EGFP,通过融合PCR获得全长cDNA PCR产物,体外转录生成mRNA,转染至BHK-21拯救重组病毒并研究其生长特性。结果显示,利用5′UTR-C位点构建的报告病毒mRNA转染BHK-21细胞后能观察到明显的绿色荧光;报告病毒P0接种DEF细胞后可高强度表达绿色荧光蛋白,在BHK-21和DEF细胞上增殖速度略微低于亲本毒株,但差异不显著。结果表明,成功构建了1株坦布苏绿色荧光报告病毒rJXSP-5′EGFP,在BHK-21和DEF细胞上均能有效增殖。

贵州山羊大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

为分离贵州山羊大肠杆菌和了解其耐药情况,通过对贵州贵阳、晴隆、纳雍、威宁和兴仁山羊场进行无菌采集肛门拭子、病死山羊的肝等347份样品,大肠杆菌的分离培养、24种生化试验反应、16S rDNA PCR鉴定和21种抗生素药敏试验等,分离、生化和16S rDNA PCR鉴定出264株山羊大肠杆菌,贵州每个山羊场对氨苄西林和头孢硫脒产生高度耐药,对复方新诺明、头孢西丁、头孢呋辛、头孢他啶和米诺环素耐药,其他抗生素药敏感,这为贵州省控制和预防山羊大肠杆菌病提供科学依据。

鸭坦布苏病毒自然感染病例的诊断与病理学观察

为探究鸭坦布苏病毒(DTMUV)在贵州省鸭群的流行,对疑似DTMUV感染肉种鸭进行剖检,观察发病鸭内脏器官病变。取病鸭内脏组织进行RT-PCR检测确诊为DTMUV感染,将病料处理后接种BHK-21细胞,进行RT-PCR鉴定和透射电镜观察,确定分离到DTMUV,并将病料组织制作病理切片。结果显示,接种BHK-21出现明显CPE,电镜观察见病毒颗粒。将分离毒株的E基因经PCR扩增后测序,分析E基因氨基酸序列的同源性,发现所分离毒株与中国北京鸭源参考株同源性最高达99.39%,而与我国早期分离参考株(FX2010)同源性较低,将病料制作切片并进行HE染色,可见脑组织非化脓性脑炎,脾脏淋巴细胞减少,肝细胞变性坏死。本研究成功在贵州省分离到一株DTMUV,对其遗传进化进行分析,为探究贵州省养鸭地区DTMUV的感染和致病提供参考。

羊的常规繁殖技术概述及效果分析比较

为提高羊规模化养殖的繁殖率,文章就目前采取的羊同期发情、超数排卵及精液处理相关技术研究成果进行综述和分析比较,总结出秋季采用孕酮阴道栓+前列腺素法与国产促卵泡生成素递减法处理羊同期发情和超数排卵效果较好;精液处理时先离心洗涤去除精浆后再添加10%~20%精浆,稀释液pH值为6.5,山羊精液渗透压为339 mOSM/L,绵羊精液渗透压为341 mOSM/L,精液稀释倍数为10~15倍保存效果最好。

铜与枯草芽孢杆菌协同对产蛋期种鹅生产性能、空肠组织发育和微生物菌群结构的影响

本试验通过研究铜与枯草芽孢杆菌协同对产蛋期种鹅空肠组织发育和微生物菌群结构的作用,探索在产蛋期种鹅日粮中添加枯草芽孢杆菌条件下铜的添加量。选择46周龄体况相近的产蛋期种鹅120只,随机分为6组,每组4个重复,每个重复5只(1公4母),采用2×3因子随机试验设计,枯草芽孢杆菌为125、250 mg/kg 2个添加水平,铜为2、4、6 mg/kg 3个添加水平。Ⅰ~Ⅲ组的铜添加水平为2、4、6 mg/kg,BS添加水平为125mg/kg,Ⅳ~Ⅵ组的铜添加水平为2、4、6mg/kg,BS添加水平为250mg/kg。试验期70 d。对种鹅空肠绒毛高度、隐窝深度进行测定,计算绒隐比;对种鹅盲肠微生物进行16S rDNA多样性检测。结果表明:铜与枯草芽孢杆菌协同对产蛋期种鹅的产蛋率、料蛋比及日采食量影响不显著,对空肠绒毛高度影响显著(P<0.05),对空肠隐窝深度、绒隐比影响极显著(P<0.01)。对样品Alpha多样性进行分析,试验样品的OTU统计覆盖率深度指数值Coverage,Ⅰ~Ⅵ组均大于0.999,表明试验样本中物种被测出的概率极高,样本结果代表了样本中微生物的真实情况。铜与枯草芽孢杆菌协同能促进种鹅空肠组织发育,显著改善种鹅肠道益生菌优势菌群丰度,维持肠道内环境微生态平衡。建议产蛋期种鹅在饲粮中枯草芽孢杆菌添加水平为250 mg/kg条件下,铜适宜添加量为4 mg/kg。

平坝区鹅养殖场细菌感染情况调查

为平坝区鹅养殖户的细菌病防控提供参考,对贵州省平坝区鹅养殖场细菌感染情况进行调查,从发病鹅场采集76份鹅组织样品进行细菌的分离鉴定。结果表明:61份样品中分离出细菌94株,15份样品未分离出细菌,分离率80.3%。分离大肠杆菌41株,分离率最高,为43.6%;鸭疫里氏杆菌30株,分离率次之,为31.9%;沙门氏菌16株,分离率17.0%;金黄色葡萄球菌7株,分离率7.4%;未分离到巴氏杆菌。有33份样品为单一细菌感染,有28份样品同时检出2种以上细菌。提示大肠杆菌和鸭疫里氏杆菌是引起该地区鹅场发病的主要原因。同时混合感染占比36.8%,应加强对细菌病混合感染的监测与防控。

1~28日龄三穗鸭粗蛋白质需要量研究

本试验旨在研究日粮粗蛋白质水平对1~28日龄三穗鸭生产性能的影响,并估算三穗鸭的粗蛋白质需要量。试验采用单因子完全随机试验设计,挑选420只健康雄性三穗鸭,随机分为6个处理组,每个处理7个重复,每个重复10只,不同处理组试验鸭分别饲喂粗蛋白质水平为17%、18%、19%、20%、21%、22%的试验日粮。试验期为28 d。结果表明:日粮粗蛋白质水平对28日龄体重、平均日增重具有显著影响,且随着日粮粗蛋白质水平的提高呈线性升高(P<0.05),Ⅰ组体重、平均日增重最低,Ⅴ组的体重、平均日增重最高,Ⅴ组体重及平均日增重分别比Ⅰ组提高25.51%、28.49%。日粮粗蛋白质水平对1~28周龄三穗鸭料重比具有显著影响,且随着日粮粗蛋白质水平的升高呈线性降低(P<0.05),Ⅵ组的料重比最低,Ⅰ组的料重比最高,Ⅵ组比Ⅰ组降低了11.59%。日粮粗蛋白质水平对1~28日龄三穗鸭平均日采食量无显著影响(P>0.05)。以日增重为评价指标,利用直线-折线模型估算1~28日龄三穗鸭的粗蛋白质需要量为18.75%。

H9N2亚型禽流感病毒对鸡的免疫抑制机制

通过评价H9N2亚型禽流感病毒(AIVs)感染对于鸡新城疫和传染性支气管炎活疫苗免疫效力的影响,研究了H9N2 AIVs的免疫抑制机理。结果显示,H9N2 AIVs感染可降低鸡对鸡新城疫和传染性支气管炎活疫苗的抗体应答,但与对照组相比差异并不显著;而流式分析结果显示,与对照组相比H9N2 AIVs感染可显著降低鸡外周血中CD4+T淋巴细胞和CD8+T淋巴细胞的比率(P<0.05);抗原特异性的T淋巴细胞增殖试验结果显示,与对照组相比H9N2 AIVs感染鸡的外周血T淋巴细胞增殖活性显著下降(P<0.05);另外,H9N2 AIV感染还导致鸡血清中细胞因子IFN-γ和IL-4应答水平的下降,其中IFN-γ的应答水平与对照组相比差异显著(P<0.05)。说明H9N2 AIVs感染可抑制鸡的免疫应答,其中对细胞免疫应答的抑制更为明显。

鸭坦布苏病毒病-H9亚型禽流感二联灭活疫苗免疫佐剂筛选

为筛选出理想的鸭TMUV-AIV(H9亚型)二联灭活疫苗免疫佐剂,将灭活的坦布苏病毒液和禽流感病毒(H9亚型)尿囊液分别与白油佐剂、卡波姆佐剂、铝胶佐剂、蜂胶佐剂制成抗原含量相同的TMUV-AIV二联灭活疫苗。应用阻断ELISA方法和血凝抑制方法测定免疫鸭血清中坦布苏病毒和禽流感病毒抗体,比较不同佐剂疫苗对试验鸭的免疫效力。结果表明,以白油作为佐剂的灭活疫苗组免疫效果最好,抗体产生快、抗体水平优于其他各组,免疫2周后60%(6/10)血清样品HI抗体可达1∶8以上,80%血清样品呈TMUV抗体阳性,是制备鸭TMUV-AIV(H9亚型)二联灭活疫苗的理想佐剂。

成年三穗公鸭对12种不同来源高粱酒糟的代谢试验及回归方程的建立

本试验旨在通过实验室分析和肉鸭代谢试验建立高粱酒糟常规营养成分的代谢能回归方程,为畜禽生产提供高粱酒糟表观代谢能估算方法。选择体况相同的180日龄三穗公鸭42只进行代谢试验,采用逐步回归法建立高粱酒糟常规营养物质与代谢能值的回归方程。结果表明,干物质及中性洗涤纤维作为高梁酒糟表观代谢能的预测因子,通过逐步回归分析建立高粱酒糟的代谢方程。成年三穗公鸭可利用高粱酒糟的养分构建其代谢能值的预测方程。

鸭胚成纤维细胞上坦布苏病毒受体蛋白的鉴定

【目的】拓展对坦布苏病毒受体的认知,为研究其在鸭体内的感染机制打下基础。【方法】取9日龄SPF鸭胚制备鸭胚成纤维细胞(DEF),待细胞长成单层后提取DEF膜蛋白,利用免疫共沉淀试验筛选出DEF膜蛋白中可与坦布苏病毒结合的蛋白,经病毒辅覆蛋白结合分析(VOPBA)验证后通过LC-MSMS质谱分析进行鉴定;同时人工合成鸭热休克蛋白70基因(HSP70)序列的开放阅读框(1905 bp),构建重组质粒pET32a-HSP70并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,以重组蛋白免疫小鼠制备抗鸭HSP70血清,与DEF细胞共孵育后接种坦布苏病毒,并采用实时荧光定量PCR检测抗血清对病毒感染的抑制作用。【结果】DEF膜蛋白中分子量约70 kD的蛋白可与坦布苏病毒结合,经LC-MSMS质谱分析和序列比对可确定该蛋白即为鸭热休克蛋白70(HSP70)。含重组质粒pET32aHSP70的BL21(DE3)感受态细胞经IPTG诱导4 h后,SDS-PAGE检测发现在分子量约85 kD处出现目的蛋白条带,获得的重组鸭HSP70蛋白主要以包涵体形式进行表达,且能与His标签抗体发生特异性反应。以重组鸭HSP70蛋白免疫小鼠获得的抗鸭HSP70血清可封闭DEF细胞上的HSP70,而竞争性抑制坦布苏病毒感染。【结论】HSP70是坦布苏病毒感染DEF细胞的受体,可作为新的靶点用于抗坦布苏病毒药物设计。

坦布苏病毒不同感染途径对樱桃谷鸭致病性的影响

为研究坦布苏病毒(Tembusu virus,TMUV)不同途径感染对樱桃谷鸭致病性的影响,以脑内注射、肌肉注射、皮下注射、静脉注射及口服五种途径接种TMUV JS804株5×104PFU,每天观察临床症状,并对各组鸭体重、血液病毒载量、脾脏病理学变化进行分析。结果显示:五组试验鸭均出现精神沉郁、食欲不振、拉绿色稀粪等临床症状,其中脑内注射组最为严重;各组鸭体重均呈下降趋势,肌肉注射组体重下降最为明显;五种攻毒途径均可使鸭出现明显的病毒血症,其中肌肉注射组血液中病毒含量最高,口服组病毒血症出现时间最晚;各组鸭脾脏均出现组织结构破坏及细胞坏死等变化。提示TMUV对樱桃谷鸭的致病力与感染途径相关,肌肉注射途径致病力较强。

黔画乌鸡选育F2代的生长曲线拟合与分析

为了解黔画乌鸡的生长发育规律,筛选出最佳的生长曲线拟合模型,运用Gompertz、Logistic、Von Bertalanffy 3种生长曲线拟合模型对0~22周龄黔画乌鸡选育F2代的体重数据进行拟合分析。结果:Von Bertalanffy模型对黔画乌鸡的生长曲线拟合效果最佳(公鸡R^(2)=0.988,母鸡R^(2)=0.990),Logistic模型的拟合效果最差(公鸡R^(2)=0.981,母鸡R^(2)=0.980)。Von Bertalanffy模型拟合公、母鸡的拐点周龄分别为10.830、9.758周,拐点体重分别为821.774、616.982 g。结论:Von Bertalanffy模型是拟合黔画乌鸡生长发育规律的最佳数学模型。公鸡模型表达式为:Y=2773.488(1-0.727e^(-0.072 t))^(3);母鸡模型表达式为:Y=2082.313(1-0.693e^(-0.075 t))^(3)。

黔画乌鸡选育F2代的体尺性状和屠宰性能测定及相关性分析

为了解黔画乌鸡选育F2代的体尺性状与屠宰性能及相互之间的关联性,随机选取150日龄黔画乌鸡选育F2代30只(公、母各半)进行体尺和屠宰指标测定,并进行相关性分析。结果:150日龄黔画乌鸡选育F2代的平均活重为1637.3 g,屠体重为1443.4 g,屠宰率为88.2%,全净膛重为1196.5 g,全净膛率为72.7%。相关性分析表明,7个体尺指标与13个屠宰指标共形成91对关联性状,其中59对呈极显著正相关(P<0.01),17对呈极显著负相关(P<0.01),2对呈显著正相关(P<0.05),4对呈显著负相关(P<0.05),9对无显著相关(P>0.05);7个体尺指标与活重、屠体重、半净膛重、全净膛重均呈极显著正相关(P<0.01),其中体斜长、龙骨长、胸宽与活重、屠体重、半净膛重、全净膛重之间的相关系数较高,达到0.739-0.828。结论:黔画乌鸡选育F2代150龄公、母鸡的体尺性状及屠宰性能差异显著,产肉性能较好。体斜长、龙骨长、胸宽可以作为黔画乌鸡肉用性能选育的重要指标。

A:L1型鸭源多杀性巴氏杆菌灭活疫苗制备及免疫效力研究

【目的】制备鸭多杀性巴氏杆菌灭活疫苗,有效控制贵州省鸭多杀性巴氏杆菌发生和流行。【方法】以实验室分离保存的A:L1型多杀性巴氏杆菌地方流行株为菌种,通过涂板法测定该菌株生长曲线,并采用改良寇氏法计算该菌株对鸭的半数致死量(median lethal dose,LD_(50)),将该菌培养至终浓度为1×10^(10)CFU/mL后分别制备白油佐剂灭活疫苗和卡波姆佐剂灭活疫苗,经疫苗质量检验后进行免疫雏鸭试验;通过攻毒保护试验评价比较两种疫苗的保护率,并对攻毒试验鸭肝脏、肺脏、脾脏进行病理组织学观察。【结果】A:L1型多杀性巴氏杆菌疫苗株培养至18 h到达峰值,活菌数可达1.0×10^(10)CFU/mL;LD_(50)为5 CFU;制备的两种疫苗安全性良好;攻毒保护试验结果显示,一免后卡波姆佐剂灭活疫苗免疫保护率可达62.5%,高于白油佐剂灭活疫苗(50.0%)及商品灭活疫苗(50.0%)。二免后卡波姆佐剂灭活疫苗优势更为明显,免疫保护率可达87.5%,高于白油佐剂灭活疫苗(75.0%)及商品灭活疫苗(62.5%)。病理组织学结果显示,一免后卡波姆佐剂灭活疫苗能对肺脏提供较好的保护效果,二免后在肝脏、肺脏和脾脏的保护效果上,卡波姆佐剂灭活疫苗组优势明显。【结论】利用贵州地区流行的A:L1型菌株所制备的卡波姆佐剂灭活疫苗免疫效果明显,能对贵州地区多杀性巴氏杆菌病的防控起到重要作用。

夏玉米-冬小麦轮作期土壤呼吸的温度敏感性分析

研究土壤呼吸和温度敏感性(Q_(10))的季节变化对丰富农田土壤的碳循环理论具有重要理论和现实意义。采用动态密闭气室法于2018年6月-2019年6月连续监测北京夏玉米-冬小麦轮作期间农田土壤呼吸速率,研究不同作物生育期Q_(10)值和土壤呼吸变化特征,综合分析土壤温度和土壤含水率对土壤呼吸的影响。结果表明:日内尺度上不同作物生育期土壤呼吸变化均呈单峰型,对土壤温度昼夜变化的响应关系呈顺时针近椭圆曲线;Q_(10)具有明显的季节变化特征,夏玉米苗期、拔节-抽雄、开花-成熟3个时期Q_(10)分别为2.27、6.13、1.28,在整个夏玉米季,土壤体积含水率在19.52%~45.43%变化,水分解释了50%的土壤呼吸变化(P<0.05),临界值土壤体积含水率为27.84%(田间持水量的83.83%),土壤温度只能解释夏玉米季土壤呼吸速率变化的3%(P>0.05),Q_(10)为1.29。冬小麦出苗-分蘖期、越冬期、返青-拔节期、孕穗-抽穗期、开花-成熟期Q_(10)分别为4.17、8.41、6.57、2.53、1.92,与土壤温度呈显著负相关关系(P<0.05),温度能够解释冬小麦季土壤呼吸变化的88%(P<0.01),Q_(10)为2.50。在整个轮作周年,土壤温度和土壤含水率分别解释54%(P<0.01)、28%(P<0.05)的土壤呼吸变化,周年尺度的Q_(10)为1.72。可见,在气候变化背景下,使用Q_(10)预测土壤呼吸需采用合适的时间尺度,同时注意土壤水分对Q_(10)模型适用性的影响。

鸡基质蛋白3基因的生物信息学分析

根据GenBank已发表的鸡基质蛋白3(matrin 3)基因序列,设计合成一对特异性引物,以鸡胚成纤维细胞提取的总RNA反转录产物为模板,通过PCR扩增鸡matrin 3基因并进行克隆与生物信息学分析。测序结果表明:鸡matrin 3基因编码区全长为2 709 bp,共编码902个氨基酸,理论pI为5.79,分子质量约为100.71 ku,分子式为C_(4362)H_(6903)N_(1267)O_(1418)S_(29)。序列分析结果显示:鸡matrin 3蛋白有丰富的二级结构,以无规则卷曲和α-螺旋为主;该蛋白中包含两个锌指结构域和两个RNA识别基序,其中人、小鼠和野猪的4个功能结构域氨基酸位点相同,而在鸡matrin 3蛋白中存在多个氨基酸位点变异。核苷酸同源性及遗传进化分析发现:鸡与火鸡的matrin 3基因核苷酸同源性最高(为98.0%),并且与火鸡的亲缘关系最近。研究结果为进一步研究鸡matrin 3蛋白的生物学功能奠定了基础。

高填方路基边坡的工程处治分析

基于饱和—非饱和渗流理论,结合某高填方边坡,通过对研究区域(对称)的二维简化,利用有限元软件分析降雨条件下边坡的渗流特性及植被、水平排水孔等相关工程处治。研究结果表明:植被的覆盖能有效降低坡内孔隙水压力,雨后变形降低14.3%;排水孔的合理布设能有效排除坡内积水,相对渗透系数宜取值2 000左右。

Nac10影响两种根管螯合剂对牙本质小管口侵蚀能力的实验研究

目的:评价Nac10作为初始根管冲洗液对两种根管螯合剂侵蚀牙本质小管口能力的影响。方法:收集离体牙90颗,截冠、纵劈,分为17%EDTA组、15%EGTA组,每组按照有无初始冲洗液Nac10以及其不同浸泡时间和浓度(螯合剂浓度、时间固定),分为36组,将样本消毒、浸泡、脱水,最终经扫描电镜观察牙本质小管口直径,计算牙本质小管口面积并绘制成图。结果:EGTA、EDTA组在有初始冲洗液Nac10、浓度2.5%、时间1~3min的条件下均比无初始冲洗液Nac10效果更好,侵蚀能力更适中(P<0.05),其中EGTA组较EDTA组牙本质小管口更清晰,并且未见明显牙本质小管口融合现象(P<0.05)。结论:通过观察比较各组牙本质小管口面积,临床建议选用初始根管冲洗液Nac10O,浓度2.5%,时间1~3min,配合根管螯合剂15%EGTA,时间3min,在保护牙体组织的基础上,效果更佳。

负载纳米TiO_2污泥光催化剂的制备及应用

以纳米TiO_2和焦化废水污泥为原料,ZnCl_2为活化剂,一步法制备AC-TiO_2。以罗丹明B为目标污染物进行光催化去除实验,考察了活化剂浓度、固液比、热解温度、热解时间等对AC-TiO_2催化性能的影响。实验结果表明,污泥基催化剂制备条件为ZnCl_2的浓度4.5mol/L、热解温度为400℃、热解时间为90min、固液比为1:2、TiO_2与污泥比值为1:10时,对罗丹明B的光催化去除率最高,达到了98.16%。由spss估计平均值可得污泥基催化剂的最佳制备条件为ZnCl_2的浓度4.5mol/L、热解温度为550℃、热解时间为60min、固液比为1:2、TiO_2与污泥比值为1:5。通过spss第三类平方和分析,各因素对催化剂性能影响程度为:TiO_2与污泥比值>ZnCl_2浓度>固液比>热解温度>热解时间。