家蚕浓核病病毒和血液型脓病病毒PCR诊断方法的建立及应用

蚕在密集群体饲养条件下极易受病原微生物和其他外界因素的影响而引起各种疾病,其中家蚕血液型脓病病毒、浓核病病毒是导致蚕患病的主要病原。本研究以上述2种病毒为研究对象,建立双重PCR检测方法,结果证实该方法具有检测效率高、特异性强、敏感性高的特点,能够为这两种病毒病的快速诊断提供技术支持。

猪圆环病毒3型的鉴定和遗传演化分析

为了解宜宾市养殖场猪圆环病毒(PCV)3型的基因组特征和遗传变异规律。本试验利用PCR方法从流产母猪血液中鉴定出1株PCV3,命名为SC-YB2203。经过PCR方法扩增部分基因组序列,对测序结果拼接并进行系统进化树分析。结果显示:遗传进化树分析发现SCYB2203与广州株MK142771和美国株MK496279属于同一分支3f,与西班牙株MH579746和美国株MK496280亲缘关系较近,与四川株MZ449244和重庆株KY075990亲缘关系较远。序列分析发现SC-YB2203与参考序列之间的同源性最高的为重庆株KY075990(98.5%),与湖南株MG372488的同源性为87.7%,与其他国内株同源性较高(97.6%-98.5%)。

黑龙江省番茄灰霉病病原菌的分离与鉴定

为了对病原菌进行形态学观察及ITS序列鉴定,以黑龙江省齐齐哈尔市某温室中疑似感染番茄灰霉病的番茄植株叶片为试材,采用组织分离方法,分离并纯化病原菌。结果表明,共分离到4株病原菌,根据形态学特征及ITS序列系统进化分析结果,明确了引起番茄灰霉病的病原菌为灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)。

沙门氏菌快速检测技术研究进展

沙门氏菌是一种广泛存在于自然界中的食源性致病菌,会造成肉和肉制品、蛋和蛋制品、奶和奶制品等的污染,隐蔽性强,能导致人食物中毒,引发胃肠炎、败血症等疾病,严重时危及生命。建立快速、准确的沙门氏菌检测方法是预防和控制沙门氏菌疾病的关键,发展快速灵敏的检测方法对于保障农产品质量与安全具有重要意义。本文通过对沙门氏菌免疫学检测技术、分子生物学技术和电化学检测等技术的开发与应用进行综述,阐明各种沙门氏菌快速检测技术的原理、优缺点及研究进展,并对未来的发展趋势进行展望,以期为优化及开发沙门氏菌快速检测方法提供参考依据。

检测马疱疹病毒4型抗体间接ELISA方法的建立及应用

为建立检测马疱疹病毒4型(EHV4)抗体的间接ELISA方法,本研究以原核表达的具有型特异性抗原表位的gG蛋白为检测抗原,经条件优化,成功建立检测EHV4抗体的间接ELISA方法,对该方法进行特异性及重复性试验。结果表明,重组4型gG蛋白仅与EHV4阳性血清发生反应,不与马疱疹病毒1型(EHV1)阳性血清发生反应;组内及组间变异系数均小于10%。采用建立的方法与进口试剂盒对不同省份送检的马血清进行检测比较,两者阳性和阴性符合率均在90%以上。本研究建立的间接ELISA方法为检测EHV4抗体及流行病学调查奠定基础。

农业学术期刊学术影响力提升策略研究——以《黑龙江农业科学》为例

目的/意义:农业学术期刊是推动我国农业由传统农业向现代化农业转化的重要媒介。方法/过程:以《黑龙江农业科学》为研究对象,采用文献计量学方法 ,对比分析了2008—2016年《黑龙江农业科学》与《江苏农业科学》《中国农业科学》在载文量、基金论文比、被引频次及影响因子等指标的差异及产生差异的原因,以期为提升《黑龙江农业科学》学术影响力提供参考依据。结果 /结论 :2008—2016年《黑龙江农业科学》的基金论文比、被引频次逐年升高,载文量及影响因子变化不大,但各项指标与《江苏农业科学》《中国农业科学》存在明显差距,《黑龙江农业科学》学术影响力提升存在极大发展空间。根据分析结果 ,提出促进《黑龙江农业科学》学术影响力提升的对策建议。

禽6型副粘病毒JL-127株的分离与鉴定及其毒力基因序列分析

[目的]研究禽6型副粘病毒生物学特性。[方法]从来自吉林省自然保护区的野鸭拭子中分离出1株禽6型副粘病毒(Avian paramyxovirus type 6,APMV6),进行了形态学、血清学、生物学和病毒分子生物学鉴定,测定该病毒全基因组序列,并对F和HN毒力基因进行进化分析。[结果]成功分离鉴定出1株APMV6,命名为JL-127,基因组全长为16 236 nt,毒力基因进化结果表明,JL-127株与TW及FE株遗传关系较近,与HK株遗传关系较远。[结论]首次对我国野鸭源APMV6分离株进行全基因组测序,并对其进行遗传进化分析。

禽6型副粘病毒V蛋白对抗宿主细胞干扰素β的产生

[目的]研究禽6型副粘病毒V蛋白对抗宿主细胞干扰素β的产生的机制。[方法]构建真核表达禽6型副粘病毒P、V、W蛋白的重组载体,分别与IFN-β-Luc、NF-κB-Luc、PRDⅢ/I-Luc、AP-1-luc报告质粒共转染HEK-293T细胞,接种仙台病毒刺激细胞后,测定细胞内萤火虫荧光素酶及海肾荧光素酶活性。[结果]禽6型副粘病毒V蛋白能通过降低NF-κB的活性,进而显著抑制宿主细胞产生IFN-β。[结论]该研究初步阐明了禽6型副粘病毒V蛋白对抗宿主天然免疫的机制。

基于4C的《生物工程分析与检测》立体教学模式探究

在生物工程专业“新工科”的教育改革实践中,基于4C教育理论(Communication沟通,Collaboration合作,Creativity创造力,Critical thinking批判性思维),以产业需求为导向,以学生发展为中心,针对《生物工程分析与检测》课程开展了线上线下融合、课程思政等教学改革,提出了“线上线下现场,自助自主自发”的教学理念,建立了“慕课+线上翻转课堂+雨课堂+实验室”的立体教学模式,并针对3个年级172名学生进行了教学实践,问卷调研表明,该教学模式的教学效果良好。

马乙型脑炎病毒E蛋白的原核表达及间接ELISA的初步应用

目的原核表达马乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)E蛋白,建立JEV间接ELISA诊断方法。方法根据GenBank(AF315119.1)公布的JEVSA14-14-2株E蛋白基因序列设计一对引物,提取病毒RNA经反转录和RT-PCR扩增获得E蛋白编码基因片段,将该片段插入表达载体pET30a(+),转化BL21(DE3)后经IPTG诱导蛋白表达,Western blot检测活性,以表达的E蛋白为包被抗原建立间接ELISA诊断方法。结果获得约1500bp目的片段,与GenBank上的序列同源性100%,其表达产物相对分子质量约为60000,Western blot结果显示该蛋白可与JEV阳性血清结合,具有免疫反应性。建立了间接ELISA检测方法,对不同省份的340份马血清进行检测,其中154份为阳性。结论原核表达JEV的E蛋白具有良好的免疫活性,建立的间接ELISA诊断方法特异性和灵敏性较好,可用于JEV的现地检测。

“发酵食品安全生产与品质控制”课程教学改革探索与实践

“发酵食品安全生产与品质控制”是生物工程专业核心课程,对培养食品质量与安全领域的专业人才尤为重要。针对课程进行教学改革路径进行探索,剖析该课程目前的不足之处,并通过对教学方法、考核方式等方面的改革,探索教学新方式,提升教学效果。

抗马动脉炎病毒N蛋白单克隆抗体的制备

为制备抗马动脉炎病毒(EAV)衣壳蛋白(N)的单克隆抗体(MAb),本研究通过原核表达重组N蛋白,纯化后免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,细胞融合后经间接ELISA筛选获得两株能够稳定分泌抗EAV N蛋白的杂交瘤细胞株,MAbs亚型鉴定为IgG1,轻链为κ链。Western blot结果显示,这两株杂交瘤细胞分泌的MAb均能够识别EAV。EAV N蛋白MAb的制备,为EAV血清学检测方法的建立奠定了基础。

科技创新在蔬菜产业链发展中的支撑作用

从蔬菜生产产业链条的产前、产中、产后不同发展阶段,提出科技创新在蔬菜全产业链中的发展建议。产前保障基础设施、使用优良品种及农机具、消除信息壁垒;产中推行标准化生产和管理、合理调整种植结构;产后建立冷链物流体系、研发功能型蔬菜,增加附加值,延长产业链;以推动我国蔬菜产业的三产融合发展。

非洲猪瘟病毒与猪伪狂犬病病毒双重PCR检测方法的建立

为建立一种同时检测非洲猪瘟病毒(ASFV)和猪伪狂犬病病毒(PRV)的方法,本研究根据GenBank中的ASFV 72基因和PR V UL27基因的保守序列分别设计2对特异性引物,通过对双重PCR反应条件的优化,建立快速检测ASFV和PR V的双重PCR方法,并对该方法的特异性和敏感性进行验证。特异性试验结果显示,该方法对ASFV与PRV核酸的扩增能获得246 bp和401 bp的特异性目的片段,而对PRRSV、PEDV和CSFV的核酸扩增均为阴性;敏感性试验结果显示,该方法对ASFV和PRV核酸最低检测量分别为0.01 pg和0.12 pg。结果表明:建立的双重PCR方法具有特异性强、敏感性较好、快速简便等特点,可用于这两种病毒的同时检测和鉴别诊断。

一株猪圆环病毒3型的鉴定和遗传演化分析

目的了解宜宾市养殖场猪圆环病毒(PCV)3型的基因组特征和遗传变异规律。方法本试验利用PCR方法从患有呼吸困难仔猪中鉴定出一株PCV3,命名为SC-YB2212。经过PCR方法扩增衣壳蛋白序列,对测序结果拼接并进行系统进化树分析。结果SC-YB2212与国内株PCV3序列同源性为97%~97.9%。遗传进化分析发现SC-YB2212与河北株MF318449和广西株MG650174和云南株MG650176属于同一分支,与西班牙株MH579746和美国株MK496280亲缘关系较近,与四川株MZ449244和重庆株KY075992亲缘关系较远。结论本研究为深入了解PCV3的感染及其毒株的分子特征和遗传变异,为PCV3的致病性研究和防控提供参考。

一株猪圆环病毒3型的鉴定和分子特征分析

为了解猪圆环病毒(PCV)3型的基因组特征和遗传变异情况。本试验利用PCR方法从病死猪脾脏中鉴定出一株PCV3,命名为SC-YB2108。经过PCR方法扩增全序列,对测序结果拼接并进行系统进化树和遗传重组分析。结果显示:SC-YB2108序列长度2 000 bp;遗传进化树分析发现SC-YB2108全基因组与中国株MK142771,MG96866,美国株MK496279,KX458235,韩国株MH231553处于同一独立分支,属于PCV3f。序列分析发现SC-YB2108与广西株MK095620同源性为99.2%,与湖南株MG372488的同源性为91.6%,与四川株MZ449244和OK334614的同源性分别为98.4%和98.7%。本研究有助于深入了解四川省PCV3流行毒株的分子特性,为后续PCV3的诊断试剂和疫苗开发提供依据。

新疆地区马鼻肺炎血清学调查

本文应用ELISA方法对新疆地区6个县市的马进行鼻肺炎血清学调查,共采集血清1 484份;结果显示,6个县市均查出马鼻肺炎感染阳性马,最低感染率仅为1.99%,最高感染率达51.69%,新疆西部地区疫情较为严重。本研究结果为新疆地区马鼻肺炎的防治提供了可参考数据。

猫传染性腹膜炎病毒PL1蛋白抑制宿主细胞IFN-β产生机制的研究

为研究猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)木瓜样蛋白酶1(PL1)蛋白抑制宿主细胞干扰素β(IFN-β)产生的机制,本试验通过构建PL1蛋白及其突变体(C32A、H183A和D196A)的真核表达载体,分别与转录因子PRDⅢ/Ⅰ,NF-κB和AP-1报告质粒,视黄酸诱导基因1(RIG-1),线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS),干扰素基因刺激基因STING和TANK结合激酶1(TBK-1),IFN-β-Luc和p RL-TK共转染猫肾细胞(CRFK细胞),检测细胞中荧光素酶的表达水平以及干扰素调节因子3(IRF3)的磷酸化水平。结果得出:PL1蛋白能够抑制全部3种转录因子并且呈剂量依赖性;PL1蛋白抑制IRF3的磷酸化,进而阻止IRF3入核;PL1蛋白能够分别抑制RIG-1、MAVS、STING和TBK-1诱导的IFN-β的激活;PL1蛋白具有去泛素化活性,PL1蛋白通过去泛素化活性抑制IFN-β的产生。

非洲猪瘟诊断方法研究综述

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起的一种急性、烈性、高度接触性传染病,目前尚无有效的疫苗进行预防,早期确诊是有效的防控手段之一,可通过病原学诊断、血清学诊断、分子生物学诊断等方法确诊.病原学诊断检测结果虽可靠性高,但不适于大规模检测,且费时费力、灵敏度低、不利于快速检测;血清学检测方法操作简便、特异性和敏感性强,其中ELISA和胶体金方法是最常用的检测方法;分子生物学诊断的准确性、灵敏度、特异性都较高,适合大量样品的检测,但需要特殊的仪器设备和专业培训的人员.随着技术的进步,非洲猪瘟诊断方法研究应向高通量、耗时短、易操作、设备简单的方向发展,以适应现地及基层诊断的需要.

一株重组犬冠状病毒的鉴定及3'端分子特征分析

为了解犬冠状病毒(CCoV)的基因组特征和遗传变异情况,本试验利用RT-PCR方法从患病犬肠道内容物中鉴定出一株CCoV,命名为BM35。通过RT-PCR方法扩增S、E、M、N和ORF7基因,然后对测序结果拼接并进行系统进化树和遗传重组分析。结果显示:BM35的3'端序列长度为8 870 bp;遗传进化树分析发现BM35与浙江株B639/ZJ/2019、台湾株NTU336、日本株FC1和越南株HCM47处于同一独立分支;重组分析发现BM35与台湾株NTU156和越南株HCM47在S基因发生重组。本研究有助于深入了解国内CCoV流行毒株的分子特性,为后续CCoV诊断试剂和疫苗的开发提供依据。