槲皮万寿菊素对仔猪生长性能、腹泻率及免疫力的影响

试验探究了不同水平的槲皮万寿菊素对仔猪生长性能、腹泻率及免疫功能的影响,确定槲皮万寿菊素在断奶仔猪生产中应用的可行性。选取28日龄的“杜×长×大”仔猪96头,分成4组,每组3个重复,每个重复8头仔猪。各组仔猪饲粮中分别添加0(对照组)、200、400、800 mg/kg的槲皮万寿菊素。预试期1 w,正式试验期4 w。结果显示,与对照组相比,400 mg/kg组的末重和平均日增重分别显著提高了6.39%、10.86%(P<0.05),料重比显著降低了8.68%(P<0.05);400 mg/kg组和800 mg/kg组的腹泻率极显著降低(P<0.01)。与对照组相比,400 mg/kg组和800 mg/kg组仔猪血清D-乳酸含量极显著降低(P<0.01),肿瘤抑制因子-α(TNF-α)含量显著降低(P<0.05),免疫球蛋白A(IgA)含量显著提高(P<0.05);200 mg/kg组和400 mg/kg组血清白细胞介素-10(IL-10)含量显著提高(P<0.05);400 mg/kg组血清干扰素-γ(IFN-γ)含量显著提高(P<0.05),二胺氧化酶和内毒素水平显著降低(P<0.05)。研究表明,槲皮万寿菊素可以提高仔猪的生长性能、免疫功能,降低腹泻率,最适添加水平为400 mg/kg。

2018年陕西省部分地区小型猪场猪瘟、伪狂犬病、口蹄疫免疫抗体检测分析

农户散养生猪在我国养殖业中占较大比例,疫苗免疫是猪场防控传染病最有效的措施,抗体检测是评价疫苗免疫效果的直接指标和分析猪场疫病风险的主要依据。2018年5月,在陕西省的57个接种了猪瘟(CSF)、猪伪狂犬病(PR)和O型口蹄疫(FMD-O)疫苗的散养猪场分别采集血液,分离血清。每场采样2份~20份,共收集302份血清,分别检测CSFV、PRV gB和FMDV-O血清抗体。结果显示,送检样品的CSFV抗体平均阳性率为88.1%(266/302),PRV gB抗体平均阳性率为99.6%(301/302),FMDV-O抗体平均阳性率为98.3%(297/302)。CSFV抗体100%阳性的猪场有36个,占总数的63.2%;不足100%的猪场中,抗体阳性率最高为83.3%,最低为20%。PRV gB抗体100%阳性的猪场有56个,占总数的98.2%;FMDV-O抗体100%阳性的猪场有52个,占总数的91.2%;不足100%的猪场中,抗体阳性率最高为85.7%,最低为50%。结果表明,检测猪场的3种疫苗免疫抗体阳性率普遍较高,猪场疫病防控意识和疫苗免疫情况较好。

屠宰生猪副猪嗜血杆菌的分离鉴定及药物敏感性分析

为调查屠宰生猪副猪嗜血杆菌(Hps)的隐性感染情况,本研究从陕西省某规模化生猪屠宰场采集80份病变肺脏,应用PCR方法进行Hps核酸检测,无菌取阳性肺脏,通过平板划线分离获得疑似Hps,进一步对分离菌进行形态观察、培养特性分析、卫星现象观察、生化试验和分离菌核酸片段序列分析,纯化获得Hps分离菌;用药敏纸片法分析Hps分离菌株对常用药物的敏感性。结果显示,从80份病变肺脏中检出39份Hps阳性,阳性率48.75%(39/80);从39份Hps阳性肺脏中分离获得3株疑似Hps,分离菌在显微镜下呈革兰氏阴性、短杆状;在添加有胎牛血清和NAD的TSA平板上生长良好;在金黄色葡萄球菌周围呈现出典型的"卫星现象"生长;能发酵葡萄糖、蔗糖、果糖、半乳糖、麦芽糖和阿拉伯糖,不发酵甘露醇;PCR扩增序列与Hps同源性在98%以上。药物敏感性试验结果显示,3株分离菌对环丙沙星、恩诺沙星和氟苯尼考等抗菌药物高度敏感,对青霉素、林可霉素和甲氧苄啶等抗菌药物耐药。本研究获得的Hps分离株为疫苗研制提供了基础材料,为生猪养殖场选择敏感药物防控Hps感染提供了参考依据。

鼠抗猪圆环病毒2型“ORF7”多克隆抗体的制备及应用

为深入研究新鉴定的“ORF7”蛋白在猪圆环病毒2型(PCV2)感染中的作用,制备了鼠抗ORF7蛋白的多克隆抗体并进行初步应用。首先,克隆ORF7基因,分别构建了重组原核表达质粒pGEX-6p-1-ORF7和重组真核表达质粒pCDH-CMV-Flag-ORF7。将pGEX-6p-1-ORF7进行诱导表达,确定在IPTG 0.8 mmol/L、37℃下诱导12 h表达量最高,且以包涵体形式表达,分子质量大小约为44 ku。将目的蛋白纯化后免疫Balb/c小鼠,第4次免疫后收集小鼠血清,ELISA方法检测其抗体效价为1∶10000,可用于免疫印迹试验检测pGEX-6p-1-ORF7表达的重组蛋白。应用获得的多克隆抗体通过IFA检测PCV2感染的PK-15细胞中ORF7蛋白的表达,Western blot检测pCDH-CMV-Flag-ORF7和pEGFP-N1-ORF2蛋白的表达,结果表明制备的多克隆抗体可用于IFA和Western blot检测ORF7蛋白。研究结果为探究ORF7在PCV2感染中的作用提供了基础材料。

非洲猪瘟的流行概况及防控策略

非洲猪瘟(ASF)由非洲猪瘟病毒(ASFV)引起家猪和野猪的一种高度接触性、致死性传染病,本病发病过程短,发病率和死亡率最高可达100%。目前,针对ASF的防控既无有效的疫苗,也无有效的治疗方法,一旦发生只能全群扑杀。我国生猪的养殖量约占全球的1/2,ASF疫情的蔓延将对我国生猪养殖造成重大危害,防控和根除ASF刻不容缓。由于对ASF的流行特点、传播途径、感染机制等的研究还不深入,对本病的防控还缺少更加有效的措施,还有待做全面深入的研究。本研究通过介绍ASF的流行概况、传染源、扩散途径、以及国外防控ASF的主要措施,分析其失败与成功的原因,借鉴其制定的根除计划及采取的防控措施,以期为我国ASF的防控提供参考。

检测猪繁殖与呼吸综合征病毒高致病性和经典毒株可视化RT-LAMP方法的建立

猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是目前影响养猪业的重要病毒之一,国内PRRSV是以美洲型为主,根据致病性的强弱又可分为高致病性(HP)和经典性PRRSV毒株,高致病性PRRSV是引起国内2006年'猪高热病'的主要病原。PRRSV属于条件性致病病毒,对PRRSV感染猪和发病猪的准确、快速检测是采取有效措施的前提和依据。环介导等温扩增技术(LAMP)是一种敏感、快速、操作相对简便的核酸扩增技术,整个反应在单一温度下进行,反应结果可以通过肉眼观察,在动物病原检测方面应用较多。本试验通过GenBank获得了HP-PRRSV和经典PRRSV分离株序列,选择2种毒株共同的保守基因区段,设计了用于检测PRRSV的RT-LAMP引物。通过对反应体系、反应温度、特异性、敏感性等优化,建立了检测PRRSV的RT-LAMP方法。建立的方法总体系为25μL,外引物终浓度为0.20μmol/L、内引物终浓度为1.60μmol/L,63.0℃恒温作用1 h,给反应产物中加入1μL SYBR GreenⅠ,阳性结果呈绿色,紫外光下可见荧光,阴性结果呈橙色,紫外光下无荧光。方法对PRRSV RNA的最低检测质量浓度为9.44×10-5 mg/L。用建立的方法对临床送检的19份猪样品(血清和组织)进行检测,与国标(GB/T 27517-2011)的HP-PRRSV和PRRSV双重RT-PCR检测方法进行对比,双重RT-PCR方法检测出6份阳性,RT-LAMP方法检测出8份阳性。本试验建立了检测PRRSV经典毒株和高致病毒株的RT-LAMP方法,为PRRSV的检测提供了可选择的方法。

我国猪急性腹泻综合征冠状病毒研究进展

猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV),一种来源于蝙蝠的新型冠状病毒,于2017年1月在华南地区首次被发现,是冠状病毒科(coronaviridae)、α冠状病毒属(alphacoronavirus)的新成员。SADS-CoV主要感染5日龄以内新生仔猪,对初生仔猪的危害严重。SADS-CoV可引发引起剧烈呕吐、腹泻、严重脱水而导致新生仔猪急性死亡,短短4个月造成广东省4个猪场将近25 000头新生仔猪死亡,给养猪业带来巨大的经济损失。本研究基于SADS-CoV的国内外研究进展,对SADS-CoV的起源、流行概况、病原学、病毒的诊断方法、潜在的跨物种传播风险与防控方面进行综述,以期为该病的预防和控制提供参考。

非洲猪瘟疫苗研发中面临的问题和难点分析

非洲猪瘟(ASF)是目前全球养猪业面临的最具威胁性的重大疾病之一,引起ASF的病原是非洲猪瘟病毒(ASFV),本病具有传染性强、发病率高、致死率高的特点,造成的损失非常巨大。针对本病没有有效的药物和疫苗进行预防,一旦感染和发病,只能对疫点和周围一定范围内的猪进行扑杀,以控制和消灭疫情。疫苗免疫接种是防控传染性疾病的最重要和最有效的手段,但ASF疫苗的研发并不顺利,至今尚没有商品化的疫苗供临床生产上使用。由于对ASFV复杂免疫逃避机制认识的缺乏、病毒和宿主细胞相互作用了解的不足、病毒复制周期复杂、ASFV毒株在自然界的高变异性、病毒保护性抗原的鉴定困难等多方面因素的影响,使得ASF疫苗研发迟缓,影响了对ASF的防控。本文主要从ASFV病原学、病毒免疫逃逸、病毒对感染细胞的影响、病毒复制和保护性抗原鉴定等方面分析了ASF疫苗研究中的问题和难点,以期为ASF疫苗研究和疾病防控提供参考资料。

屠宰生猪肺脏健康状况评估及主要病原的检测

肺部感染引发的不同程度的肺脏病变在屠宰生猪的宰后检验中常有发现。本试验对某规模化生猪养殖企业屠宰生猪连续10周采集肺脏,每次取约300份肺脏,共3 000份肺脏进行健康评价,并每次选择8份病变肺脏(共80份)进行猪呼吸道疾病常见病原的核酸检测,通过分析可能引起屠宰生猪肺部感染的病原,以期为生猪的疾病防控、动物产品安全评估提供基础资料和参考。结果显示,3 000份肺脏中评估为健康的有1 822份,占60.7%(1 822/3 000);病变肺脏有1 178份,占39.3%(1 178/3 000);病变类型主要为炎症、肉变。80份病变肺脏中猪圆环病毒2型(PCV2)核酸阳性有16份,副猪嗜血杆菌(HPS)阳性有39份,猪链球菌(SS)阳性有36份,猪肺炎支原体(Mhp)阳性有4份;PCV2与Mhp、HPS、SS混合阳性率分别占到PCV2阳性数量的12.5%、56.25%、81.25%;未检测到猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪流感病毒(SIV)、巴氏杆菌(Pm)和猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)等病原。本次评估结果表明,屠宰生猪肺脏病变比例较高,引起肺脏发生病变的呼吸道病原主要为HPS、SS、Mhp和PCV2,且以和PCV2的混合感染居多。