人纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)在大肠杆菌中的表达和分离纯化

用ＰＣＲ方法从ｐＰＡＩＪ．７中扩增人纤溶酶原激活剂抑制物２型（ＰＡＩ－２）ｃＤＮＡ，与ｐＵＣ１８重组，经限制性内切酶片段分析与核苷酸序列分析，获得全长人ＰＡＩ－２ｃＤＮＡ．ＰＡＩ－２ｃＤＮＡ与原核表达载体重组，构建原核表达质粒并转化大肠杆菌．经温度诱导表达，重组ＰＡＩ－２占全菌总蛋白的１４％，以可溶性形式存在，具纤溶抑制活性．工程菌发酵、压榨后，用硫酸铵分级沉淀，沉淀物经分子筛、离子交换和疏水性色谱的分离，每升菌液可获得约３０ｍｇ纯度达９０％的蛋白质，比活性为１１８６６ＡＩＵ／ｍｇ蛋白质，得率为１９．２％．

人纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)在Pichia pastoris中的表达

用ＰＣＲ方法从ｐＰＡＩＪ．７中扩增人纤溶酶原激活剂抑制物２型（ＰＡＩ－２）基因，与ｐＰＵＣ１８重组，经限制性内切酶片段分析与核苷酸序列分析，获得全长人ＰＡＩ－２基因．ＰＡＩ－２基因与表达载体ｐＰＩＣ９重组，构建受乙醇氧化酶１基因（ＡＯＸ１）启动子与转录终止区控制的酵母表达质粒，转化ＧＳ１１５宿主菌，经表型筛选和ＰＣＲ扩增筛选阳性克隆，用甲醇诱导表达，重组ＰＡＩ－２以分泌型表达，占分泌总蛋白的３０％，具ＰＡＩ－２抗原性，与低分子量尿激酶形成了抗ＳＤＳ复合物，具抑制纤溶的活性（９１．４ＡＩＵ／ｍｌ）．对培养条件也进行了探讨．

降低细胞内tTG活性可使细胞获得对TNF-α的抗性

用 Northern印迹证实在 He La细胞中有 t TG的表达 ,且这种表达受 TNF-α的上调 .构建t TG反义真核表达质粒并转染 He La细胞 ,用 G41 8抗性筛选稳定表达的转染细胞 ,并用 Northern印迹和 t TG活性测定进一步分析反义 t TG的转录 .用结晶紫及 MTT法证实阳性细胞克隆获得了对 TNF- α的抗性 ,而转染表达载体 pc DNA3的细胞仍对 TNF- α敏感 .结果表明降低 t TG活性能使细胞对 TNF-

大肠杆菌表达的重组人PAI-2的纯化及其生物化学特性

目的研究建立大肠杆菌表达的重组人ＰＡＩ－２（ｒｈＰＡＩ－２）的纯化方法，并对ｒｈＰＡＩ－２蛋白进行理化和生物学性质的研究。方法工程菌被高压匀浆后，经硫酸铵分级沉淀，用分子筛、离子交换和疏水性色谱进行分离，得到了ｒｈＰＡＩ－２蛋白。对ｒｈＰＡＩ－２进行了复性，对ｒｈＰＡＩ－２的温度、ｐＨ、盐浓度、氧化剂敏感性、二级速率常数及抗ＳＤＳ复合物形成等理化性质和生物学特性进行了测定。结果每升菌液可获得约３０ｍｇ纯度达９０％的蛋白质，比活性为１１８６６ＡＩＵ／ｍｇ，得率为１９．２％。当温度高至６０℃时，ｒｈＰＡＩ－２迅速失活；当ｐＨ小于３时，ｒｈＰＡＩ－２完全失活；当盐浓度和Ｈ２Ｏ２浓度分别在１．５和０．５ｍｏｌ／Ｌ时，ｒｈＰＡＩ－２的活性仍维持在９０％以上；ｒｈＰＡＩ－２可与尿激酶形成抗ＳＤＳ复合物。结论成功地从大肠杆菌中分离纯化了ｒｈＰＡＩ－２。ｒｈＰＡＩ－２与天然ＰＡＩ－２在理化性质和生物学特性上基本一致。

锂离子电池硅负极材料充锂过程的跨尺度模拟方法

针对硅(Si)负极材料充锂(Li)过程产生的中间相如何引起其失效,依然缺少微观结构、性能与宏观现象上的关联,提出对Si负极材料充Li过程进行多尺度的计算模拟,建立多尺度耦合模型。该方法利用第一性原理计算与有限元模拟的跨尺度方法,揭示了锂离子电池Si负极充放电过程中原子结构及相稳定性的变化,计算了形成的不同中间相化合物的物理性能。随后利用有限元方法从介观尺度揭示了Si负极材料充Li过程的变形行为。跨尺度模拟结果表明,Si负极材料在充电过程中因形成不同中间相化合物会导致明显的体积膨胀。Si负极材料的膨胀会引起临近颗粒接触、挤压从而产生应力集中甚至发生失效,进而会降低电池的循环性能。

人纤溶酶原激活剂抑制物2型在胃癌组织中的分布与表达

目的探讨人纤溶酶原激活剂抑制物２型（ＰＡＩ－２）基因在胃癌组织中表达与分布的作用。方法采用ＡＢＣ方法检测发生和未发生淋巴结转移的胃癌组织中ＰＡＩ－２、ｕＰＡ和ＰＡＩ１的表达，各３０例。结果ＰＡＩ－２主要在平滑肌细胞中表达，ｕ－ＰＡ和ＰＡＩ－１主要在肿瘤细胞中表达（Ｐ＜０．０１）。ＰＡＩ－２在胃癌组织中的分布以及表达程度与肿瘤的淋巴结转移相关。肿瘤的淋巴结转移与肿瘤细胞是否表达ＰＡＩ－２无关（Ｐ＞０．０５）。但在有ＰＡＩ－２表达的病例中，肿瘤的淋巴结转移却与肿瘤细胞ＰＡＩ－２的表达程度呈正相关，而与平滑肌细胞ＰＡＩ－２的表达程度呈负相关（Ｐ＜０．０１）。

PAI-2ΔCD突变体的构建及其在大肠杆菌中的表达与纯化

目的构建ＰＡＩ－２ΔＣＤ突变体基因，实现在大肠杆菌中的表达并建立重组人ＰＡＩ－２ΔＣＤ的分离纯化方法。方法用ＰＣＲ扩增ＰＡＩ－２ΔＣＤ基因，经限制性内切酶片段分析及核苷酸序列分析后，突变体基因与原核表达载体ｐＬＹ－４重组并转化蛋白酶缺陷型菌株ＪＦ１１２５。经温度诱导表达，表达产物用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法和纤溶抑制活性测定等方法鉴定。工程菌发酵后，经高压匀浆破菌，用离子交换、疏水性色谱和分子筛进行分离。结果经温度诱导表达，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ证实在相应相对分子质量处出现表达条带，约占全菌总蛋白的１５％。Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法证实表达产物具有ＰＡＩ－２免疫原性，溶圈抑制法及翻转板法证实表达产物具有纤溶抑制活性。５Ｌ发酵菌液可得湿菌约１００ｇ，经多步纯化后，每升发酵菌液可得纯度达９７％的ＰＡＩ－２ΔＣＤ约３６ｍｇ，比活性为２８６４０ＡＩＵ／ｍｇ。结论成功构建了ＰＡＩ－２ΔＣＤ突变体，实现了在大肠杆菌中的表达，并成功地分离纯化了重组人ＰＡＩ－２ΔＣＤ蛋白。

抗菌肽ABP3基因的克隆及其在Pichia pastoris中的表达

用化学合成法合成以植物偏爱密码子编码的新抗菌肽 Ａ Ｂ Ｐ３ 基因片段，合成片段拼接后，与ｐ Ｕ Ｃ１９ 重组，经限制酶片段分析与核苷酸序列分析，获得抗菌肽 Ａ Ｂ Ｐ３ 基因。 Ａ Ｂ Ｐ３基因与表达载体ｐ Ｐ Ｉ Ｃ９ 重组，构建受乙醇氧化酶１ 基因（ Ａ Ｏ Ｘ１） 的启动子与转录终止区控制的酵母表达质粒，转化 Ｇ Ｓ１１５ 宿主菌，经表型筛选，阳性克隆用甲醇诱导表达，重组 Ａ Ｂ Ｐ３ 以分泌型表达，具抗菌活性，且符合 Ａ Ｂ Ｐ３

t PA、u PA/u PAR及其抑制剂PAI 1在乳腺肿瘤的表达

目的 研究组织型纤溶酶原激活剂（ｔＰＡ） 、尿激酶型纤溶酶原激活剂（ｕＰＡ） 及其受体ｕＰＡＲ、１ 型纤溶酶原激活剂抑制剂ＰＡＩ１ 在乳腺肿瘤中的分布及酶学活性。 方法 用免疫组织化学ＡＢＣ方法，分析４ 种因子在乳腺肿瘤组织中的定位及半定量表达，用发色底物法测定乳腺肿瘤组织提取物中的ｔＰＡ 和ｕＰＡ 的活性。 结果 ｔＰＡ、ｕＰＡ、ＰＡＩ１ 主要分布在正常腺上皮及癌上皮细胞的胞质中，ｕＰＡＲ 则在癌细胞的胞膜及胞浆中；总ＰＡ 活性和ｔＰＡ 活性在乳腺良、恶性组织中均无显著性改变，但ｕＰＡ，ｕＰＡＲ 和ＰＡＩ１ 在乳腺癌组织中的表达明显高于良性组织及癌旁组织；ｕＰＡ／ｕＰＡＲ在转移灶中的表达较原发灶有不同程度的下降，而ＰＡＩ１ 在转移灶中却较原发灶中为高。 结论 ｔＰＡ 可能与乳腺癌的恶性表型无关。而ｕＰＡ／ｕＰＡＲ 与恶性表型相关；ｕＰＡ／ｕＰＡＲ 和ＰＡＩ１的相互制约及平衡在调节肿瘤原发灶癌细胞的移动中可能起到重要作用。

引信用长贮存寿命高比功率锂离子原电池

针对弹道修正引信用储备式化学电池存在的输出电流有限或工作时间短的问题,提出采用锂离子原电池。通过电解液添加功能剂与正极、负极匹配形成稳定的储存界面,提升贮存寿命;通过电芯材料、结构及正负极界面优化,改善电极反应的极化影响,提高功率输出性能。测试评估结果表明,新型锂离子原电池目前满电荷长期贮存寿命为10年,可在-40~50℃温度范围内1 A大电流放电,具有高比功率特性。

基于最小二乘法的数据采集仪电压校准系数提取方法

针对传统线性校准系数只适应开放性操作不适用于黑匣子采集模式的电压数据校准,且只能使用通过原点的直线获得校准系数,不能消除非线性误差的问题,提出了基于最小二乘法的数据采集仪电压校准系数提取方法。该方法采用最小二乘法原理建立与所有参数点相关的数学模型,将数学模型的系数作为电压曲线的校准参数。实验验证表明,利用该系数建立的数学模型与参数点相关性很好,可有效消除非线性误差,校准后的电压数据更接近于实际真值,激活段的数据准确率可以提高20%以上。

铅酸储备电池在非旋转弹引信上的应用探索

铅酸储备电池是旋转弹电引信使用最多的化学电源之一,在非旋转条件下使用较为少见。针对非旋转弹无转速或转速低的特点,分析了铅酸储备电池应用在非旋转弹引信上需解决可靠激活及电解液保持两项关键技术,提出了利用后坐激活、利用引信其他部件提供的外力激活及特别设计的机构激活解决可靠激活和利用在电池电极间填充吸附隔膜解决电解液保持等技术途径。验证试验表明:铅酸储备电池可以在非旋转条件下应用,发挥其可靠性高、工艺简单以及低成本等优势,为非旋转弹电引信电源的研制提供了更多的技术选择方案。

腰背痛与维生素D_3受体基因多态性

[目的 ]目前认为维生素D3 的作用是由一种复杂的维生素D内分泌系统支持的。在腰背部的主要力学结构中 ,椎间盘、骨骼和韧带等都受到该体系的影响。而在单卵双生子中发现两者椎间盘退化的高度相似性 ,提示了遗传因素的影响。本研究为进一步探索维生素D3 受体 (VDR)基因多态性与腰背痛的发病关系。 [方法 ]用PCR SSCP技术对VDR基因的TaqI酶切位点上的多态性进行检测。在工人和教师两组血样中 ,工人组和教师组分别随机抽取 30和 2 0份全血标本。从全血样品中用试剂盒提取DNA ,然后对模版进行PCR扩增 ;扩增产物煮沸变性后骤冷 ,离心后上样进行电泳 ,电泳过程中保持 4℃温度 ,至胶的 2 /3处 ;然后将凝胶固定 ,进行银染 ,显色后进行拍照。 [结果 ]发现各样本的条带数目无变化 ,但在工人组中有两个样本显示两个条带的位置明显改变。提示有可能存在点突变。 [结论 ]遗传因素可通过影响骨骼肌肉的生理功能 。

采用EXCEL表实现单相短路电流等电气计算

计算是设计工作中不可缺少的一部分,涉及到设备选型、整定、故障分析等,手算则较繁琐;而专用计算软件价格高,难修改。文章介绍了采用EXCEL表格实现数据检索、公式计算,此方法简单易行,并可根据需要随时修改。

基于有限元法的贮液瓶跌落响应特性提取方法

针对目前无法对引信电源贮液瓶跌落过程内部现象和特性进行提取并观察分析的现状,提出了基于有限元法的引信电源贮液瓶跌落响应特性提取方法.该方法利用有限元法中的任意拉格朗日欧拉算法结合ANSYS/LS_DYNA软件对跌落响应过程进行特征提取,可以清晰地提取贮液瓶整个跌落过程中的应力变化等内部微观变化及特性.实例验证及跌落试验结果表明,该方法可以提取贮液瓶跌落过程响应特征,清晰地观察整个贮液瓶跌落过程中应力变化等微观变化,安全跌落高度判定准确率达97%.

基于BIXS方法的高浓度气态氚探测器设计

近年来,氚的监测在确保反应堆的安全运行、工作人员的健康安全有着重要作用,特别是对以氚为核燃料的聚变反应堆。基于β射线诱发的韧致辐射X射线谱仪(BIXS)由于记忆性效应低、探测器尺寸小已逐渐成为国内外研究的热点。利用蒙特卡洛方法(MCNP)对BIXS探测器的尺寸以及材料进行了优化设计。结果表明,在0.5 MPa的工作压力下,铍窗厚度为0.1 mm、铍窗镀金层厚度为125 nm的小型BIXS测量系统可实现氚气的在线测量和探测器的小型化,其中100 s探测限为1.79×108Bq。

Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂cDNA在P.pastoris酵母菌中的表达和鉴定

将编码３７９个氨基酸残基的ＰＡＩ－１ｃＤＮＡ插入到含ＡＯＸ１启动子和ＰＨＯ１分泌信号肽序列的甲醇营养型酵母载体中，构建成表达质粒ｐＹＩＳ－１．表达质粒转化Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓ甲醇营养型酵母细胞，筛选Ｈｉｓ＋Ｍｕｔ－表型的转化子，经低密度摇瓶培养，１％甲醇诱导表达７ｄ后，培液经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，ＰＡＩ－１生物活性测定和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ证实表达出分子量为４３～５１ｋＤ的４条ＰＡＩ－１条带．表达的ＰＡＩ－１能有效地分泌到培液中，占培液总蛋白的２６％左右，达４ｍｇ／Ｌ培液；其比活性为１．１６×１０４ＡＵ／ｍｇ．

心律失常与Coxsackie B病毒感染

病毒感染是心律失常的病因之一。实验研究及动物试验证明Cox B 组病毒(CBV)可致心律失常。感染后抗体在体内持续时间较长,测定病毒抗体可追溯病毒感染的情况。我们测定心律失常和其它疾病患者及健康对照者246例的CBV IgG 抗体(CBV-IgG),现报告如下。对象和方法对象1.心律失常组86例,均无器质性心脏病。男58例,女28例;年龄1～63岁;病程1个月～7年,多数<1年。ECG 示。激动异常72例(房、室和交界性早搏,窦速、窦缓及窦不齐、阵发性心动过速或房颤),异常12例(A-VBⅠ～Ⅲ度。

尿激酶受体在大肠杆菌中的表达及其多克隆抗体的制备

目的构建尿激酶受体（ｕｒｏｋｉｎａｓｅ－ｔｙｐｅｐｌａｓｍｉｎｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｏｒｒｅｃｅｐｔｏｒ，ｕＰＡＲ）表达质粒并在大肠杆菌中表达，用纯化的表达产物ｕＰＡＲ蛋白制备多克隆抗体并初步应用于肿瘤标本的检测。方法用基因工程的方法构建ｕＰＡＲｃＤＮＡ表达质粒ｐＬＹ４－ｕＰＡＲ，转化重组大肠杆菌在４２℃条件下诱导表达；利用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ进行纯化并用纯化后的抗原免疫新西兰兔制备多克隆抗体，应用制备的抗体对乳腺癌和肝癌中ｕＰＡＲ的分布进行检测。结果ｕＰＡＲ表达质粒在大肠杆菌中高效表达，表观Ｍｒ为３０×１０３左右。表达的ｕＰＡＲ占全菌蛋白的２０％左右；获得了效价为１∶３２的ｕＰＡＲ多克隆抗体；发现ｕＰＡＲ主要分布在癌细胞的表面及胞质内，而在癌旁组织中则较弱。结论ｕＰＡＲ在大肠杆菌获得高效表达，并制备得到多克隆抗体。ｕＰＡＲ在癌组织（乳腺癌及肝癌）与癌旁组织间的表达差异提示可将其应用到临床肿瘤的诊断与肿瘤转移的实验性研究中。

中小城市公路建设的社会经济价值分析

公路建设实质是一种投资经济行为,由此引起一系列的社会经济连锁反应,成为人们关注的热点问题。公路建设能否刺激城市经济发展,显然是城市执政者关注的问题。成功的建设中小城市公路需要解决的矛盾很多,如投资增长、公路带经济一体化等,重点对其中的社会经济价值作出分析。