浅谈高校动物生物安全三级实验室管理与经验交流

动物生物安全三级实验室(ABSL-3)作为国家新发再发传染病的生物安全体系基础支撑平台,为研究高致病性病原微生物的生物学特性、预防和治疗手段提供了至关重要的硬件基础。ABSL-3实验室也为高校“产学研”结合提供了重要支撑。ABSL-3实验室正常运行和科研工作顺利开展,离不开应急预案工作的精心策划和有效实施。此外,实验室合理的设计和布局也是规避和降低意外事故的关键因素。本文结合扬州大学ABSL-3建设管理实践,从应急预案准备工作入手对实验室建设布局、日常运行及污水处理、终末消毒具体措施和突发事件处置等方面的注意事项展开介绍,以期为今后操作各种病原微生物的生物安全实验室提供有益的参考。

银杏叶提取物配合康复锻炼治疗轻度认知障碍的临床疗效观察

目的比较银杏叶提取物+康复锻炼与银杏叶提取物治疗轻度认知障碍(mild cognitive impairment,MCI)疗效的差别,以及探讨事件相关电位(ERPs,P300)用于轻度认知障碍治疗疗效评价。方法150例MCI患者随机分为3组,银杏叶提取物+康复锻炼组、银杏叶提取物治疗组、空白对照组,进行3个月临床试验,试验前后均进行MMSE评分与ERPs检查,统计分析。结果银杏叶提取物+康复锻炼组、银杏叶提取物治疗组、空白对照组试验前后MMSE评分、P300的潜伏期的差值与波幅的差值比较,3组之间差异有统计学意义(P<0.001)。结论治疗后两治疗组患者认知功能均有改善,且银杏叶提取物+康复锻炼明显优于单纯银杏叶提取物治疗,P300能较客观地评价MCI治疗疗效。

禽网状内皮组织增生症病毒囊膜蛋白YxxL基序及其突变体病毒的拯救

禽网状内皮组织增生症病毒(REV)囊膜蛋白Env与病毒感染、复制、致病性密切相关,然其分子基础尚不清楚。本研究对NCBI中不同REV毒株Env序列分析发现,其胞浆区存在一个高保守且可能与病毒致病性有关的酪氨酸基序YxxL。通过定点突变以及分子传染性克隆技术,构建了REV Env蛋白YxxL基序2个突变体(Y突变为F,L突变为A)。通过转染DF1细胞,并经间接免疫荧光以及测序鉴定,拯救并获得了2个REV突变体病毒,分别命名为FxxL、YxxA。Env蛋白中YxxL保守基序的发现以及相应突变体病毒的拯救为研究REV Env蛋白及其YxxL基序在REV致病中分子作用基础提供了材料。

ADAM33基因多态性影响慢性阻塞性肺疾病气道炎症

目的探讨解整连蛋白和金属蛋白33(ADAM33)基因多态性与COPD气道炎症的关系。方法利用引物序列特异性聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法检测312例COPD患者4个位点(T2、T1、S2、Q-1)的基因型。同时检测患者诱导痰中细胞数及分类,以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL-8、血管内皮生长因子(VEGF)的含量,采用t检验分析基因型与炎症反应的关系。结果 T2位点GG基因型携带者较AA和AG基因型携带者诱导痰内细胞总数及TNF-α含量明显升高(P<0.01和P<0.05)。T1位点GG基因型携带者较AA和AG基因型携带者诱导痰淋巴细胞数量明显升高(P<0.05),但AA和AG基因型携带者诱导痰中IL-8含量较高(P<0.05)。Q-1位点GG基因型携带者较AA和AG基因型携带者诱导痰中VEGF和IL-8含量明显升高。S2位点GG基因型携带者较CC和CG基因型携带者诱导痰液细胞总数明显升高(P<0.05),前者诱导痰中IL-8含量明显增加(P<0.01)。结论 ADAM33基因多态性可能通过促进气道炎症而参与COPD的病理过程。

盐酸氨溴索对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织细胞凋亡和血清炎症因子的影响

目的研究细胞凋亡在大鼠慢性阻塞性肺疾病(简称慢阻肺)形成过程中的作用机制,并探讨盐酸氨溴索对慢阻肺大鼠肺组织细胞凋亡和血清炎症因子的影响。方法 34只健康SD大鼠随机分为3组:A正常对照组、B盐酸氨溴索组、C模型组。采用免疫组化法检测Bcl-2(b cell lymphoma/lewkmia-2)蛋白、Bax(Bcl-2 associated x protein)蛋白及Caspase-3蛋白的表达;采用血清酶联免疫吸附测定法测定各组血清中炎症因子(LTB4、IL-8、SP-D)的浓度。结果与A组比较,C组中Bax蛋白、Caspase-3蛋白以及炎症因子表达增多,Bcl-2蛋白的表达及Bcl-2/Bax减少,差异均显著(P<0.05);与C组比较,B组Bax蛋白、Caspase-3蛋白以及炎症因子表达减少,Bcl-2蛋白的表达及Bcl-2/Bax增高,差异均显著(P<0.05)。结论慢阻肺的发病机制可能与细胞凋亡有关,盐酸氨溴索在慢阻肺肺组织中发挥抗细胞凋亡和抗炎作用,其机制可能在于调控死亡信号通路中Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达以及抑制炎症因子的表达,起到肺保护的作用。

急性脑血管疾病血浆C型利钠肽和一氧化氮的临床分析

目的 探讨C型利钠肽和一氧化氮在急性脑血管疾病发生发展演变过程中的作用。方法 采用放射免疫非平衡法和分光比色法 ,对 35例脑梗死患者和 2 7例脑出血患者与 30例健康人进行C型利钠肽和一氧化氮代谢产物硝酸盐检测结果对比分析。结果 急性脑血管病组血浆C型利钠肽含量高于健康人组 (P <0 0 1) ,急性脑血管病组血浆一氧化氮代谢产物硝酸盐含量低于健康人组 (P <0 0 5 ) ,急性脑梗死与急性脑出血患者血浆C型利钠肽和一氧化氮代谢产物硝酸盐含量比较无显著差异 (P >0 0 5 )。结论 C型利钠肽和一氧化氮均参与脑血管疾病急性期的病理生化演变过程 ,可以作为判定预后的指标 ,并为探寻脑血管病急性期实施有效的脑保护治疗提供依据。

ADAM_(33)基因多态性与吸烟人群COPD及其肺功能相关性

目的探讨ADAM33基因多态性与吸烟人群COPD患者的相关性及其对COPD患者肺功能影响。方法利用PCR-RFLP方法检测COPD患者和健康对照者ADAM33基因中的4个位点单核苷酸多态性,分析ADAM33基因与COPD相关性及其对COPD肺功能影响。结果 T2G(P<0.001),T1G(P<0.001),S2C(P=0.03)等位基因的频率COPD组明显高于对照组;T1GG(P=0.0189)、T2GG(P=0.0026)基因型较野生型基因FEV1%预计值明显降低;T1GG(P<0.001)、T2GG(P<0.001)基因型TLCO%预计值较野生型明显下降。结论 ADAM33基因多态性与吸烟人群COPD有关,并对COPD患者肺功能产生了影响。

甲状旁腺素对新生大鼠心室肌细胞活力的影响

目的观察大鼠甲状旁腺素1-34(rat parathyroid hormone1-34,rPTH1-34)对体外培养新生大鼠心室肌细胞活力的影响。方法原代培养新生大鼠心室肌细胞,以0.1μmol/LPTH1-34分别孵育0、12、24、48、72h,噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞活力。结果心肌细胞活力在12h时最大(P<0.01),24h时开始下降,但仍高于正常水平(P<0.01),48h时降至正常水平,到72h降至正常水平以下(P<0.05)。结论0.1μmol/LPTH刺激12h时心肌细胞活力最旺盛。

多奈哌齐与左卡尼汀治疗痴呆模型大鼠的疗效比较

目的比较左卡尼汀和多奈哌齐对脑室注射链脲佐菌素(STZ)致痴呆大鼠的治疗作用。方法健康SD雄性大鼠32只,随机分为对照组、模型组、左卡尼汀组、多奈哌齐组(n=8)。模型组和治疗组在手术的第1、3天分别向两侧侧脑室内注射STZ 3 mg/kg,对照组给予相同体积的柠檬酸缓冲液。左卡尼汀组于手术10 d前给予左卡尼汀20 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,术后持续90 d,多奈哌齐组给予多奈哌齐0.45 mg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,其余两组给予等量生理盐水。术后第10、90天Morris水迷宫试验,观察大鼠学习记忆能力。术后8 w处死大鼠取海马送电镜观察神经元凋亡情况。结果术后10 d水迷宫测试,与对照组比较,模型组、左卡尼汀组、多奈哌齐组的潜伏期延长,过平台次数下降(P<0.01)。术后治疗90 d,与模型组比较,多奈哌齐组的潜伏期缩短,过平台次数增加(P<0.01),左卡尼汀组潜伏期缩短(P<0.05),过平台次数无明显增加(P>0.05)。左卡尼汀组与多奈哌齐组比较各指标差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,两治疗组电镜下观察大鼠海马细胞结构细胞凋亡程度轻,以多奈哌齐治疗组明显。结论左卡尼汀与多奈哌齐都能减轻AD模型鼠海马神经元的凋亡,从而起到改善临床症状的作用,左卡尼汀效果不如多奈哌齐。

探索高校教师党员引领大学生成长成才

高校教师党员是高校教书育人的重要力量,尤其在学生成长成才方面发挥了不可估量的作用。广大高校教师党员应以高度认真负责的态度,率先垂范、言传身教,以坚定的理想信念、规范的日常行为、出色的专业能力和良好的教学风气启迪大学生,引导大学生成长成才。

一类改进的含分布时滞金融系统的动力学分析

针对一类改进的含分布时滞金融系统进行了动力学分析.通过增维将系统转化为等价的四维连续自治系统,并对该系统的平衡点进行分析.利用劳斯-霍维茨定理得出系统在平衡点达到稳定的参数条件.同时,利用Lyapunov指数和Hopf分岔定理等,对该系统进行了进一步分析,并得出Hopf分岔的参数条件.借助计算机对该四维系统进行数值模拟,得到相应的相图、时序图、Hopf分岔图以及Poincare截面图,验证了理论推导的准确性.

二级学院对大学生干部的培养探析

学生干部直接服务于本学院的同学,对学生干部的培养要充分考虑其所处的环境因素,了解学生干部的基本特点,通过提升思想引领,加强行为指导,努力打造一支"政治坚定、素质全面、模范表率、堪当重任"的骨干力量。

罗格列酮对糖尿病大鼠血清MMP-9及外周血单核细胞MMP-9mRNA表达的影响

目的:观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)配体罗格列酮对糖尿病大鼠血清基质金属蛋白酶9(MMP-9)浓度和外周血单核细胞mRNA表达的影响。方法:30只SD大鼠随机分为三组,对照组、糖尿病组和罗格列酮组,每组10只。糖尿病组和罗格列酮组腹腔注射链脲霉素制作糖尿病大鼠模型后,罗格列嗣组以罗格列酮灌胃,5 mg·kg^(-1)·d^(-1),共28 d,对照组和糖尿病组以等量0.9%氯化钠溶液灌胃,比较治疗前、后的血清MMP-9浓度的变化,分离外周血单核细胞,RT-PCR检测MMP-9 mRNA的变化。结果:处理28 d后血清MMP.9浓度明显降低(P<0.01),外周血单核细胞MMP-9mRNA表达量明显降低。结论:罗格列酮可以降低糖尿病大鼠血清MMP-9及外周血单核细胞MMP-9mRNA表达,提示其可能通过抑制MMP-9表达稳定动脉粥样硬化斑块。

慢性阻塞性肺疾病大鼠肺组织中IGF-1、IGFBP3表达及其与气道重塑的关系

目的观察慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺组织中胰岛素样生长因子1(IGF-1)、胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP3)的表达情况,探讨COPD气道重塑的机制。方法将20只雄性Wistar大鼠随机分成模型组和对照组各10只。模型组采用香烟烟熏法制备COPD模型,将大鼠放入熏烟箱内,每次放入10支香烟点燃,持续30min,3次/d,共90 d;对照组常规饲养。处死大鼠,取肺组织,采用HE染色法观察组织形态学变化,并测量细支气管管壁厚度;采用免疫组化法和Real-time PCR法分别检测肺组织中IGF-1、IGFBP3蛋白及mRNA表达;采用Pearson法分析IGF-1、IGFBP3蛋白表达与细支气管管壁厚度的相关性。结果与对照组相比,模型组细支气管管壁厚度增高,肺组织IGF-1、IGFBP3蛋白及mRNA表达增强(P均<0. 01)。IGF-1、IGFBP3蛋白表达与细支气管管壁厚度均呈正相关(r分别为0. 658、0. 654,P均<0. 01),IGF-1蛋白与IGFBP3蛋白表达呈正相关(r=0. 810,P <0. 01)。结论 COPD大鼠肺组织中IGF-1、IGFBP3表达升高,其可能通过促进气道周围细胞的增殖而参与COPD的气道重塑。

不同剂量沐舒坦对老年慢性阻塞性肺疾病急性加重期痰液中炎性细胞因子的影响

目的观察不同剂量沐舒坦对老年慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)痰液中炎性细胞因子(IL-6、IL-8、TNF-α)的影响,旨在寻找最佳治疗效果的最小沐舒坦剂量。方法选择老年AECOPD患者194例,随机分成4组,每组50例。其中,A、B、C组分别给予沐舒坦30、90、330 mg/次,D组给予若通4 mg/次,3次/d,连续静滴7d。分别观察各组入院第1、4、7天痰液中IL-6、IL-8、TNF-α水平的变化。结果与A、B、D组比较,C组于入院第4天和第7天痰液中IL-6、IL-8、TNF-α下降最明显(P均<0.05);A、B、D组入院第4天与入院第7天,痰液中IL-6、IL-8、TNF-α变化不明显(P均>0.05)。结论短期大剂量应用沐舒坦能显著降低老年AECOPD患者痰液中IL-6、IL-8、TNF-α水平,具有良好的抗炎作用。

防衰老不妨吃点黑

中年之后，人体慢慢进入衰老状态，所以中老年人的饮食要比年轻时更讲究，比如在饮食中多吃些黑色食物，可起到预防慢性疾病、增强身体抵抗力、抗老防衰的功效。

犬冠状病毒JS1706和JS1712毒株基因组3′端分子特性分析

为了全面了解犬冠状病毒(CCoV)分离毒株JS1706和JS1712基因组3′端主要结构蛋白基因和非结构蛋白基因的分子特征,本研究设计了8组引物进行RT-PCR扩增,产物经测序和拼接后,获得了约8.7 kb基因组片段,该基因组结构及其编码蛋白顺序为5′-S-3abc-E-M-N-7ab-3′。对CCoV JS1706、JS1712株8.7 kb基因组核苷酸序列与α冠状病毒属参考毒株的相同区域核苷酸序列进行比对,结果表明,2个分离株与CCoVⅡ型参考毒株相似性最高(83.4%~93.1%),其次为FCoVⅡ型参考毒株(87.1%~87.9%)、TGEV参考毒株(86.1%~86.8%)、CCoVⅠ型参考毒株(72.0%~72.1%)和FCoVⅠ型参考毒株(67.5%~69.9%)。JS1706、JS1712毒株与同属冠状病毒参考株的结构蛋白S、E、M和N蛋白氨基酸相似性分别为46.4%~95.2%、75.6%~100%、82.8%~99.2%和78.5%~99.7%。说明同属内冠状病毒的S基因变异度大,E、M、N基因相对保守。根据基因组3′端8.7 kb核苷酸序列和S蛋白氨基酸序列相似性比对结果,JS1706和JS1712毒株均与泛嗜型原型株CB/05相似性最高,分别为93.0%~93.1%、94.8%~95.2%,其他结构蛋白包括E、M和N氨基酸序列比对也发现与CB/05株的相似性较高,分别为97.6%~100%、92.4%~93.1%和97.9%。S蛋白氨基酸序列的进一步分析表明,JS1706和JS1712毒株的S蛋白N端有一些特有氨基酸,S蛋白氨基酸序列中没有明显的S1/S2蛋白酶切位点(RRARR),但在958—963位氨基酸有S2′裂解位点特征基序(KRKYRS)。基于S蛋白氨基酸序列构建的系统发育进化树分析显示,CCoV JS1706和JS1712株与CCoVⅡa亚型参考毒株和FCoVⅡ型参考毒株聚集形成一个分枝。CCoV JS1706和JS1712株非结构蛋白的编码基因ORF3abc和ORF7,其结构、大小与经典疫苗株INSAVC-1相似,无明显插入、缺失和移码突变。本研究有助于深入了解国内CCoV流行毒株的分子特性,为后续分子流行病学调查、诊断试剂和疫苗研发奠定了基础。

国内活禽市场新型环形病毒AGV2的发现

为了解国内鸡群是否存在新型环形病毒AGV2,研究对来自扬州的一个活禽市场的20份鸡羽囊样品进行了AGV2的PCR检测。通过对鸡羽囊DNA提取、PCR扩增以及序列分析,在20份样品中检测到4份阳性样品。测序比对发现,本研究检测到的国内AGV2序列与NCBI中发表的AGV2的同源性为95.7%~99.4%。并对一份阳性样品的PCR产物进行了TA克隆,测定了该PCR的灵敏度为2.7个拷贝数。这一结果不仅首次证明国内活禽市场存在AGV2,而且为进一步开展国内鸡群AGV2的分子流行病学及其致病性等研究奠定良好的基础。

J亚群禽白血病病毒囊膜蛋白胞浆区酪氨酸基序及其变体的表达

J亚群禽白血病病毒(ALV-J)囊膜蛋白Env被认为与其致病致瘤密切相关,然其分子基础尚不清楚。在Env胞浆区发现免疫及肿瘤疾病发生相关的酪氨酸基序(Yxx M、ITIM、类ITAM)基础上,研究对Gen Bank中不同ALV-J毒株Env进行了统计分析。结果发现,34.7%ALV-J毒株Env仅存在ITIM,63.9%ALV-J毒株Env同时具有ITIM以及Yxx M,1.4%ALV-J毒株Env具有Yxx M以及类ITAM。同时,还构建了JS-NT以及4817毒株Env相应酪氨酸变体表达质粒,并在DF1细胞中获得了良好的表达。这些发现及构建的表达质粒,为进一步研究ALV-J Env在ALV-J致病致瘤中的作用及其分子机理奠定了基础。