小反刍兽疫H蛋白主要抗原表位的原核表达

目的表达小反刍兽疫病毒H蛋白的主要抗原位点用于检测与预防。方法用DNAStar分析小反刍兽疫病毒H基因的主要抗原位点,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从病羊组织中扩增PPRV的H基因的主要抗原位点并克隆到原核表达载体PET-28b中,最后用PCR、酶切和测序分析对重组质粒进行鉴定;将重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta中,经不同浓度的IPTG诱导表达PPRVH基因的主要抗原位点;用SDS-PAGE和Western-blotting分析所有蛋白的表达。结果将RT-PCR产物电泳,得到与预期大小相符的特异性片段;对重组质粒PET-28b-H66-249和PET-28b-H281-550酶切后,均出现预期相符的片段;DNA测序表明插入片段的序列与小反刍兽疫H蛋白基因完全一致,其大小分别为569bp和831bp;将重组表达的蛋白经SDS-PAGE和Western-blotting检测,证明所有的蛋白均得到表达。结论成功表达了PPRVH基因的主要抗原蛋白,为日后的检测与预防工作奠定了基础。

小反刍兽疫病毒N、H和F蛋白的真核表达

目的构建小反刍兽疫病毒(PPRV)H、N、F、NF重组真核表达质粒并观察其在真核细胞内的表达情况。方法采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从病羊组织中扩增PPRV的N、H、F基因序列并克隆到真核表达载体pIRES1neo中,最后用PCR、酶切和序列分析对重组质粒进行鉴定;将重组质粒以磷酸钙介导法转染Vero细胞,用免疫荧光方法鉴定其在细胞中的表达。结果将RT-PCR产物电泳,得到与预期大小相符的特异性片段;重组质粒经pIRES1-N、pIRES1-H、pIRES1-F和pIRES1NF酶切后,均出现预期相符的片段;DNA测序表明插入片段的序列与小反刍兽疫病毒N、H、F蛋白基因序列完全一致,其大小分别为1575bp、1830bp和1641bp;将重组质粒感染真核细胞,经免疫荧光检测,证明所有蛋白均得到表达。结论成功构建了重组真核表达质粒pIRES1-N、pIRES1-H、pIRES1-F和pIRES1NF,为继续进行基因免疫研究奠定了基础。

猪链球菌2型四川分离株毒力基因的检测及其序列分析

根据猪链球菌2型的MRP、EPF和SLY基因设计合成了四对引物,对我们分离鉴定的2005四川分离株进行毒力因子检测,并对阳性产物测序比较。结果以分离株为模板,获得了与预期结果一致的867bp(MRP)、572bp(EF)的2个片段,以及SLY的长度为1502bp目的片段(外引物)和1443bp的目的片段(内引物)。说明分离株SSsc0501为MRP+EF+SLY+,属于具有3种主要毒力因子的强毒株。经对PCR阳性产物测序及序列分析,结果其与P1/7株的核苷酸序列完全一致,与1933株的同源性达99.7%,仅在128位、217位、744位、1380位、1386位的5个核苷酸发生突变。在氨基酸水平上SSsc0501株与1933株的同源性达99.6%,有2个氨基酸发生替代。

内蒙古自治区2009年至2011年麻疹疫苗疑似预防接种异常反应监测分析

目的:监测并分析麻疹疫苗的安全性和疑似预防接种异常反应发生特征。方法:对内蒙古2009年至2011年麻疹疫苗接种后发生并报告的预防接种异常反应进行调查分析。结果:全自治区报告疑似预防接种异常反应281例,其中一般反应231例,异常反应40例,偶合症7例,心因性反应3例。结论:麻疹疫苗安全性较好。

小反刍兽疫病毒F蛋白抗原位点的克隆与表达

目的表达小反刍兽疫F蛋白的抗原位点用于检测与预防。方法用DNAStar分析小反刍兽疫的抗原位点,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,从病羊组织中PPRV的F基因的抗原位点并克隆到原核表达载体PET-28b中,最后用PCR、酶切和测序分析对重组质粒进行鉴定;将重组质粒转化到大肠杆菌Rosetta中,经ITPG诱导表达PPRVF基因的抗原位点;用SDS-PAGE和Western-Blotting分析抗原位点蛋白的表达。结果将RT-PCR产物电泳,得到与预期大小相符的特异性片段;对重组质粒PET-28b-F35-111(pZLW013)、PET-28b-F143-485(pZLW014)和PET-28b-F323-485(pZLW015)酶切后,均出现与预期相符的片段;DNA测序表明插入的片段的序列与小反刍兽疫F基因的抗原位点序列分别完全一致,其大小分别为251bp、1053bp和514bp;将重组表达的蛋白经SDS-PAGE和West-ern-Blotting分析,证明小反刍兽疫抗原位点F35-111没有表达、抗原位点F143-485和F323-485得到表达。结论成功表达了PPRVF基因的两段抗原位点蛋白,为日后检测与预防工作奠定了基础。

小儿疱疹性咽峡炎和手足口病的对比研究评价

近年来,小儿疱疹性咽峡炎和手足口病的发病率有增长趋势,对儿童健康影响较大,及时有效采取预防和治疗尤为关键。但目前疱疹性咽峡炎不是法定报告传染病,所以未得到公众的广泛关注。本文主要通过病原学、临床表现和治疗方案的综合对比研究,探讨疱疹性咽峡炎与手足口病的异同点,为以后的预防控制工作提供科学的参考依据。

内蒙古自治区2015年～2017年消除麻疹进展分析

目的:了解2015年~2017年我区麻疹流行病学特征,并对消除麻疹提供科学依据。方法:运用描述流行病学方法,对2015年~2017年我区麻疹疫情资料进行分析。结果:我区2015年~2017年共报告麻疹病例1073例,各年报告发病率分别为2.89/10万、1.12/10万、0.27/10万。麻疹发病具有明显的季节性,12~28周高发,占病例总数75.58%。结论:应进一步提高自治区麻疹常规免疫(MCV)接种率,将常规免疫作为基础,重点人群麻疹疫苗补充免疫(MV SIA)作为补充,控制麻疹传播直至消除麻疹。

内蒙古自治区2005～2015年麻疹实验室网络运转情况分析

目的评价内蒙古自治区2003年成立以后麻疹实验室2005~2015年网络的运转情况。方法对内蒙古自治区2005~2015年麻疹实验室网络的各项监测数据进行分析。结果 (1)血清学监测:全自治区2005~2015年共采集麻疹血清学标本15 886份,标本的采集率为83.70%。其中麻疹免疫球蛋白M(Immunoglobin M,IgM)抗体阳性8 000份,阳性率为60.16%;共采集风疹血清学标本4 333份,风疹IgM抗体阳性1341份,阳性率为30.94%。(2)病原学监测:2005~2015年分别从2 967份咽拭子中分离到麻疹野病毒179株。送至中国疾病预防控制中心国家麻疹实验室基因序列测定和分析均为H1a基因型;风疹病毒株14株,送至中国疾病预防控制中心国家麻疹实验室基因序列测定和分析13株为1E基因型,1株为2B基因型,表明H1a基因型为内蒙古自治区麻疹的优势基因型,1E基因型为风疹的优势基因型。(3)实验室网络质量控制:2005~2015年内蒙古自治区麻疹网络实验室均通过了国家及世界卫生组织(World Health Organization,WHO)麻疹实验室职能考核和现场认证;2005~2006年省级对市实验室进行现场考核,12盟市均通过验收,2007~2015年对市级实验室进行了麻疹、风疹盲样考核,12盟市均通过了盲样考核,复核样考核,麻疹符合率均超过90%,风疹符合率均大于70%,除2015以外。结论 2007~2015年内蒙古自治区麻疹网络实验室运转良好,建立了麻疹/风疹快速RT-PCR鉴别诊断、病原学监测的网络实验室和比较健全的质量体系,为控制和消除麻疹和风疹提供了良好的实验室基础。

基于RT-qPCR方法对新冠病毒4种基因型鉴定的可行性研究

严重急性呼吸道综合征冠状病毒2(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)的广泛传播强调了对该病毒进行持续监测的紧迫性,以便早发现并采取预防措施。虽然全基因组测序(Whole genome sequencing, WGS)作为SARS-CoV-2检测的金标准,但是其专业性和昂贵成本限制了其在各种情境下的广泛应用。在资源匮乏的地区,迫切需要一种低成本高效率的替代方法。实时荧光定量PCR(Real-timereverse transcription quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)提供了一种经济、快速的方法,同时有效补充了WGS方法。本研究旨在验证SARS-CoV-2 Omicron BF.7/BA.5.2/XBB/BQ.1及亚分支变异株单重核酸检测试剂盒(RT-qPCR法)的性能,并通过对101例SARS-CoV-2阳性临床样本进行评估,验证其在实际应用中的可行性。研究结果显示,该试剂盒与“野生型”SARS-CoV-2、Alpha、Beta、Delta变异株和甲型流感病毒参考株之间无交叉反应,最低检测限为100拷贝/mL。在101例新冠病毒核酸阳性样本中,该试剂盒对Omicron BF.7/BA.5.2/XBB/BQ.1及亚分支变异的检测结果与WGS检出结果完全一致。因此,该RT-qPCR试剂盒为SARS-CoV-2 Omicron变异株亚型的快速鉴定提供了一种简单、经济且高效的方法,可作为WGS的有效补充方案。

2008—2011年内蒙古自治区手足口病流行特征分析

目的 分析内蒙古自治区手足口病的流行病学特征，为预防和控制手足口病提供依据。方法 利用描述性流行病学方法对内蒙古自治区2008-2011年手足口病流行病学资料进行分析。结果 内蒙古自治区2008-2011年累计报告手足口病82-161例，其中重症病例616例，死亡22例；不同年份、不同季度和不同地区手足口病的发病率均不同；发病高峰主要集中在6-8月，比南方城市的高峰期推迟1~2个月；发病人群主要集中在1~5岁，占总发病数的82.33%；男性发病率高于女性，构成比为1.46：1，市区发病率高于旗县。结论 内蒙古自治区手足口病具有明显的时间、地域、人群流行特征，而且市区发病率高于旗县，因此短时间内易造成暴发与流行，提示应采取有效的预警监测，应急处置和宣传教育等措施来预防手足口病。

柯萨奇病毒A16型的B1a和B1b两个分支在内蒙古自治区共同流行

研究2010年引起内蒙古自治区手足口病流行的柯萨奇病毒A组16型(Coxsackie virus A16,CVA16)的分子流行病学特征。采集内蒙古自治区12个盟市门诊就诊的888名手足口病患者粪便和咽拭子标本共921份,进行病毒分离,然后利用实时荧光PCR对阳性分离物进行CVA16的鉴定。从临床症状分别为普通型、重型和死亡病例的临床标本中分离的CVA16中随机选取50株代表株进行VP1编码区扩增及核苷酸序列测定和分析,与其他各基因型和基因亚型的CVA16构建亲缘进化关系树。921份标本共分离出82株CVA16,分离率为8.90%,其中从重症病例分离出3株CVA16,从死亡病例中分离出1株CVA16。50株内蒙古CVA16代表株在核苷酸水平上与1998年以来中国大陆CVA16分离株的同源性都较高,尤其与2009年北京株和2010年河南株的同源性最高,分别为96.18%～98.88%和94.94%～98.76%;但与2007年内蒙古流行株存在一定的差异,同源性仅为91.68%～96.52%;亲缘进化关系树显示,所有内蒙古CVA16株都属于B1基因型的两大进化分支B1a和B1b,并处于不同的簇中,它们之间的核苷酸和氨基酸同源性分别为89.99%～100%和98.31%～100%,表现为CVA16分离株属于多个病毒传播链。2010年从内蒙古自治区不同临床症状手足口病病例分离的CVA16流行株属于B1基因型的两大进化分支B1a和B1b,两个进化分支的CVA16在内蒙古自治区共同进化和流行。

2013年内蒙古自治区健康人群麻疹抗体水平调查分析

目的了解内蒙古自治区健康人群麻疹抗体水平,及时发现高危人群,为制定消除麻疹防控措施提供依据。方法按照全国麻疹监测方案健康人群免疫水平监测的要求,按健康人群分为8个年龄组,每组随机抽取不少于30人,应用酶联免疫吸附试验测定人体麻疹Ig G抗体。结果采集血清标本751份,麻疹Ig G抗体阳性数699份,阳性率、保护率均为93.08%。不同地区、不同年龄组人群阳性率、抗体浓度差异均有统计学意义。结论不同地区人群麻疹免疫水平不同,应根据该地区实际情况采取相应的措施,提高基础免疫的质量,加强补充免疫,提高人群抗体水平。

2010年内蒙古自治区手足口病病原谱及人肠道病毒71型分子特征研究

研究2010年中国内蒙古自治区引起手足口病(Hand foot and mouth disease,HFMD)的病原谱及人肠道病毒71型(Human enterovirus,HEV71)的分子特征。采集内蒙古自治区12个盟市门诊就诊的HFMD患者粪便和咽拭子标本共921份,进行病毒分离,然后利用三通道实时荧光定量PCR法[同时检测HEV71,柯萨奇病毒A16型(CVA16)和人肠道病毒(HEV)]对阳性分离物进行鉴定,对鉴定为其它HEV的阳性分离物进行VP4和VP1编码区扩增及核苷酸序列测定和分析。921份标本共分离出153株病毒,阳性率为16.61%,其中61株为HEV71,占39.87%,82株为CVA16,占53.59%,7株为其它HEV(分别为6株CVB4和1株Ⅱ型脊髓灰质炎疫苗病毒株),占6.53%,3株为腺病毒。重症病例中分离到9株病毒,其中6株为HEV71,3株为CVA16。选取从临床诊断分别为普通型病例、重型病例的HFMD患者临床标本中分离到的32株HEV71代表株进行VP1编码区基因扩增及核苷酸序列测定和分析,与HEV71其它各基因型和基因亚型的代表株构建亲缘性进化树。32株内蒙古HEV71代表株与1998年以来中国大陆HEV71分离株的VP1区核苷酸和氨基酸水平上的同源性都较高,尤其与2008年的北京代表株同源性最高,与C4基因亚型代表株聚为一支,属于C4基因亚型C4a进化分支,但它们之间的核苷酸和氨基酸的同源性略有差异,分别为96.4%～100%和98.14%～100%,与2007年的内蒙古代表株存在一定的差异,核苷酸同源性为96.95%～97.87%。亲缘进化关系树显示,这些HEV71处于不同的簇中,属于多个病毒传播链。2010年内蒙古HFMD的病原谱以CVA16和HEV71为主,重症病例中以HEV71居多。内蒙古流行的HEV71属于C4基因亚型C4a进化分支,并且存在多个传播链,与2008年北京代表株亲缘关系比2007年内蒙古代表株亲缘关系近,说明内蒙古流行的HEV71不是独立进化的,而是与中国流行的HEV71在共同进化。

手足口病重症病例分析：基于全国手足口病监测试点数据

目的 了解手足口病重症病例的患病情况、病原构成以及危险因素。方法 对2015年11月1日至2016年11月30日全国手足口病监测试点网络直报系统报告的1 489例手足口病重症及死亡病例进行研究，对基本信息、就诊及治疗情况、临床严重程度及病原构成进行描述性分析并通过多项logistic逐步回归分析重症病例治疗结果的危险因素。结果 1 489例重症病例中有7例死亡病例。960例（72.9%）年龄〈3岁，937例（62.9%）为男性，病例大部分居住于农村（63.9%）。494例（33.2%）患者首次就诊时选择村级和乡镇级机构。重症病例的发病-就诊、发病-诊断为手足口病和发病-重症诊断的时间间隔分别为0（0～1） d、1（0～2） d和2（1～4） d。并发症有无菌性脑膜炎（51.9%，773例）、非脑干脑炎（25.3%，377例）、脑干脑炎（17.5%，260例）、脑脊髓炎（0.4%，6例）、急性弛缓性麻痹（0.1%，1例）、肺水肿/肺出血（0.3%，4例）和心肺功能衰竭（4.6%，68例）。1 217例纳入病原分析的重症及死亡病例的病原构成依次为肠道病毒（EV）71（52.8%，642例）、其他肠道病毒（21.5%，261例）、柯萨奇病毒（Cox） A16（3.0%，36例）、EV71和Cox A16合并感染（0.1%，1例）。并发症（Z=3.15，P=0.002）和发病-重症诊断的时间（Z=3.95，P〈0.001）为治疗结果的危险因素。结论 手足口病重症病例以农村男童为主，并发症以无菌性脑膜炎、非脑干脑炎和脑干脑炎为主。EV71是重症及死亡病例的重要病原构成。确诊的及时性以及并发症类型对于治疗结果具有重要影响。

内蒙古2005～2014年流行性腮腺炎流行病学特征分析

目的分析内蒙古流行性腮腺炎（流腮）的流行病学特征,为进一步防控爆发疫情提供依据。方法采用描述流行病学方法对流腮流行特征变化进行分析。结果 2005~2014年共报告流腮病例42 770例,年发病率在7.75/10万~44.12/10万之间,共报告爆发疫情42起,均发生在学校,经检测分析是由F基因型腮腺炎病毒引起。每年4~7月份和11~翌年1月为发病高峰。以5~14岁人群发病率最高,0~9岁儿童中发病高峰的年龄出现前移。学生占71.09%,托幼儿童占13.89%,散居儿童占7.45%。结论内蒙古流腮发病和流行以儿童特别是中小学生为主,应加强学校疫情监测,开展入学儿童的查漏补种或推广2剂次含腮腺炎成分疫苗的接种。

一起由星状病毒1型引起的新生儿腹泻暴发的病原确证

目的对一起新生儿急性胃肠炎暴发事件进行病原确证。方法2008年12月至2009年2月，内蒙古自治区某妇幼医院新生儿室发生腹泻流行，高峰期采集38例患儿的45份粪标本，ELISA法检测轮状病毒、腺病毒和星状病毒病原，RT-PCR法检测星状病毒核酸，其中13份星状病毒核酸阳性标本进行测序分析和进化树分析，4份星状病毒及病毒核酸均阳性的标本进行免疫电子显微镜观察。结果45份粪标本中，轮状病毒、腺病毒病原检测均阴性。30份标本ELISA检测星状病毒病原阳性，阳性率为66．7％；31份标本星状病毒核酸阳性，阳性率为68．9％。采用星状病毒分型引物进行分型，均为星状病毒1型。选择13株与GenBank中星状病毒1型参考株进行比较，其核苷酸序列同源性为90．9％～96．3％。13株星状病毒1型株彼此间核苷酸序列同源性为94．7％～100．0％。随机选择的4份阳性标本，免疫电子显微镜下2份有大量星状病毒颗粒。结论此起新生儿腹泻暴发由星状病毒1型引起。

中国2011～2012年麻疹野病毒血溶素基因特征分析

目的分析中国2011～2012年麻疹野病毒株代表株血溶素（Fusion，F）基因的分子特征。方法从2011～2012年各省（自治区、直辖市）送检的麻疹野病毒中，选取7株代表株，使用逆转录-聚合酶链反应扩增病毒的F基因全长，并进行核苷酸序列测定，同时与我国的疫苗株进行核苷酸、氨基酸同源性分析及序列比对。结果我国2011-2012年7株麻疹野病毒代表株中，核苷酸同源性为97．9％～99．9％，氨基酸同源性为98．7％～100．0％；与中国疫苗株（Shanghai191和Changchun47）相比，核苷酸同源性为95．0％～95．6％，氨基酸同源性为96．3％～97．2％。F基因的三个糖基化位点（第32、64、70位氨基酸），对病毒融合功能具有重要作用的第112位精氨酸（Arg）、第195位亮氨酸（Leu）未发生改变。但与疫苗株相比，有17个氨基酸位点发生较大改变。结论我国2011～2012年流行的麻疹野病毒F基因无明显变异，F基因上已知的重要功能位点保守。推测近年来中国流行的麻疹野病毒F蛋白结构和功能未发生明显改变，抗原性稳定。然而鉴于F蛋白是麻疹病毒的重要功能蛋白，对F蛋白的变异规律进行常规监测，对于了解麻疹病毒的变异规律和评价疫苗的保护效率具有重要意义。

呼和浩特市地区奶牛狂犬病和犬狂犬病的诊断及病毒N基因的遗传演化分析

研究采用组织病理学、直接免疫荧光、狂犬病病毒N基因扩增、测序和序列比对方法对内蒙古自治区呼和浩特市地区1例奶牛和1例犬狂犬病病例进行了诊断和病毒N基因遗传演化分析。研究结果表明证病性的内格里小体在奶牛和犬的中枢神经系统的神经细胞浆内均可观察到,奶牛脑组织内可见典型的非化脓性脑炎病理变化。经狂犬病直接免疫荧光法鉴定,2例脑组织均为狂犬病病毒阳性。经同源性和遗传进化分析,2株病毒N基因核苷酸序列具有较高的序列同源性（99%）,并位于同一个的遗传进化群。2株病毒的N基因与河北和北京分离株具有最高的亲缘关系,同源率在99.3%-99.6%,说明这2株病毒的N基因与河北、北京等毒株起源于共同的祖先。

内蒙古自治区首次分离鉴定出流行性腮腺炎病毒的报告

目的了解内蒙古自治区腮腺炎病毒基因特征,填补内蒙古自治区腮腺炎病原学监测工作空白。方法采集内蒙古通辽市一起腮腺炎暴发疫情中部分病例的咽拭子标本,进行腮腺炎病毒分离和病毒基因型别鉴定。结果 1份咽拭子标本腮腺炎病毒分离阳性,经序列分析病毒分离株鉴定为F基因型腮腺炎病毒。结论该次内蒙古自治区腮腺炎暴发疫情流行是由F基因型腮腺炎病毒引起的。目前,内蒙古自治区流行腮腺炎病毒为F基因型腮腺炎病毒。

2013年内蒙古自治区健康人群风疹抗体水平调查

目的了解内蒙古自治区健康人群风疹抗体水平,掌握易感人群的分布特点,为制定预防控制措施提供科学依据。方法将健康人群分为8个年龄组,每组随机抽取不少于30人,应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测风疹IgG抗体。结果采集血清标本754人份,风疹抗体IgG阳性536人份,阳性率71.09%。赤峰市松山区的抗体阳性率和平均抗体浓度（GMC）均最高,分别为80%和28.66 m U/ml;锡林郭勒盟西乌珠穆沁旗为最低,分别为63.16%和17.89 m U/ml。≥20岁组人群抗体阳性率和GMC最高,分别为93.26%和48.16 m U/ml;5～7岁组最低,分别为56.52%和12.78 m U/ml。结论内蒙古自治区不同地区人群风疹免疫水平不同,GMC较低,尤其应加强〈1岁和5～7岁组人群的免疫接种。