黑曲霉F0215中β-半乳糖苷酶系的生化特征

通过分子克隆与遗传重组技术克隆及表达黑曲霉F0215来源的全部β-半乳糖苷酶,构建了重组菌GS115(p PIC-bgl A)、GS115(p PIC-bgl B)、GS115(pPIC-bglC)和GS115(pPIC-bglE);通过摇瓶发酵和甲醇诱导培养,制备相应的重组β-半乳糖苷酶BglA、BglB、BglC和BglE。重组酶BglA、BglB、BglC和BglE的最适作用温度分别是60,50,60,50℃;最适反应pH分别为4.0,4.5,3.5,4.5;Mg^(2+)、Ca^(2+)、Na^+和Mn^(2+)对上述酶的活性均有促进作用,Cu^(2+)、Fe^(2+)、Ni^(2+)、Zn^2、Li^+和EDTA对上述酶的活性均有抑制作用;以ONPG为底物,采用双倒数作图法测得BglA、BglB、BglC和BglE的Km分别是0.43,0.22,0.37 mmol/L和0.46 mmol/L;BglA、BglB、BglC和BglE对乳糖具有单一的特异性,包含水解与转苷两种基本活性;黑曲霉β-半乳糖苷酶的分子结构呈现典型的真菌β-半乳糖苷酶结构特征。在参照基因组中预示存在的β-半乳糖苷酶BglD,在所试黑曲霉菌种中不存在。