基于UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS、网络药理学和实验验证探讨裸花紫珠抗H1N1活性成分及其作用机制

本实验首先对裸花紫珠的提取物进行萃取,得到不同的萃取部位,然后对各部位进行抗甲型流感病毒H1N1型(H1N1)活性筛选,确定裸花紫珠乙酸乙酯萃取部位(EACN)具有较好的体外抗H1N1的活性。采用超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱联用(UPLC-Q-Exactive-Orbitrap-MS)技术对EACN进行定性分析。基于定性分析的结果,进一步使用数据挖掘和网络药理学,评估药物的活性成分、关键靶点和关键通路,最后使用H1N1感染BALB/c小鼠模型对预测结果进行验证。结果显示,在各个萃取部位中,乙酸乙酯部位体外抗H1N1效果最佳,半数抑制浓度(IC_(50))为51μg/mL,半数细胞毒浓度(CC_(50))为859.4μg/mL,选择指数(SI,CC_(50)/IC_(50))为16.85。从EACN中鉴定出34种化合物,在此基础上,利用网络药理学,筛选出和EACN抗H1N1相关的药物靶点67个,靶点共涉及生物过程491个,与抗H1N1相关的通路147个。H1N1感染BALB/c小鼠实验结果发现,EACN能改善H1N1感染引起的体重降低和肺指数的增加,降低小鼠肺组织的病毒载量,减轻小鼠肺组织的病理损伤,降低外周血血清中TNF-α、IFN-γ、IL-1β水平。实验结果提示EACN可能从直接抑制病毒、抗炎作用和免疫调节作用等多个途径发挥抗H1N1的作用。

基于指纹图谱与化学计量学的桑叶蜜炙前后差异性标志物研究

目的比较桑叶蜜炙前后化学成分的变化,筛选差异性标志物并进行含量测定,为蜜炙桑叶的质量控制提供参考。方法采用高效液相色谱(HPLC)法建立桑叶蜜炙前后指纹图谱,标定共有峰并进行相似度评价;以生桑叶、蜜炙桑叶共有峰峰面积为指标,运用主成分分析和正交偏最小二乘-判别分析筛选桑叶蜜炙前后差异性标志物,并进行定量分析。结果从10批生桑叶、10批蜜炙桑叶HPLC指纹图谱中分别标定出23、24个共有峰,2类样品图谱的相似度均大于0.97;主成分分析结果显示,生桑叶和蜜炙桑叶分为2类,正交偏最小二乘-判别分析结果显示,峰2、峰H(5-羟甲基糠醛)、峰1、峰17(异绿原酸C)、峰16的变量重要性投影值均大于1;生桑叶、蜜炙桑叶中差异性标志物异绿原酸C的平均含量分别为0.0936、0.1278 mg/g,差异有统计学意义(P<0.05)。结论筛选得到异绿原酸C等5种差异性标志物;桑叶蜜炙后异绿原酸C含量显著升高。

金贝口服液抗SARS-CoV-2的作用机制研究

目的探讨金贝口服液(黄芪、党参、北沙参等组成)抗新型冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)的作用机制。方法通过细胞病变效应和蚀斑实验证明金贝口服液对SARS-CoV-2的抑制作用;利用前期建立的基于3C样蛋白酶(3-chymotrypsin-like protease,3CLpro)和木瓜样蛋白酶(papain-like protease,PLP)活性的药物筛选体系,测定金贝口服液对3CLpro和PLP活性的抑制效果;利用超高效液相色谱测定金贝口服液中的主要成分,并将鉴定出的成分与3CLpro和PLP进行分子对接,推测金贝口服液中可能抑制SARS-CoV-2的物质基础。结果金贝口服液在体外具有抑制SARS-CoV-2作用,对3CLpro和PLP的IC50分别为(2.757±0.082)μL·mL^(-1)和(3.527±0.188)μL·mL^(-1)。分子对接结果显示,超高效液相色谱鉴定出的金贝口服液中12个主要成分中的连翘酯苷A、黄芩苷、丹酚酸B、汉黄芩苷、汉黄芩素、新绿原酸、隐绿原酸、异绿原酸B与3CLpro和PLP均有较好的结合能力,可能是金贝口服液中抑制SARS-CoV-2的物质基础。结论金贝口服液可能通过抑制3CLpro和PLP活性发挥抗SARS-CoV-2的作用,为其在新型冠状病毒感染治疗中的合理应用提供了依据和参考。

一测多评法测定无花果叶中4种成分的含量

目的:建立无花果叶中绿原酸、芦丁、补骨脂素和佛手柑内酯4种成分含量测定的一测多评方法,并验证此方法的可行性与准确度。方法:采用高效液相色谱法,以芦丁为内参物,建立绿原酸、补骨脂素和佛手柑内酯的相对校正因子(f_(s/i)),并利用f_(s/i)计算无花果叶样品中各成分的含量,同时用外标法测定不同产地无花果叶中各成分的含量,比较一测多评法和外标法所得结果的差异。结果:一测多评法得到的绿原酸、补骨脂素和佛手柑内酯f_(s/i)重现性较好,且通过一测多评法测得的不同产地的无花果叶各成分含量与外标法测得的结果无显著差异。结论:本研究建立的一测多评法准确可行,可用于无花果叶的定量分析和质量评价。

氟尿嘧啶聚乳酸微球在PVR家兔体内的研究

考察了在增生性玻璃体视网膜病变(PVR)家兔玻璃体中植入氟尿嘧啶聚乳酸微球后的体内药物动力学和药效学。采用HPLC法测定房水中药物浓度。结果表明,制品的体内消除半衰期从0.6h延长至379h。体外累积释放率与体内相应时间的吸收分数呈明显的正相关。药效学结果根据Ryan分级法进行评价,t检验结果表明微球组与生理盐水对照组、注射液组视网膜脱离发生率有显著性差异(P<0.01),后两组间无显著性差异(P>0.05)。

葛根黄酮缓释胶囊家兔体内药代动力学研究

目的 :测定两种自制葛根黄酮缓释胶囊中主要有效成分葛根素在兔体内的药 时曲线 ,测算其体内代谢动力学参数 ,检测其缓释效果。方法 :采用高效毛细管电泳色谱法 ,以愈风宁心片作参比制剂 ,测定不同时间点兔血浆葛根素的量 ,用 3P87程序计算药动学参数。结果 :愈风宁心片及样品制剂在兔体内过程均符合二室开放模型。主要动力学参数参比制剂与样品制剂分别是t1/2 =75 .5 1min ,t11/ 2 =5 0 3.84min ,t2 1/ 2 =4 99.4 8min ,AUC =93.2 7μg/min·ml-1,AUC1=312 .4 0 μg/min·ml-1,AUC2 =318.6 6 μg/min·ml-1,Tp =2 7.6 8min ,T1p =4 8.2 8min ,T2 p =5 5 .90min。结论 :葛根黄酮缓释胶囊呈现一定的缓释效果。

淫羊藿苷的分离纯化工艺研究

目的 :研究大孔吸附树脂分离纯化淫羊藿苷的工艺条件、树脂前处理的方法。方法 :用HPLC法测定淫羊藿苷含量 ,以淫羊藿苷洗脱率和纯度为考察指标 ,确定DM 130型大孔吸附树脂分离纯化淫羊藿苷的吸附性能和洗脱参数。结果 :DM130型大孔吸附树脂吸附容量以干树脂计为 5 .0 3mg·g-1,用纯化水和不同体积分数的乙醇依次洗脱 ,以 6 0 %乙醇洗脱效果最佳 ,洗脱率达 90 .0 3% ,总干燥物中淫羊藿苷含量达 6 0 .30 %。结论 :大孔吸附树脂对淫羊藿苷有较好的分离纯化作用 ,且工艺简单 ,成本低 ,适宜于工业化生产。

基于中药方剂的中药多维组合药物研究模式探讨

组合药物具有多成分、多靶点、抗耐药性和不良反应低以及较小剂量等特点,对治疗多基因调控的复杂疾病和需要长期用药的慢性疾病有着独到的优势,是新药研发的重要领域;中药方剂是发现新组合药物的优良资源,多维组合是基于中药方剂的组合药物研发的可行途径。具体的研究路线是:以药效为导向,通过零水平的实验设计,筛选出对药效有贡献的可分离的最小药效物质单元,在部位、组分、成分三个层面上优选药效物质的最佳配伍和最佳配伍比例,以发现中药多维组合药物。

中医药抗病毒研究思路、理论创新与基本路径

在分析中医药抗病毒研究现状及存在的主要问题的基础上,提出了中医药抗病毒研究“三个必须”的基本取向和总体思路：中医药抗病毒实践必须坚持中医药理论统领,全面保持中医药的科学内核;中医药抗病毒临床必须建立“证病结合”诊疗体系,发挥中医药的优势特色;中医药抗病毒研究必须合理引入现代生物科学,促进中医药的现代化。在长期开展中医药抗病毒研究的过程中,探索出了以“证毒协辨,证病双应,药药协同,复方创新”为核心的“证毒协辨”理论。该创新理论既以中医辨证为主,坚持中医的主体地位,又注重将现代医学的辨病毒结合进来,辨证与辨病相互协同,互为补充,取长补短。在详细论述创新理论内涵的同时,阐明了该理论的应用路径、现实意义和应用前景。

脂质体的研究进展

本文主要介绍了脂质体作为药物靶向制剂载体的研究发展。分析了近年来脂质体在各类药物中的应用及其优点 。

至宝补肾胶囊质量标准的研究

目的 :为至宝补肾胶囊提供质量控制的方法。方法 :采用TLC法对肉桂、人参分别进行了色谱鉴别 ;采用HPLC测定了胶囊中淫羊藿苷的含量。结果 :TLC鉴别方法专属性强 ,含量测定淫羊藿苷在 3.16～ 31.6mg之间有良好线性关系 ,平均回收率为 97.8% ,RSD为 1.33%。结论 :本质量标准可有效地控制至宝补肾胶囊的质量。

环棱褐孔菌提取工艺研究

目的 :筛选环棱褐孔菌中棕榈酸的提取工艺。方法 :采用正交实验设计 ,系统考察萃取压力、萃取温度、萃取时间及CO2 流量 4个因素对棕榈酸含量的影响。结果 :最佳的提取工艺为萃取压力 2 0MPa ,萃取温度 6 0℃ ,CO2 流量 35kg/h ,提取时间 2 .5h。

金樱子多糖的提取优化及其体外抗病毒活性研究

目的:优化金樱子多糖提取工艺,研究金樱子多糖的体外抗病毒活性。方法:采用Design Expert数据处理软件进行响应面实验设计,确定金樱子多糖最佳超声提取工艺,醇沉法和Sevage-酶法纯化多糖;采用细胞体外抗病毒实验法,结合CPE法及CCK-8试剂盒,研究金樱子多糖对呼吸道合胞病毒(RSV)、柯萨奇病毒(COX-B5)、手足口病病毒(EV71)的抑制作用。结果:金樱子多糖超声提取的最佳工艺条件为:提取温度74℃,超声时间49 min,液料比25 m L/g,测得多糖提取率15.084%;多糖纯化后含量为84.58%,且抗RSV和COX-B5的效果优于阳性对照药利巴韦林,其TI值分别为80.895、41.541。结论:在使用响应面软件的优化下,金樱子多糖的提取率可以达到最高,且金樱子多糖具有体外抗RSV、EV71、COX-B5的活性。

黄芩提取物体外抗病毒药效学研究

目的研究黄芩提取物对肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒B5(COXB5)、呼吸道合胞病毒(RSV)、柯萨奇病毒B3(COXB3)、单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)的体外抑制作用。方法采用细胞体外抗病毒实验,通过CPE法结合MTT法得出半数中毒浓度(TC50)、半数有效浓度(EC50),并且以治疗指数(TI)作为评价指标,以利巴韦林和阿昔洛韦为阳性药,观察黄芩提取物对几种常见病毒的抑制作用。结果黄芩提取物对COXB5、EV71、COXB3、HSV-1、RSV的治疗指数分别为5.46、22.16、4.32、6.10、5.94。结论黄芩提取物对COXB5、EV71、COXB3、HSV-1、RSV都有抗病毒活性,为临床应用提供理论依据。

改良甜菊苷不良味质生物酶的固定化研究

目的优选环糊精葡糖基转移酶的最佳固定化工艺,并对固定化酶的性质进行考察。方法以生物酶活力为指标,对影响生物酶活性的海藻酸钠、明胶、固定化酶液量、固定化时间、氯化钙及戊二醛进行了考查,并对固定化前后酶液的性质进行了比较。结果海藻酸钠浓度5%,明胶浓度4%,固定化酶液量占海藻酸钠、明胶总量的1%,固定化时间1h,氯化钙浓度5%,戊二醛浓度0.5%时固定化酶活力最强,固定化酶的适宜作用温度范围、pH值范围均比游离酶宽,固定化酶的热稳定性高于游离酶,重复使用时批次操作也显示出较好的稳定性。结论该方法简单、准确、可行,具有实用价值。

红景天甲醇冷浸提取物的体外抗病毒谱及抗病毒机制的研究

目的:为建立红景天抗病毒谱-效相关评价系统,对红景天抗病毒机制进行初步探究,通过对红景天甲醇冷浸提取物体外抗病毒活性进行筛选,最后选择红景天甲醇冷浸提取物抗柯萨奇病毒B型(COX-B5)活性进行研究病毒机制的初步研究。方法:采用体外抗病毒实验CPE法结合MTT染色法,以半数治疗浓度(EC50)和半数细胞毒性浓度(TC50)并以治疗指数TI值作为评价指标,观察红景天甲醇冷浸提取物对手足口病病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒B型(COX-B5)、单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)和呼吸道合胞病毒(RSV)的抑制作用。结果:中药材红景天对于四种病毒感染都有一定程度的抑制效果,其中以肠道病毒的抑制效果最好,红景天甲醇提取物对呼吸道合胞病毒(RSV)的治疗指数为26.35,对单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)的治疗指数为14.03,对柯萨奇病毒B型(COX-B5)的治疗指数为33.82,对手足口病病毒71型(EV71)的治疗指数为27.28。在此基础上,选取红景天甲醇冷浸提取物抗柯萨奇病毒B型(COX-B5)活性做进一步的抗病毒机制研究,结果发现,红景天甲醇冷浸提取物在预防性治疗中,其治疗指数TI值为11.31,在抑制病毒穿入感染中,其治疗指数为19.29,在药物病毒直接作用的灭杀组中,药物的治疗指数为35.26。结论:中药材红景天对于肠道病毒的抑制有明显的效果,但其作用机制较复杂,并非针对病毒吸附感染复制的某一单一环节,作用机制有待进一步研究,红景天作为低毒高效的传统中药材,在抗病毒领域有很大潜力,有待进一步研究开发。

桑白皮提取物桦木酸对TGF-β1诱导的人肺泡上皮细胞HPAEpiC上皮间质转化的抑制作用

目的探讨桑白皮提取物桦木酸对生长转化因子(TGF-β1)诱导的人肺泡上皮细胞HPAEpiC上皮间质转化的抑制作用及其可能机制。方法以HPAEpiC细胞为研究对象,采用0.5 ng·mL^-1 TGF-β1诱导的上皮间质转化模型进行实验。设置空白对照组、模型组、桦木酸给药组。MTT法检测桦木酸对HPAEpiC细胞存活率的影响;Real-time PCR分析桦木酸对诱导后的HPAEpiC细胞内miR-200b-5p、miR-200c-5p表达水平及上皮间质转化标志物(Coll、E-cad、α-SMA mRNA)表达水平的影响。酶联免疫吸附法(ELISA)检测桦木酸对诱导后HPAEpiC细胞内羟脯氨酸(HYP)分泌水平的影响。结果桦木酸对HPAEpiC细胞增殖活性呈单向抑制趋势,且增殖抑制率与药物浓度呈依赖关系。与模型组比较,桦木酸可有效抑制诱导后细胞内miR-200b-5p(P<0.05)、miR-200c-5p(P<0.01,P<0.05)表达,同时降低细胞内ColⅠ(P<0.01)、α-SMA mRNA(P<0.05)表达,促进E-cadherin mRNA表达(P<0.01,P<0.05),降低细胞内HYP含量(P<0.01,P<0.05)。结论桑白皮提取物桦木酸对TGF-β1诱导的人肺泡上皮细胞HPAEpiC上皮间质转化有一定的抑制作用,为特发性肺纤维化潜在的治疗药物,其可能的作用机制为抑制miR-200b-5p、miR-200c-5p表达;下调ColⅠ和α-SMA mRNA,上调E-cad mRNA。

直肠给药系统的研究进展

直肠给药可减少肝首过效应,避免胃肠道反应,具有起效快、安全性高等优势,逐渐受到重视,特别是对成分复杂而味道苦涩的中药、易被酶解的蛋白质类药物、不适合口服给药的群体、直肠疾病等情况,该方式具有重要意义。本文综述了目前直肠给药特点、适用范围、常用剂型,并分析了其研究方向和发展前景,以期为相关探索和应用提供参考。

葛根黄酮缓释胶囊的配方筛选与制备

目的:制备葛根黄酮缓释胶囊,并筛选最佳配方.方法:以乙基纤维素(EC)、羟丙甲基纤维素(HPMC)为缓释辅料,均匀设计法优化处方,固体分散技术制备葛根黄酮缓释胶囊.结果:优化处方胶囊体外释药Q0.5h＝50%～53%,12 h近100%,释药曲线符合Higuchi动力学模型,释药方程:Q＝17.19t1/2+38.75,r＝0.9959.结论:葛根黄酮缓释胶囊基本达到理想的缓释效果.

肉桂多糖对四氧嘧啶致实验性糖尿病小鼠降糖作用的研究

目的探讨肉桂多糖对四氧嘧啶致实验性糖尿病小鼠的降糖作用。方法建立四氧嘧啶诱导的昆明种小鼠糖尿病模型。肉桂多糖(600mg/kg)连续灌胃给药7d,测定给药前后小鼠空腹血糖值、体重及脏器系数。结果肉桂多糖实验剂量能明显降低模型小鼠的血糖值。结论肉桂多糖对四氧嘧啶诱发的实验性糖尿病小鼠有显著的降糖效果。