不同施肥水平对冬闲田牧草产量的影响

在贵州大学实验基地,利用冬闲田研究了不同施肥水平对科牧70、光叶紫花苕、一年生黑麦草、燕麦草的鲜草产量、干物质以及干物质中的营养成分影响。结果表明:随着施肥量的增加,牧草鲜草产量和干物质明显增加;总干物质中营养成分从高到低依次是一年生黑麦草、光叶紫花苕、燕麦、冬牧70。综合各处理结果,在四种牧草中,最适宜贵州冬闲田种植的是一年生黑麦草。

信息技术在养猪生产中的应用

随着计算机多媒体技术、光纤和卫星通信技术的迅猛发展，当代世界经济正在由工业化时期进入信息化时代，现代信息技术也正在向各个领域渗透。尤其在畜牧业中，信息技术将上升到重要的地位。现将信息技术在养猪中的应用介绍如下。

黑色素皮质激素受体1基因248位点多态性与中国马品种毛色的相关性分析

在欧洲马品种中,黑色素皮质激素受体1(melanocortin receptor 1,MC1R)基因第248位碱基有C/T多态性,纯合的T248位点决定欧洲马的栗毛色。针对MC1R基因的248位点设计了2对特异性引物,采用等位基因特异性PCR技术,研究3个中国马品种MC1R基因型与栗色毛之间的关系。经扩增获得两种DNA片段,克隆测序后证明,扩增片段确为MC1R基因,两种DNA片段序列在基因的248位点的确呈现C/T多态性,但检测126份贵州矮马、西南马和新疆伊犁马血液样本,全部为杂合基因型(Ee),其中包括栗毛、黑毛、骝毛3种单毛色及3种复毛色。这些研究结果提示,MC1R基因中248位点的多态性与国内3个马品种的栗色毛之间没有直接的相关性。

紫云县贵州矮马资源评价

对贵州省紫云县境内现存的贵州矮马数量及分布进行了调查。全县12个乡镇中,贵州矮马存栏1 421匹,其中公马611匹,母马810匹;其毛色以骝毛和栗毛为主。雌雄矮马的体高、体长、胸围、头长和颈长没有明显差异,但雄性个体的管围明显较粗。雄性矮马的红细胞数量较多但体积较小,血小板和中间细胞数量较高,血清总胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇水平较雌性的低;雌性矮马妊娠时血小板数量和低密度脂蛋白水平代偿性下降,但中性粒细胞数量和CO2结合能力升高。雄性矮马与雌性矮马的使役能力没有明显差别。目前贵州矮马混养、无序买卖及疾病预防不足是其死亡率高、体高上升的重要原因。

苦荞麦不同部位化学成分的测定

试验旨在研究苦荞麦不同部位化学成分。试验采用液相色谱仪检测苦荞麦植株不同部位化学成分,并对检测结果进行定性和定量分析。结果显示,从苦荞麦叶、茎、根3个部位中共检测出30种活性物质和19种微量元素。研究表明,苦荞麦植株含有宝贵的中药成分及较丰富的微量元素,可作为保健饲料添加剂开发,减少饲料中抗生素的使用。

芭蕉芋根部营养物质及化学成分的研究

试验旨在提高芭蕉芋在动物生产实践中的经济价值。按照国家标准测定芭蕉芋根营养物质、微量元素和氨基酸含量,使用液相色谱串联高分辨质谱仪定性和定量检测芭蕉芋根的活性物质。结果显示,芭蕉芋根中检测出营养物质有8种、微量元素7种、氨基酸15种及活性物质37种。芭蕉芋根营养物质中淀粉含量最高,达到44.90%,微量元素、氨基酸及活性物质含量较丰富。研究表明,芭蕉芋根是较好的饲料资源,其根部活性物质在动物生产中具有重要作用。

贵州宗地花猪保种区的疾病调查及防治策略

为了更好地促进贵州宗地花猪的保种及保种区猪的疾病防控工作,笔者采用逐户走访的方式对保种区猪的疾病和养殖环境进行实地调查,同时对病猪采用不同的抗生素药物进行治疗,并结合当地实际情况,提出了相应的疾病防治策略和净化养殖环境的方法。

3个马群感染马泰勒虫的分子病原学调查

试验采用显微镜观察、PCR和竞争性酶联免疫吸附试验（competitive enzyme-linked immunosorbentassay,cELISA）等方法对贵州矮马、西南马和伊犁马的马泰勒虫病的感染状况进行研究。结果显示,从32份新鲜的血液涂片中,观察到形态完整的马泰勒虫（Theileria equi）虫体,检出率12.5%。从贵州矮马、西南马及伊犁马3个马群血液总DNA中都检测到马泰勒虫的18SrRNA基因片段,与已知序列的同源性为97%～100%;相比之下,贵州矮马与伊犁马的阳性率相近,分别为76.62%和73.81%,西南马较低,仅为33.33%。另外,经cELISA检测,与伊犁马（31.71%）相比,贵州矮马和西南马血液中抗马泰勒虫抗体的阳性率较低,分别为24.68%和12.12%,并与两个马群的血液理化指标存在一定的联系：与中性细胞数量、γ-谷氨酰转移酶和肌酸激酶的含量呈弱正相关;与红细胞、白细胞、血小板、淋巴细胞数量及血红蛋白含量呈弱负相关。这些研究结果提示3个马群中均存在较高比例的马泰勒虫感染。

宗地花猪1世代的生长发育研究

[目的]研究宗地花猪1世代在初配前不同性别生长发育的规律性以及性成熟对宗地花猪生长发育的影响。[方法]选择宗地花猪公猪9头、母猪10头,在原生态的饲养条件下进行饲养。从双月开始,以月为阶段,对宗地花猪不同性别的生长发育进行测定,并观察、记录公、母猪性行为的外部表现。[结果]公猪初情期为(94.5±5.2)d,母猪初情为(104.0±4.8)d;在3月龄以前公猪和母猪的累积生长、绝对生长及体尺指标差异较小,3月以后上述指标母猪高于公猪,到6月龄母猪显著高于公猪(P<0.05)。[结论]宗地花猪1世代属性早熟地方品猪;6月龄母猪的生长发育比公猪强烈,物质积累旺盛,体格较大;性成熟对公猪体重的影响明显高于母猪。

贵州矮马(Equus caballus)生长激素受体基因5个单核苷酸位点的多态性研究

旨在探究贵州矮马生长慢的根本原因,本研究采用PCR和基因克隆技术测定贵州矮马生长激素受体基因(GHR)外显子10的核苷酸序列;以伊犁马为对照,通过AS-PCR和SSCP方法研究贵州矮马群体中SNP位点的分布频率,应用群体遗传学和生物信息学方法分析基因型与体尺指标间的相关性。结果,从贵州矮马GHR外显子10中得到10个单倍型,包括10个SNPs位点,其中的5个引起氨基酸改变。与伊犁马相比,贵州矮马GHR基因1028位点的A等位基因占优势,对应较低的尻高和较粗的管围;1471位点的E等位基因在贵州矮马群体中分布较多,与胸围率较高相关;1697和1732两个位点的杂合型存在于最矮的雄性矮马(6岁)GHR基因中。1028位点引起的V343A位于UbE结构域中,1471、1697和1732位点引起的S491G、Y566C和R578G改变与GHR蛋白的磷酸化有关。这4个位点可能影响GHR的内化作用或通过磷酸化途径影响细胞内的信号传导效率。研究结果提示,贵州矮马GHR基因外显子10中的多态性变化可能影响贵州矮马的生长发育。

贵州矮马血清蛋白的多态性研究

以西南马为对照,采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对31匹贵州矮马的转铁蛋白(TF)、白蛋白(Alb)、α1-B糖蛋白(AlB)3种血清蛋白进行了多态性研究。结果表明,AlB位点呈现单态,TF、Alb蛋白位点均表现出不同程度的多态性。Alb位点共发现6种蛋白型,对应3个等位基因,贵州矮马Alb位点的基因频率分别为A(0.2097)、B(0.5645)、C(0.2258);TF位点共发现8种蛋白型对应5个等位基因,贵州矮马TF位点的基因频率分别为A(0.0484)、B(0.5806)、C(0.1129)、D(0.1452)、E(0.1129)。Alb、TF位点的多态信息含量(PIC)和遗传杂合度均较大,说明贵州矮马的遗传多样性较高,具有较大的选育空间。但是贵州矮马在白蛋白及转铁蛋白位点的杂合度均低于西南马,说明在相对闭锁的环境中生存的贵州矮马,保持了较为纯净的原始基因库。贵州矮马的Alb和TF的个体识别率及累积非父排除率均较高,提示这两个蛋白的多态性可应用于贵州矮马的谱系鉴定和个体鉴别。

宗地花猪H-FABP基因mRNA的表达与肉质性状的相关研究

为研究不同饲养条件对地方猪种宗地花猪心脏型脂肪酸结合蛋白(heart fatty acid binding protein,H-FABP)基因表达及肌内脂肪(intramuscular fat,IMF)含量的影响,试验利用实时荧光定量PCR技术,分别测定放养型和圈养型宗地花猪背最长肌中H-FABP基因的表达水平,并测定背最长肌的IMF、大理石纹、嫩度。结果发现,圈养型宗地花猪的IMF、大理石纹、嫩度均高于放养型宗地花猪(P>0.05),pH、肉色极显著高于放养型宗地花猪(P<0.01);放养型宗地花猪背最长肌中H-FABP mRNA水平显著高于圈养型宗地花猪(P<0.05);放养型、圈养型宗地花猪H-FABP基因表达与IMF均无显著相关性(P>0.05)。以上结果表明,不同饲养条件影响H-FABP基因表达并在一定程度上影响IMF,但影响不显著。

贵州矮马与伊犁马生长激素基因5’侧翼区的结构特征

为了摸索贵州矮马生长发育的调控机制,探明贵州矮马与伊犁马生长激素基因5’侧翼区的结构特征,以4～5龄的贵州矮马和7～8龄的新疆伊犁马为研究对象,采用直接测序法从两种马基因组中克隆了生长激素(GH)基因5’侧翼区的DNA序列,并进行生物信息学分析。结果表明:1)从基因组中克隆的711bp片段为GH基因5’侧翼区序列;2)两个马品种的GH基因5’侧翼区中都存在TATA box、CAATbox、GC box和Octamer位点等真核生物启动子结构;3)从伊犁马GH基因5’侧翼区中检测到1个位于30bp处的突变位点发生了G→C颠换,由此新增了1个转录因子upstream stimulatory factor(USF)结合位点;4)从贵州矮马和伊犁马GH基因的5’侧翼区序列中发现了MZF1、CdxA、Nkx-2、AML-1a和c-Myc等19种共58个转录因子的结合位点。结论:克隆的711bp基因序列中存在大量的转录调控元件。

贵州矮马、西南马和伊犁马刺豚鼠信号蛋白基因的多态性

为了探索贵州矮马、西南马、伊犁马刺豚鼠信号蛋白(Agouti signaling protein,ASIP)基因与马品种毛色之间的关系,采用缺口PCR技术分析了141份贵州矮马、西南马、伊犁马的ASIP基因型,并进行克隆测序。结果表明,扩增出的793 bp和385 bp 2个片段为ASIP基因,793 bp片段中缺失一段11 bp的核苷酸,定义为a基因型,385 bp片段结构完整,定义为A基因型;3个马群体中A等位基因在骝毛中占优势;但aa基因型对应的毛色只有小部分为黑毛,绝大部分为栗毛、骝毛和复色毛,与已知的aa基因型决定黑毛的规律不相符,说明aa基因型可能不是中国马品种黑毛的决定基因型。

贵州矮马和西南马3种病毒性疫病的血清学分析

为探明2012—2013年贵州省紫云县马匹大量死亡的病因,为其科学防治提供参考,采用酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）方法对当地养殖的贵州矮马、西南马进行马传染性贫血病毒（Equine Infectious Anemia virus,EIAV）、马动脉炎病毒（Equine arteritis virus,EAV）和马疱疹病毒I型（Equine herpesvirus type-1,EHV-1）3种病毒的抗体水平检测,并与伊犁马进行比较。结果表明：3个马群中均未检测到EIAV抗体,EHV-1抗体阳性率达98.15%~100%;与伊犁马相比,贵州矮马和西南马EAV抗体的阳性率较高,分别为48.15%和19.35%,并与2个马群的血液理化指标存在一定相关性。紫云县贵州矮马和西南马存在较高比例的EAV感染,马驹和虚弱马匹感染EAV后死亡率较高,因此推测EAV可能是导致马匹死亡的原因之一。

贵州矮马与伊犁马基因组的RAPD分析

应用RAPD技术对贵州矮马的遗传多样性进行研究,并与伊犁马进行比较。以120条RAPD引物对两个马品种的混合基因组DNA进行筛选,发现6条引物可产生多态性,并用其对84份样品进行扩增,共获得123条带,其中101条为多态性条带。研究结果表明,贵州矮马与伊犁马的Nei指数分别为0.3136和0.3098,两个品种间遗传分化系数为4.74%,说明贵州矮马的遗传变异较伊犁马小,贵州矮马与伊犁马品种间的基因交流很少;计算个体的遗传相似系数并建立了系统发育树,获得9个分支,其中3个分支中两种马的分布比例相近,其他分支由1个马品种独享占主导,第4、5、6支中两种马所占的比例相近,说明两个马品种拥有共同的祖先,在较早的时间分离后单独进化。

贵州宗地花猪最佳屠宰体重的研究

将36头宗地花猪进行集中饲养育肥,并在65～75kg、75～85kg、85～95kg、95～105kg阶段分别选择3头,共12头进行屠宰测定和肉质测定,研究其胴体品质及肉质随体重的变化规律。试验结果表明:在75～85kg体重阶段育肥猪的屠宰率较高(76.24%±1.87%),瘦肉率较高(40.07%±0.68%),脂肪率较低(33.45%±4.43%),背膘较薄(3.72cm±0.23cm),肉色、大理石纹评分分布正常,肌肉保水能力强、失水率最低(14.10%±1.16%),熟肉率高(62.81%±0.86%),肉嫩。综合分析认为,宗地花猪以75～85kg作为上市屠宰体重最为合适。

宗地花猪及其杂种1代猪哺乳期和保育期生长性能的研究初报

对宗地花猪及其与长白猪、大白猪的杂种1代猪哺乳期(0～21 d)与保育期(22～56 d)的生长性能进行测定,结果表明,宗地花猪在早期诱食的条件下可顺利实现21 d断奶;哺乳期,大×宗、长×宗杂种猪与宗地花猪纯种猪增重差异不显著(P>0.05);保育期,大×宗、长×宗及宗×宗结束体重和增重分别为(16.92±1.63)和(12.52±1.00)kg、(16.87±0.65)和(12.49±0.40)kg、(12.79±0.90)和(8.67±0.59)kg,杂种猪明显高于宗地花猪纯种猪,差异达极显著水平(P<0.01)。

利用微卫星标记研究贵州矮马和伊犁马的遗传多样性

试验通过9个微卫星座位对贵州矮马和伊犁马2个品种共84匹马进行了遗传多样性检测,以8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离PCR扩增产物,并用银染法显色,计算各微卫星位点的等位基因频率、有效等位基因数(Ne)、杂合度(H)和多态信息含量(PIC)。结果表明,9个微卫星座位中COR059检出的变异最大,AHT040的变异最小;伊犁马的Ne、H和PIC的平均值高于贵州矮马;2个群体的平均遗传分化系数为0.041。说明2个品种都有丰富的遗传多样性,贵州矮马的基因较伊犁马更为纯合。

RNA干扰DGAT1和DGAT2基因在猪肝细胞中的表达

为了探索DGAT1和DGAT2基因对宗地花猪脂肪沉积效率的影响,以宗地花猪为试验动物,针对基因DGAT1和DGAT2 mRNA序列设计6对shRNA序列,构建RNA干扰表达载体,将DGAT1和DGAT2的shRNA干扰载体分别转染至肝细胞中,采用荧光定量PCR筛选出最佳shRNA干扰载体,并测定最佳干扰组细胞代谢液中甘油三酯和总胆固醇含量变化。结果显示,所构建的6个shRNA干扰载体均能抑制肝细胞中目的基因的表达,肝细胞中DGAT1和DGAT2基因的最高抑制效率分别为78.45%和87.52%。转染干扰效率最佳的载体p GPU6/GFP/Neo-DGAT1-1和p GPU6/GFP/Neo-DGAT2-1后,肝细胞培养液中甘油三酯和总胆固醇含量均降低,两者差异不显著(P>0.05)。转染p GPU6/GFP/Neo-DGAT2-1的肝细胞培养液中甘油三酯含量显著低于空白组(P<0.05),DGAT1干扰载体的干扰效率略低于DGAT2干扰载体(P>0.05)。综上,抑制DGAT1和DGAT2基因的表达,可降低肝细胞培养液中甘油三酯和总胆固醇含量。