胶体金免疫层析试剂盒对甲型H1N1流感病毒(2009)抗原快速检测的敏感性分析

目的了解胶体金免疫层析试剂盒对甲型H1N1流感病毒(2009)抗原快速检测的敏感性。方法分别用甲型流感病毒抗原检测试剂盒(胶体金免疫层析法)和甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒(胶体金免疫层析法)对171例疑似甲型H1N1流感(2009)患者鼻咽拭子标本进行检测,以实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)核酸检测结果为参考,比较胶体金免疫层析试剂盒对不同病程以及不同病毒核酸载量标本检测的敏感性。结果 2种试剂盒的检测敏感性与标本的病毒核酸载量呈正相关(P<0.01),病毒载量≥108拷贝/mL时均可达73.3%。同时,2种试剂盒的阳性检出率与标本的病程呈负相关(P<0.01),发病1～2 d时分别为66.7%和62.5%,推测其在实际应用中的理论敏感性分别可达77.3%和74.6%。结论胶体金免疫层析试剂盒检测甲型H1N1流感病毒(2009)在发病初期及病毒载量较高时有较好的检测效果,可帮助临床早期诊断和海关口岸等机构的现场筛查。但鉴于胶体金免疫层析法自身的局限性,其结果只能作为初步参考,最终的确认结果应以PCR结果为准。

煤矿井下辅助运输的现状及发展趋势探讨

在矿井逐步发展的形势之下,现强化代化井下辅助运输系统建设已经发展成为矿井的主流发展趋势。现代矿井运输具有复杂性以及多样性等特点,需要采用先进技术进行有效管理才能保证矿井运输效率与安全性。因此,在煤矿井下辅助运输系统建设时候,务必得要结合现代化安全矿井建设与发展的实际情况,来进一步强化并引进现代化、智能化的矿井运输设备,最终从根本之上来保障安全与效率。鉴于此,本文主要分析煤矿井下辅助运输的现状及发展趋势。

假奓包叶不同部位挥发油的分析比较

目的对假奓包叶根皮、茎皮、果壳和种子的挥发油成分进行比较。方法采用水蒸气蒸馏法提取这4个部位中的挥发油,对提取物进行GC-MS分析。结果从假奓包叶根皮中检测到9个挥发油成分,占挥发油色谱总峰面积的88.85%;从茎皮中检测到11个挥发油成分,占挥发油色谱总峰面积的87.24%;从果壳中检测到11个挥发油成分,占挥发油色谱总峰面积的71.21%;从种子中检测到11个挥发油成分,占挥发油色谱总峰面积的87.76%。分别确定它们的相对含量,并比较其一致性。结论首次对假奓包叶根皮、茎皮、果壳和种子挥发油进行了提取和分析比较。

人胎肝干细胞在重症联合免疫缺陷小鼠损伤肝脏中的植入

目的:从孕4.5～6周的人胚胎肝脏中分离培养肝干细胞,并观察其在重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠损伤肝脏中的植入.方法:从孕4.5～6周的人胚胎肝脏中分离干细胞并进行体外长期培养,用RT PCR方法检测肝干细胞相关分子标志以及八聚物结合蛋白4(Oct-4)的表达,然后植入经四氯化碳(CCl4)造成急性肝损伤的SCID小鼠体内,在移植后2、l0、17d分别对受体鼠肝脏冰冻切片进行荧光观察和H-E染色.结果:所建立的胎肝细胞系不仅表达二肽水解酶Ⅳ(DPPⅣ)、白蛋白(Alb)、细胞角蛋白(CK)19、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、CK18、肝细胞生长因子受体(c-met)、干细胞因子受体(c-kit)等肝干细胞相关标志,还表达干细胞转录因子Oct-4.在细胞移植后2 d,肝脏冰冻切片未见绿色荧光;移植后10 d和17d肝脏冰冻切片见散在的绿色荧光.对同一切片做H-E染色,发现绿色荧光部位为肝板内的多个成熟肝细胞.结论:从人胚胎肝脏中分离的干细胞能够植入SCID小鼠的损伤肝脏.

98例手足口病流行特征与临床分析

目前,我国手足口病患儿有增多流行趋势。为了解该病的流行特征及临床特点,提高对该病的认识,防止其暴发流行及病情恶化,采用描述性流行病学方法,对我院2008年5?6月收治的98例住院患儿进行研究分析。发病患儿多数为1～5岁(80.61%)的农村或郊区儿童。散居儿童(72例,73.47%)多于群居儿童(26例,26.53%)。临床表现主要为发热和皮疹,皮疹部位以手、足、口、臀、膝等为主。98例患儿均有皮疹,其中88例(89.80%)患儿发热。实验室检查血常规,白细胞无明显变化或升高。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测报告,肠道病毒71型(EV71)或柯萨奇病毒A16型(CA16)阳性共78例,其中EV7174例。对于本病,常规抗病毒及对症治疗效果好,患儿均在1周左右治愈,但是如不及时诊治,可能出现病程延长或各种并发症,导致病情恶化甚至死亡。故除对患儿进行积极的隔离治疗和疫点处理外,有效的健康教育对该病的预防能起到事半功倍的效果。

栾树花中香豆素类化合物研究

目的对栾树的花进行化学成分研究。方法采用硅胶、聚酰胺柱层析进行分离纯化,根据理化性质和光谱分析鉴定化合物结构。结果从栾树花三氯甲烷部分中分离得到了3个化合物,经鉴定分别为β-谷甾醇(Ⅰ)、乙酰基伞形花内酯(Ⅱ)和6-苯甲酰基伞形花内酯(6-苯甲酰基-7-羟基香豆素)(Ⅲ)。结论化合物Ⅱ、Ⅲ为香豆素类化合物,是首次从栾树属植物中分离得到;3个化合物均为首次从栾树花中分离得到。

麦冬花化学成分研究

目的:对麦冬花进行化学成分研究。方法:采用硅胶、聚酰胺和Sephadex LH-20柱层析进行分离纯化,根据理化性质和光谱分析鉴定化合物结构。结果:从麦冬花中分离得到了11个化合物,经鉴定分别为:β-谷甾醇(Ⅰ)、薯蓣皂苷元(Ⅱ)、胡萝卜苷(Ⅲ)、麦冬皂苷C′(Ⅳ)、薯蓣皂苷(Ⅴ)、5,7-二羟基-6-甲基-3-(4′-羟基苄基)-4-色满酮(Ⅵ)、木犀草素(Ⅶ)、山柰素-3-O-β-D-葡萄糖苷(Ⅷ)、山柰素-3-O-(6″-O-巴豆酰)-β-D-葡萄糖苷(Ⅸ)、山柰素-3-O-(6″-乙酰基)--βD-葡萄糖苷(Ⅹ)和葡萄糖(Ⅺ)。结论:以上11个化合物均为首次从麦冬花中分离得到,化合物Ⅵ为首次从麦冬中得到的单体化合物,化合物Ⅶ、Ⅷ、Ⅸ和Ⅹ为首次从该属植物中分离得到。

H1N1流感与H7N9禽流感感染BALB/c小鼠发病特点初步研究

目的本实验旨在初步探讨A/Shanghai/4664T(H7N9)和A/Puerto Rico/8/34(H1N1)病毒感染BALB/c小鼠的发病特点,为H7N9致病机制与防治的研究提供数据支持。方法将同等剂量(5×103TCID50)流感病毒滴鼻感染BALB/c小鼠,分析其在感染后体重、肺指数、病毒载量和肺组织病理的变化情况。结果 H1N1PR8感染组和H7N9感染组小鼠在7 d内体重均持续减低,H1N1 PR8组较H7N9组降低更为明显;在感染后3 d H7N9组与PBS组肺指数无显著差异(P>0.05),但感染后7d H7N9组与PBS组相比显著增高(P<0.05);H1N1PR8组比H7N9组感染后3 d肺指数显著增高(P<0.05),但感染后第7天无显著差异(P>0.05)。H1N1 PR8组和H7N9组病毒载量在感染后第3天均显著升高,但两组无显著差异;第7天两组病毒载量均有所降低,但H7N9组病毒载量显著高于H1N1 PR8组(P<0.05)。H1N1 PR8在感染后3 d主要病理变化为炎症细胞浸润和水肿,而H7N9组主要轻度炎症细胞浸润;在感染后7 dH1N1 PR8组可见大量炎症细胞浸润,出现大面积肺水肿;H7N9组表现为大量炎症细胞浸润。结论 H7N9和H1N1 PR8感染BALB/c小鼠均可发病,但发病特点有所差异,H7N9病毒对鼠的适应性比H1N1 PR8差。

三级生物安全防护实验室职业紧张分析

目的三级生物安全实验室(Biosafety level 3 laboratory,BSL-3实验室)工作人员因面对高致病性病原微生物操作和特殊工作环境而存在的工作压力可能不利于风险控制而增加意外事故,本研究分析BSL-3实验室工作人员的职业紧张度及紧张源,为控制实验室风险提供依据。方法以JDC模式和ERI模式为理论基础,对"中文版简明职业紧张问卷"改编成适用于BSL-3实验室工作人员的职业紧张评估问卷,调查了上海、浙江、江苏、福建、武汉五个省市的六家BSL-3实验室的87位工作人员职业紧张状况。结果研究得出年龄、工作年限、工作身份、BSL-3实验室所操作微生物的种类、传播途径及在BSL-3实验室内进行动物实验是显著影响BSL-3实验室工作人员职业紧张水平的因素。结论 20-39岁、低工作年限、固定工作人员、进行呼吸道传播病原微生物操作、动物实验以及多种病原微生物操作的工作人员职业紧张程度较高。

随机聚合酶链反应检测未知病毒方法学的建立

目的探索并建立一种用于快速检测未知病毒的分子生物学方法。方法分别以乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)为假定的未知DNA、RNA病毒,验证随机聚合酶链反应(PCR)检测未知病毒的可行性。分离HBV、HCV的阳性血清,去除宿主DNA后,提取病毒核酸。锚定随机引物经Klenow酶处理(模板为DNA)或反转录酶作用(模板为RNA)退火至模板,随后用锚定特异引物对模板进行非特异性扩增。扩增产物经纯化后克隆、测序,最后与BLAST进行比对。结果经BLAST比对证实,插入序列中有HBV和HCV的基因组片段,在病毒为1×106拷贝/ml时,被检测克隆的阳性率约为15%。目前我们利用本法能达到的检测低限大致为1×104拷贝/ml。结论成功建立了一种基于随机PCR的未知病毒检测方法,其优点在于不依赖病毒的细胞培养及其核酸序列信息。这种方法的建立为快速检测不明原因疾病和新发传染病病原体提供了新的思路。

生物安全三级实验室的工作满意度现状及其与职业紧张程度的关联

因生物安全三级（BSL‐3）实验室工作人员需在特殊工作环境中对高致病性病原微生物进行操作，其心理健康状态可影响实验室生物安全。本研究以工作满意度作为早期心理健康状况的评估指标，对江苏、浙江、上海、福建、湖北5个省市6家BSL‐3实验室工作人员进行调查，分析工作满意度与职业紧张程度的关联。调查结果显示，BSL‐3实验室人员的工作满意率为32．2％。职业紧张程度与工作满意度呈负相关。工作要求‐自主（JDC）模式中“社会支持”是提高工作满意度的因素，高社会支持组比数比（ OR ）值为4．60（95％ CI为1．25～16．97）。付出‐回报失衡（ERI）模式中“内在投入”是降低工作满意度的因素，高内在投入组 OR值为0．03（95％ CI为0．00～0．28）。分析结果提示，可通过加强“社会支持”和解除过度“内在投入”等措施，降低BSL‐3实验室人员的职业紧张程度，从而提高工作满意度。

中东呼吸综合征冠状病毒的实验室检测技术

中东呼吸综合征(MERS)是一种由中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)感染所致的急性呼吸道传染病,其临床诊断需依据实验室病原学检测结果。本文就MERS-CoV的核酸检测、抗原和抗体检测、病毒分离鉴定及基因变异监测等方面的最新研究进展作一综述。

Hes1基因诱导小鼠肝原始细胞分化为胆管上皮细胞(英文)

背景与目的:采用体外获得性表达外源发状分裂相关增强子-1(hairy and enhancer of split1,Hes1)基因的方法,探讨Hes1在肝干细胞分化以及胆管上皮细胞发育中的作用。材料与方法:通过PCR方法从小鼠基因组中克隆Hes1基因片段,构建表达载体pEGFP-C1-Hes1和pcDNA3.1-Hes1,将2种表达载体分别转染肝原始细胞系(LEPCs),应用RT_PCR和Real-timePCR技术检测胆管细胞分子标志物CK19、GGT,胆管上皮细胞相关转录因子HNF6、HNF1β,肝细胞分子标志物GS、BGP和肝卵圆细胞的分子标志物Thy-1的表达,并在荧光显微镜下观察EGFP标记的LEPCs细胞系荧光强度的变化。结果:成功构建表达载体pEGFP-C1-Hes1和pcDNA3.1-Hes1。RT-PCR和Real_timePCR检测均表明胆管细胞分子标志CK19、GGT表达量上调;胆管上皮细胞相关转录因子HNF6、HNF1β表达上调;肝细胞分子标志GS、BGP表达量下调;卵圆细胞的分子标志Thy-1表达量下调;LEPCs细胞系绿色荧光增强。结论:初步证明小鼠肝原始细胞经Hes1的表达诱导后可向胆管上皮细胞方向分化,推测Hes1为胆管上皮细胞分化的转录调控因子。

纳米孔测序技术在2019冠状病毒病重型患者继发感染诊断中的应用

目的:探讨纳米孔测序技术在2019冠状病毒病(COVID-19)重型患者继发感染诊疗中的应用价值。方法:共入组了来自3例COVID-19重型患者的77份临床标本,所有标本均经过热灭活后进行基于磁珠富集的总核酸抽提,构建DNA文库,通过纳米孔测序技术进行病原体检测。测序数据采用Centrifuge软件进行病原体数据库比对和R语言差异分析,以获得病原微生物的鉴定结果。比较纳米孔测序结果与呼吸道病原体筛查多重定量聚合酶链反应(PCR)检测及同一时期临床微生物检验结果,以验证纳米孔测序技术的有效性。结果:纳米孔测序结果显示,44份标本检出病原体(阳性率为57.1%),包括肺炎克雷伯菌、表皮葡萄球菌、屎肠球菌和狡诈菌等。其中,肺炎克雷伯菌、表皮葡萄球菌和屎肠球菌均在基于微生物培养的临床微生物检验中检出;肺炎克雷伯菌同时在呼吸道病原体筛查多重定量PCR检测中检出;狡诈菌仅在纳米孔测序中检出,综合考虑患者的临床症状进行抗菌药物治疗,患者的感染情况得到控制。结论:纳米孔测序可快速鉴定临床标本中的潜在病原体,辅助COVID-19重型患者的临床诊断和治疗方案的制订。

胰十二指肠同源盒基因-1逆转录病毒表达载体的构建及其在肝干细胞中的稳定表达

目的:通过克隆胰十二指肠同源盒基因-1(pancreatic duodenal homeobox-1,PDX-1),构建表达PDX-1的逆转录病毒表达载体和稳定表达PDX-1的肝原始细胞系(liver epithelial progenitor cells,LEPCs),以研究肝干细胞向胰腺细胞的转分化潜能。方法:通过PCR方法克隆PDX-1基因全长,将其构建到pMSCVpuro逆转录病毒载体中获得pMSCV PDX-1 puro载体。将该载体导入Phoenix包装细胞系,进而采用乒乓转染的方法感染包装细胞PT67,获得高滴度稳定产毒的PT67细胞系。结果:成功构建了pMSCV PDX-1 puro载体,并转染PT67细胞。利用PT67细胞系产生的病毒上清可以高效的感染体外培养的肝干细胞LEPCs,获得稳定表达PDX-1基因的LEPCs(LEPCs PDX-1)。结论:PDX-1逆转录病毒表达载体的成功构建和稳定表达PDX-1的肝干细胞系的获得为研究LEPCs向胰腺细胞的转分化奠定了基础。

胰十二指肠同源盒基因-1启动子在肝干细胞分化研究中的应用

背景与目的利用报告基因监测肝干细胞向胰腺细胞的转分化潜能。材料与方法通过PCR从小鼠基因组中克隆胰十二指肠同源盒基因-1(Pancreaticduodenalhomeobox-1,PDX-1)启动子片段,构建PDX-1启动子调控的绿色荧光蛋白报告载体(pPDX-1EGFP),并利用报告载体标记的肝原始细胞系(Liverepithelialprogenitorcells,LEPCs)观察肝干细胞向胰腺细胞的转分化潜能。结果获得PDX-1启动子调控的绿色荧光蛋白报告载体及报告载体标记的LEPCs。结论pPDX-1EGFP报告载体的成功构建为研究LEPCs向胰腺细胞的转分化提供了简捷的分子工具。

上海2009甲型H1N1流行性感冒病毒全基因组分析

2009年全球暴发2009甲型H1N1流行性感冒(简称流感)疫情,上海于2009年5月出现第1例输入型病例。为了解上海地区输入型2009甲型H1N1流感病毒的生物学特征,以上海较早发现的2例输入型甲型H1N1流感患者作为研究对象,分离出A/Shanghai/37T/2009和A/Shanghai/71T/2009病毒,利用实时定量荧光反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定病毒,通过扫描透射电子显微镜观察、免疫荧光检测、全基因组测序和生物信息软件分析,对这2株流感病毒形态、结构、耐药性、基因特点和病毒型别等进行研究。结果显示,病毒呈现正黏病毒颗粒形态特征;犬肾(MDCK)细胞内的病毒能与患者恢复期血清反应。此2株病毒的全基因核酸序列和氨基酸序列与美国参考株A/California/04/2009(H1N1)有较高同源性,其中第31位氨基酸残基发生改变。对金刚烷胺耐药,而对奥司他韦敏感。基于全基因组的系统发育分析,确认此2株病毒属2009甲型H1N1流感病毒。

2009年上海分离的2株猪源甲型H1N1流感病毒

2009年全球暴发猪源甲型H1N1流感病毒疫情，上海地区于5月份诊断第一例输入性病例。本研究从上海地区较早发现的两个输入性甲型H1N1流感病例样本中分离出2株病毒，分别命名为A／Shanghai／37T／2009和A／Shanghai／71T／2009。MDCK细胞培养上清中的病毒通过电镜显示，该病毒的直径大约为60～80nm，具包膜，包膜表面有突起，呈现出正粘病毒颗粒形态特征。免疫荧光检测显示，MDCK细胞内病毒成分能与病人恢复期血清反应。2株病毒的全基因核酸序列和氨基酸序列与美国参考株California04具有高度的同源性；基于全基因的系统发育分析，确认此2株病毒属于2009年在全球暴发流行的新型H1N1甲型流感病毒。在此基础上的进一步研究发现，2株病毒可诱导A549细胞中抗病毒效应基因的表达；经Ⅰ型干扰素预处理的细胞可有效抵抗病毒的感染，提示其潜在的保护作用。综上所述，上海分离的2株病毒和2009年北美暴发的猪源甲型H1N1流感病毒是同源的，并且在病毒的致病性，药物的抗性和抗原性方面没有发生变异。

荞麦七化学成分研究

目的:对荞麦七的化学成分进行研究。方法:采用硅胶、聚酰胺柱层析进行分离纯化,根据理化性质和光谱分析鉴定化合物结构。结果:从荞麦七中分离得到了10个化合物,经鉴定分别为:β-谷甾醇(Ⅰ)、β-胡萝卜苷(Ⅱ)、4′,5,5′,7-四羟基-3-甲氧基-3′-O-α-L-吡喃阿拉伯糖基黄酮(Ⅲ),没食子酸(Ⅳ)、杨梅素(Ⅴ)、3-甲氧基杨梅素(Ⅵ)、5,5′,7-三羟基-2′,3-二甲氧基-4′-O-β-D-吡喃葡萄糖基黄酮(Ⅶ)、2′,5,5′,7-四羟基-3-甲氧基-4′-O-β-D-吡喃葡萄糖基黄酮(Ⅷ)、杨梅素-3-O-α-L-鼠李糖苷(Ⅸ)、3,4′-二甲氧基杨梅素(Ⅹ)。结论:化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ、Ⅷ和Ⅹ是首次从该属植物中分离得到。

新型多功能LCD显示系统的设计与实现

设计了多功能液晶显示系统。它不仅具有电视功能,还能自动识别各种不同制式(PAL/NTSC/SECAM)的视频信号和不同显示模式(从VGA至SXGA)的PC图形信号,以及数字电视信号,可分别进行相应的处理,转换成LCD满屏显示的数据格式进行显示,其工作过程由MCU经I2C控制。