猪呼吸道病原菌多重PCR检测方法的建立及应用

为建立一种快速诊断由猪链球菌(SS)、猪胸膜肺炎放线杆菌(App)、猪多杀性巴氏杆菌(Pm)、副猪嗜血杆菌(Hps)、猪支气管败血波氏杆菌(Bb)和猪肺炎支原体(Mhp)单独或混合感染引起的猪呼吸道疾病的检测方法,基于上述6种病原菌对应的gdh(SS)、apxⅣA(App)、KMT1(Pm)、16S rRNA(Hps)、fla(Bb)和p36 ldh(Mhp)基因设计特异性引物,通过优化各反应条件建立了能同时检测SS、App、Pm、Hps、Bb和Mhp的多重PCR方法。结果显示,该方法特异性强,仅对SS、App、Pm、Hps、Bb和Mhp有特异性扩增,对大肠埃希氏菌、奇异变形杆菌、停乳链球菌和金黄色葡萄球菌等其他病原菌的扩增结果均为阴性;敏感性较高,对6种病原菌DNA的最低检出限分别为SS 8.66×10^(2)拷贝/μL、App 1.05×10^(4)拷贝/μL、Pm 8.61×10^(2)拷贝/μL、Hps 9.01×10^(2)拷贝/μL、Bb 7.54×10^(2)拷贝/μL、Mhp 3.86×10^(3)拷贝/μL。利用该多重PCR和各单项PCR分别检测贵州省9个市(州)部分猪场的469份临床样品,结果显示,多重PCR阳性检出率为App 0.85%(4/469)、Pm 15.35%(72/469)、SS 59.49%(279/469)、Hps 52.67%(247/469)、Mhp 6.40%(30/469)、Bb 5.12%(24/469)。混合感染主要以SS和Hps为主,阳性检出率为30.92%(145/469),其次是Pm、SS和Hps混合感染,阳性检出率为7.04%(33/469),其他混合感染情况占比较低。多重PCR和单项PCR的总阳性符合率为96.76%。结果表明,建立的多重PCR检测方法为SS、App、Pm、Hps、Bb和Mhp混合感染的临床快速检测及流行病学调查提供了技术支持。

猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒、猪圆环病毒2型和猪流感病毒四重PCR检测方法的建立

为了快速、准确检测4种猪呼吸道病毒,根据NCBI GenBank数据库中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)和猪流感病毒(SIV)的基因序列,设计4对特异性引物,建立一种能通过扩增片段大小来同时鉴别检测PRRSV(111 bp)、PRV(173 bp)、PCV2(273 bp)、SIV(445 bp)的四重PCR检测方法。特异性试验结果显示,扩增PRRSV、PRV、PCV2、SIV模板均能得到预期特异条带,而扩增灭菌水(阴性对照)、CSFV、JEV不产生任何条带。敏感性试验结果显示,该方法最低病毒核酸检出量分别为PRRSV(6.5×10^(4)copies/μL)、SIV(2.68×10^(5)copies/μL)、PCV2(7.16×10~5copies/μL)、PRV(2.37×10^(4)copies/μL)。用所建立的四重和各单一PCR方法检测45份临床样品,四重PCR的阳性检出率分别为PCV2 22.2%(10/45)、PRRSV 17.7%(8/45)、PRV 4.4%(2/45)、PRRSV+PCV2 13.3%(6/45),四重PCR方法与单一PCR方法的阳性符合率为100%。表明建立的病毒四重PCR检测方法特异性强、敏感性高,可用于上述4种呼吸道病毒的鉴别检测。

牛至油-青蒿素复方纳米乳制备及治疗鸡球虫病效果评价

制备牛至油-青蒿素复方纳米乳(OANE)并验证其治疗鸡球虫病的效果。自乳化法制备OANE,表征并考察其动力学、热力学稳定性;选取海兰褐蛋公雏400只,分为健康对照组、辅料对照组、感染组、OANE低剂量组、OANE中剂量组、OANE高剂量组、球虫散对照组和磺胺喹噁啉钠对照组8组。16日龄时,除A组外,其他各组均经口接种孢子化柔嫩艾美耳球虫卵囊(8×10^(4)个/只);感染后第5天,各组给予相应处理至第9天试验结束。以抗球虫指数(ACI)等综合评价治疗效果。结果显示,成功制备OANE,粒径分布、Zeta电位、稳定性等良好。试验期间,OANE中剂量组、高剂量组血便记分显著低于球虫散对照组(P<0.05),与磺胺喹噁啉钠对照组差异不显著(P>0.05);饲料转化率极显著高于感染组(P<0.01),与阴性对照组差异不显著(P>0.05);卵囊排出率显著低于感染组和鸡球虫散组(P<0.05或P<0.01),与磺胺喹噁啉钠组差异不显著(P>0.05),ACI达170以上;感染后第6天,血清丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)水平极显著低于(P<0.01)其余药物组,而总抗氧化能力(T-AOC)和超氧化物歧化酶(SOD)相当或显著高于阳性药物对照组(P>0.05或P<0.05)。说明OANE中剂量、高剂量治疗鸡球虫病效果良好。

山区发展现代畜牧业的探索与实践

湖北省来风县是农业部定点扶贫县。它地处鄂西，南接湘西，西邻川东，为三省边区交通冲要和物资的重要集散地。境内酉水纵贯，武陵横亘，山地资源丰富，为发展畜牧业奠定了良好的基础。在历史上，来凤农民就有养殖习惯，特别是生猪养殖，在农民的生活中占有重要比重，是农民肉食和经济的主要来源。近年来，来凤县致力于将山地优势转化为经济优势，坚持以科学发展观为指导，以科技为支撑，大力发展现代畜牧业。