淡色库蚊对溴氰菊酯抗药性和敏感性相关基因克隆和序列分析

目的 获取淡色库蚊对溴氰菊酯抗药性和敏感性相关基因。 方法 通过正、反向抑制性差减杂交获取对溴氰菊酯抗药性和敏感性淡色库蚊的差异表达基因 ,并以基因芯片和逆 Northern对所获基因进行杂交鉴定。 结果 正、反向抑制性差减杂交各获得 5 2 3和 2 86个克隆 ,经芯片鉴定后在抗性品系高表达的基因分别有15 5个 (2～ 3倍 )和 42个 (3倍以上 ) ,在敏感品系中高表达的基因分别有 15个 (2～ 3倍 )和 9个 (3倍以上 )。对 3倍以上差异表达和特异表达基因进行单向测序 ,根据最高同源性比对结果 ,线粒体 r RNA基因、6 0 S核糖体蛋白基因、40 S核糖体蛋白 S4基因、胰蛋白酶前体基因、糜蛋白酶 A前体基因、视蛋白基因等在抗性品系中高表达 ;而 40 S核糖体蛋白 S2 9基因和肌球蛋白调控轻链 2在敏感品系中高表达 ;另外 ,1,4- α-葡聚糖分支酶和核糖体蛋白 46基因在抗性品系中特异表达。 结论 所获得的 13个差异表达基因和

日本血吸虫感染者尿液诊断标志物的电泳筛选及其单克隆抗体的制备和初步应用

目的 筛选日本血吸虫感染者尿液检测探针。方法 采用电泳方法从日本血吸虫感染者尿液筛选诊断标志物，以此为抗原制备ＭｃＡｂ，并用ＥＬＩＳＡ对尿样进行了初步检测。结果 ＰＡＧＥ电泳法筛选到一条分子量约３０ｋＤａ 的糖蛋白带；以此糖蛋白为抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠制备单克隆抗体，获得２ 株ＭｃＡｂ － ＮＰ５６ 和ＮＰ５４；用ＮＰ５６ 以间接ＥＬＩＳＡ法检测１０ 份日本血吸虫感染者尿液（ＥＰＧ中位数为６９），浓缩５０ 倍尿液和原尿分别有９ 份和５ 份呈阳性。结论 本研究制备的ＭｃＡｂ－ ＮＰ５６ 有望作为日本血吸虫慢性病人和轻度感染者尿液的检测探针应用于现场。

淡色库蚊对溴氰菊酯抗药性品系cDNA表达文库的构建和初步鉴定

目的 构建淡色库蚊对溴氰菊酯抗药性品系cDNA表达文库。方法 应用定向克隆技术将相应cDNA片段插入λExCell/NotⅠ /EcoRⅠ /CIP载体的NotⅠ和EcoRⅠ双酶切位点 ;并用PCR对插入片段大小进行分析。结果 获得含 4.72×10 5个重组子的cDNA表达文库 ,重组率为 10 0 % ,插入片段大小平均约 1.1kb。结论 所建文库容量及插入片段大小适合进一步研究。

两个标准化cDNA差减文库的构建

目的 构建 2个标准化 c DNA差减文库。方法 以淡色库蚊对溴氰菊酯抗药性品系为Tester、敏感性品系为 Driver,进行正向抑制性差减杂交 ;以敏感品系为 Tester、抗性品系为 Driver,进行反向抑制性差减杂交。分别将获取的 2组抑制性差减杂交产物克隆入质粒表达载体 (Pin-Point TMXa- 1T- Vector) ,并以 PCR扩增鉴定插入片段。结果 获得 2个标准化 c DNA差减文库 ,其中抗性相关基因 (抗性品系高表达或特异表达 )文库含 5 2 3个重组子 ,敏感相关基因 (敏感品系高表达或特异表达 )文库含 2 86个重组子。插入片段大小平均约 36 0 bp。结论 所建的

淡色库蚊对溴氰菊酯抗性和敏感品系差异表达蛋白的研究

目的 :获取淡色库蚊对溴氰菊酯敏感和抗性品系的差异表达蛋白 ,为蚊虫抗药性分子机理的深入研究奠定基础。方法 :应用十二烷基硫酸钠 -聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS- PAGE)获取敏感和抗性蚊虫水溶性蛋白的电泳谱 ,并用 L abworks TM分析软件对电泳结果进行分析。结果 :淡色库蚊对溴氰菊酯敏感和抗性品系表达蛋白间存在质和量的差异。其中 ,敏感品系 4龄幼虫较抗性品系有 1条分子质量为 6 0 .3ku的特异带 ;敏感品系雌性成蚊有 1条分子质量为 36 .1ku的特异带 ,而抗性品系则有分子质量为 97.2ku和 36 .9ku的 2条特异带。在蛋白表达量的差异方面 ,共有 8条蛋白带存在 2倍以上的差异。结论

寄生虫宿主尿抗原的检测研究进展

尿抗原（ＣＡｇ）是指经尿液排泄的、具有抗原特性的、可为免疫学试验所揭示的一类循环抗原（ＣＡｇ）。ＣＡｇ检测是近年来寄生虫感染免疫学诊断的研究热点之一，与循环抗体的检测相比，ＣＡｇ检测更可提供感染虫荷、现症感染、疗效考核等信息［１］。ＣＡｇ检测一般是从...

纤维支气管镜吸痰治疗重症肺部感染的临床疗效

目的探讨纤维支气管镜吸痰治疗重症肺部感染的临床疗效。方法选取我院收治的86例重症肺部感染患者,将其随机分为观察组和对照组各43例,观察组采用纤维支气管镜吸痰治疗,对照组采用传统吸痰方法治疗。观察两组患者治疗总有效率及临床症状改善时间及住院天数。结果观察组治疗总有效率为90.7%,对照组为58.1%,两组比较差异显著,差异具体统计学意义P<0.01,且治疗后观察组患者体温恢复正常时间、症状消失时间、血常规恢复正常时间及住院时间均短于对照组,P<0.01。结论采用纤维支气管镜吸痰治疗重症肺部感染临床疗效确切,可明显缩短住院时间,值得临床推广使用。

华支睾吸虫特异性抗原的筛选

华支睾吸虫特异性抗原的筛选田海生苏畅张耀娟（南京医科大学寄生虫学教研室，南京２１００２９）关键词华支睾吸虫；电泳；特异性抗原华支睾吸虫、血吸虫、肺吸虫、肝片形吸虫和姜片虫成虫间存在着共同抗原，并引起交叉反应，已为多年来中外学者的工作所证实［１～４］...

探讨中西医综合治疗对慢性阻塞性肺疾病稳定期患者的疗效

目的研究分析中西医综合治疗对慢性阻塞性肺疾病的临床效果。方法选取我院2012年全年收治的78例慢性阻塞性肺疾病稳定期患者,将其按照抽签方法分为观察组和对照组,对照组患者给予单纯西药进行治疗,观察组患者则在对照组的基础上给予中药治疗,判断两组患者的临床效果,为临床提供可靠的参考依据。结果观察组患者的总有效率为87.18%,对照组为58.97%,比较具有显著差异(P<0.05);且观察组患者肺功能改善情况明显优于对照组患者,有显著差异(P<0.05)。结论给予老年稳定期慢性阻塞性肺病患者进行中西医联合治疗,可有效的改善肺功能,值得更广泛推广应用。

淡色库蚊细胞色素P450抗性相关基因克隆与初步鉴定

[目的 ]探讨淡色库蚊细胞色素P45 0与溴氰菊酯抗药性的关系。 [方法 ]采用一对昆虫细胞色素P45 0简并引物 ,以反转录 聚合酶链反应从淡色库蚊扩增特异片段 ,T/A直接克隆法筛选阳性克隆 ,对新序列进行cDNA芯片和逆Northern分析。 [结果 ]从淡色库蚊对溴氰菊酯敏感品系和抗性品系获得 112个阳性克隆 ,其中 2 4个阳性克隆测序后显示为细胞色素P45 0新序列 ,由GenBank登录上网 ;经国际细胞色素P45 0命名委员会鉴定分别属CYP4家族CYP4C、CYP4D、CYP4H和CYP4J等 4个亚家族 ;2 4个CYP4cDNA片段中 ,来自敏感品系的 2个片段(NYDS3和NYDS5 )和来自抗性品系的 4个片段 (NYDR6、NYDR9、NYDR15和NYDR17)在两品系间存在差别 ,cDNA芯片信号亮度值均是抗性品系大于敏感品系 ,倍数在 3 .1～ 9.7范围内 ;NYDR17仅与抗性探针杂交 ;逆Northern再鉴定 ,获得了与cDNA芯片一致的结果。 [结论 ]淡色库蚊CYP4与溴氰菊酯抗性相关 ;在淡色库蚊溴氰菊酯抗性机理中 ,可能存在P45 0基因点突变而导致的特异表达。

淡色库蚊细胞色素P450基因研究

采用一对昆虫细胞色素P45 0简并引物 ,以反转录 聚合酶链反应从淡色库蚊对溴氰菊酯敏感品系和抗性品系成虫RNA扩增到约 485bp和 5 10bp两个片段 ,将这两个片段与PinPointTMXa 1T质粒重组 ,然后克隆至大肠杆菌JM 10 9菌株 ,筛选获得 6 8个阳性克隆 ;其中 2 4个阳性克隆测序后与GenBank资料对照 ,显示为细胞色素P45 0新序列 ;分子系统学研究显示 ,2 4个新基因 (等位基因 )分别属CYP4家族CYP4C、CYP4D、CYP4H和CYP4J等 4个亚家族 ,其已由细胞色素P45 0命名委员会命名和GenBank登录上网 ;其中CYP4C2 3可能是一个假基因 ,CYP4H13具有一段 5 8个碱基长度的内含子 ,CYP4J4V1在近 3′端具有一个终止密码子TAG .

用随机引物多态性DNA聚合酶链反应鉴别新的裂体吸虫X

目的 鉴定新的裂体吸虫χ的基因组 DNA。方法 应用随机引物多态性 DNA聚合酶链反应 (RAPD- PCR)对裂体吸虫χ(S.χ)和日本血吸虫 (S.j)的基因组 DNA进行分析鉴别。感染了S.χ和 S.j尾蚴的兔 4 5 d后杀死 ,各取成虫 5 0条 ,磨碎 ,用苯酚—氯仿抽提法提取基因组 DNA。反应在 PCR扩增仪上进行 ,应用 2 9个随机引物 ,1.4 %琼脂糖凝胶电泳后观察、照相。结果 2 9个引物中 2个引物 ,J0 1 碱基 CCCGGCATAA和 L1 2 碱基 GGGCGGTACT的扩增产物在两者间显示出明显的差异带。引物 J0 1 S.χ特异性条带 1条 ,S.j特异性条带 1条。引物 L1 2 S.χ特异性条带 3条 ,S.j特异性条带 1条。结论 S.χ和 S.j的基因组 DNA在 J0 1 和 L1 2 的 6个位点的序列有所不同 ,出现了差异带 ,这在种间进化方面有鉴别价值。

结合形态学性状和遗传学标记推断细粒棘球绦虫传播环

包虫病控制规划是切断寄生虫的生活史,了解当地的传播模式有助于提高防治效果。尽管原头蚴顶突上的钩性状受其发育环境——中间宿主的影响,但由于它没有从其它环境和遗传的表型变量中分离开来,所以限制了据此的传播环推断。本研究结合钩性状的量化遗传分析和中性遗传标记的群体结构资料展示了一个将环境和遗传的混合影响因素分离开来的方法。

淡色库蚊β-肌动蛋白基因克隆与序列分析

目的 获取淡色库蚊 β-肌动蛋白全长基因。 方法 采用 RACE法筛选淡色库蚊溴氰菊酯抗性品系 c DNA表达文库 ,获得 β-肌动蛋白基因的 5′和 3′RACE序列 ,然后通过 T/ A克隆插入 p GEM- T质粒载体 ,经过测序、拼接获取全长序列。用 BL ASTp软件将该基因推导的氨基酸序列与蛋白质公共数据库 Swissprot比对、分析。 结果 获得淡色库蚊 β-肌动蛋白基因全长序列 ,总长度为 12 90 bp,开放阅读框为 1132 bp,编码 377个氨基酸 (Gen Bank/ NCBIAY10 0 0 0 5 )。推导的氨基酸序列与公共数据库比对 ,发现与冈比亚按蚊和黑腹果蝇的 β-肌动蛋白的同源性均为 91%。蛋白质的理论分子质量为 4 1.7ku,等电点 (PI)为 5 .4。 结论 获得了淡色库蚊 β-肌动蛋白基因全长序列 ,为蚊虫分子生物学的进一步研究奠定了基础。

用RAPD-PCR鉴定抗溴氰菊酯淡色库蚊

用ＲＡＰＤ－ＰＣＲ法对淡色库蚊抗溴氰菊酯品系和敏感品系的基因组ＤＮＡ进行了分析鉴别。结果表明：不同引物扩增出的产物数量不等，明显可分辨的带一般在４～１３条之间，带的大小在０．５～５．１ｋｂ之间；２２个引物在两品系中各扩增出１７０条可分辨带，绝大部分条带在两品系间是共同的；Ａ，Ｂ，Ｃ，Ｄ，Ｅ，Ｆ，Ｇ７个引物的扩增产物在两者间共显示差异带２１条（２，３，７，４，１，１和３条），其中抗性品系特异带１２条（１，２，５，２，１，０和１条）；敏感品系特异带９条（１，１，２，２，０，１和２条）。

对溴氰菊酯抗性和敏感淡色库蚊不同发育阶段的抗性水平

对室内选育的淡色库蚊（对溴氰菊酯抗性品系和敏感品系）用浸渍法测定了Ⅱ龄、Ⅲ龄和Ⅳ龄幼虫，用接触筒法测定了早期、中期和晚期成虫；并观察了增效醚（ＰＢ）、磷酸三苯酯（ＴＰＰ）和杀虫脒与溴氰菊酯混用后的增效效果。结果表明：（１）淡色库蚊各发育阶段对溴氰菊酯的抗性水平，在敏感品系由高至低依次为中期、晚期、早期成虫、Ⅳ龄、Ⅲ龄和Ⅱ龄幼虫；在抗性品系则为早期、中期、晚期成虫、Ⅳ龄、Ⅲ龄和Ⅱ龄幼虫。（２）ＰＢ和杀虫脒均有明显增效作用，提示抗性可能与氧化代谢增强和靶标部位不敏感有关。其中似乎幼虫阶段以氧化代谢增强为主要抗性机制；在成虫阶段。

基于大纲的数据流自适应聚集算子的实现

采用基于大纲的数据流自适应聚集算子的批处理(Batchingprocessing)算法处理数据流,Batching算法能够随着流速的变化动态调整自己的执行策略,以便更好地利用有限的系统资源提供尽可能好的查询质量,并且可以在Batching算法的基础上根据不同的流聚集算子提出相应的优化算法,进一步提高查询质量并真正达到或接近实时查询。实验结果已在北大Argus数据流管理系统中得到成功应用。

MCVD工艺沉积温度对有源光纤掺杂浓度的影响研究

以掺镱双包层光纤为例,主要介绍了用MCVD工艺及溶液掺杂法制备掺稀土离子有源光纤,通过对低温沉积疏松芯层时温度控制对最终研制的有源光纤镱离子掺杂浓度的影响研究,得出沉积温度对有源光纤掺杂浓度影响的规律,为目前国内普遍采用的MCVD工艺结合溶液掺杂技术制备掺稀土离子有源光纤提供了参考。

胸腔积液患者ADA、CRP和CEA水平检测及其临床意义

目的探讨腺苷脱氨酶(ADA)、C反应蛋白(CRP)和癌胚抗原(CEA)水平检测在胸腔积液鉴别诊断中的价值。方法对125例胸腔积液患者(其中恶性21例、结核性88例、炎性16例)的临床资料进行回顾性分析,并对各组的ADA、CRP和CEA水平进行比较。结果 ADA在结核性和炎性胸腔积液组中明显升高,在恶性胸腔积液组中不升高(P<0.05),结核性和炎性胸腔积液组之间差异无统计学意义(P>0.05);CRP含量在炎性组和结核组中均升高,恶性组升高不明显,与恶性组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);CEA含量恶性胸腔积液组明显高于结核性和炎性胸腔积液组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 ADA、CRP和CEA联合检测在胸腔积液的鉴别诊断中具有较高的临床价值。