猪c-Myc蛋白多克隆抗体的制备

【目的】克隆猪c-Myc基因CDS序列并构建其原核表达载体,同时纯化c-Myc蛋白并以此为抗原制备多克隆抗体,为进一步研究猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)Rep蛋白与宿主c-Myc蛋白之间的交互作用奠定基础。【方法】根据猪c-Myc全基因序列(GenBank No.NM_001005154)设计引物,以反转录PCR方法扩增c-Myc基因CDS序列,经Nde I/Xho I双酶切后定向克隆至原核表达载体pET-30a(+);转化至Arctic-Express^(TM)大肠杆菌后诱导表达;表达产物经变性、复性和His-Band Ni+层析柱亲和纯化后免疫新西兰白兔。抗原亲和层析法纯化抗体后,用间接ELISA法测定其效价,用Western blot检测其特异性。【结果】经检测,克隆产生的猪c-Myc基因CDS序列长度为1359 bp,c-Myc-His重组蛋白主要以包涵体形式出现,分子质量约为63 kDa,由此蛋白制备的多抗效价可以达到1∶1093500,并能特异性识别猪c-Myc蛋白和重组蛋白c-Myc-His。【结论】本研究成功制备了猪c-Myc蛋白多克隆抗体,为研究猪c-Myc蛋白功能和其与PCV2 Rep蛋白之间的相互作用奠定了良好基础。

猪圆环病毒2型复制酶蛋白的胞内互作蛋白研究进展

猪圆环病毒2型(Porcine circovirus virus type 2,PCV2)是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)以及其他猪相关疾病的主要病原体。复制酶(Replicase,Rep)蛋白是由PCV2 ORF1基因编码的功能性复制启动蛋白,通过与ORF1编码的另一复制相关蛋白Rep′共同作用参与PCV2的DNA滚环复制。Rep蛋白作为PCV2的一种必需功能性蛋白,是研究PCV2抗病毒治疗的一个新突破口。然而,目前有关PCV2致病机理及疫苗的研究大多集中在Cap蛋白,对于Rep蛋白的作用机制研究较少。因此,本文结合国内外近年研究进展,对PCV2 Rep蛋白的胞内互作蛋白进行了系统分析,尤其对现今已发现的8种胞内互作蛋白在PCV2复制过程中可能发挥的重要作用及机制进行了阐释,并对其他可能与PCV2 Rep蛋白存在相互作用的胞内蛋白进行预测,以期为进一步阐明Rep蛋白在PCV2致病中的作用提供理论依据。

微量元素硒增强动物机体免疫力的机制研究进展

硒(Se)是人和动物必需的微量元素。研究表明,硒能够促进动物繁殖生长,而且能够提高动物机体免疫力,对畜牧业有重要影响。本文综述了微量元素硒对动物免疫器官、免疫细胞、免疫分子的影响及机制,旨在为探究硒对动物机体免疫力的影响及富硒食品、含硒药物、富硒保健品等硒产品的研发与推广提供理论参考。