β-肾上腺素受体调节蛋白及其功能

血管疾病成为威胁人类健康头号杀手,心血管受体在心血管疾病的发生、发展及预防和治疗中具有举足轻重的地位。β-肾上腺素受体作为G蛋白偶联受体家族的成员,是心血管药物最重要的靶点之一。β-肾上腺素受体阻滞剂被认为是继洋地黄后药物防治心脏疾病的最伟大突破,其在心血管领域的研究和应用一直是被关注的热点。2012年度诺贝尔化学奖再次授予了β-肾上腺素受体的研究。随着研究的深入,人们发现β-肾上腺素受体接受着细胞内调控蛋白的精密调控,不同调控蛋白介导着受体不同的生理信号通路和病理性信号通路。基于这些发现,近年来提出了受体功能选择性的配体药物,这也将成为未来药物的研究方向。本文综述了β-肾上腺素受体调节蛋白及相关信号通路及功能。

14-3-3/HIP-55复合体增强HIP-55蛋白稳定性

目的:用双分子荧光互补及免疫共沉淀技术验证HIP-55与14-3-3在HEK293细胞中存在相互作用,并进一步研究其生物学意义。方法:利用GATEWAY系统构建PDEST-N-Venus-HIP-55WT(野生型),PDEST-N-VenusHIP-55AA(突变体S269A/T291A),PDEST-GST-HIP-55WT及PDEST-C-Venus-14-3-3τ重组质粒,利用双分子荧光互补及免疫共沉淀技术检测两者的相互作用,同时应用14-3-3蛋白相互作用抑制肽R18和HIP-55蛋白突变体(HIP-55AA突变体S269A/T291A不能与14-3-3相互作用)作为工具研究两者结合后对嘌呤霉素诱导的HIP-55蛋白表达的影响。结果:外源转入的Venus-HIP-55WT、Venus-HIP-55AA及Venus-14-3-3蛋白能够在HEK293细胞中表达;双分子荧光互补实验结果表明HIP-55与14-3-3存在相互作用,HIP-55蛋白的S269/T291位点介导HIP-55与14-3-3的相互作用;免疫共沉淀技术表明内源性HIP-55与14-3-3存在相互作用;进一步研究发现HIP-55与14-3-3复合体增强HIP-55蛋白的稳定性,保护HIP-55不被降解。结论:14-3-3与HIP-55存在相互作用,14-3-3/HIP-55复合体可以促进HIP-55蛋白的稳定性。

异丙肾上腺素诱导FVB/N小鼠心脏肥大模型的建立

目的:探索异丙肾上腺素(isoprenaline,ISO,非选择性β-肾上腺素受体激动剂)诱导FVB/N小鼠心脏重塑的实验条件。方法:经皮下注射和埋泵控释两种途径给予FVB/N小鼠ISO诱导心脏肥大和纤维化,将每种给药途径的FVB/N小鼠随机分为ISO组和对照组。皮下注射给药途径:ISO组皮下注射ISO 14 d,对照组注射生理盐水;皮下埋泵给药途径:ISO组皮下埋泵控释给予ISO 14 d,对照组做假手术。两种给药途径ISO剂量均为30 mg/(kg·d)。采用心脏重量与胫骨长度比值(心胫比)、小动物超声心动图检测小鼠心室壁厚度等指标衡量心脏肥大程度。使用苦味酸-天狼猩红染色方法检测胶原沉积面积。结果:ISO皮下注射不能诱导FVB/N小鼠明显的心脏肥大和纤维化,且实验终点前有50%小鼠死亡。ISO皮下埋泵控释给药诱导FVB/N小鼠出现显著的心脏肥大,ISO组小鼠心胫比显著高于对照组[(10.60±0.40)mg/mm vs.(7.93±0.19)mg/mm,P<0.001],ISO组小鼠的左心室舒张末期后壁厚度显著高于对照组[(0.87±0.03)mm vs.(0.68±0.06)mm,P=0.0116],但ISO不能引起明显的心脏纤维化,小鼠全部存活。结论:ISO 30 mg/(kg·d)皮下埋微量泵2周可成功诱导FVB/N小鼠心脏肥大模型。

肾上腺素受体介导心脏纤维化模型中核转录因子NF-κB的活化

目的：应用非选择性β肾上腺素受体激动剂——异丙基肾上腺素（isoproterenol,ISO）连续皮下注射7d诱导心脏纤维化模型,并观察此模型中炎症调控核转录因子NF-κB的变化.方法：采用10周龄体重为280 ～320 g的SD大鼠,ISO以0.25 mg/（kg·d）剂量连续背部皮下注射7d诱导心脏纤维化模型.心脏组织切片进行苦味酸-天狼猩红染色观察纤维化,以胶原容量分数进行胶原面积定量统计.应用real-time PCR法检测心脏组织中Ⅰ型/Ⅲ型胶原及炎症因子IL-6的mRNA表达.组织切片进行HE染色观察心脏病理变化.免疫组织化学方法检测心脏组织中NF-κB在细胞内的定位,Western blot法检测心脏组织中磷酸化的NF-κB水平.结果：ISO诱导的心脏纤维化模型中天狼猩红染色面积明显大于对照（control,CON）组,且ISO组的胶原容积分数显著高于CON组（12.01±1.64vs.0.95±0.06,P＜0.001）;ISO组Ⅰ、Ⅲ型胶原的mRNA表达显著高于CON组（Ⅰ型胶原：10.51±0.47vs.0.98±0.02,P＜0.001;Ⅲ型胶原：9.58±1.33 vs.1.02±0.02,P＜0.001）.ISO组心脏组织中可见细胞核增多、聚集,提示可能炎症细胞浸润,且炎症因子IL-6的mRNA表达水平明显增加（1.64±0.18 vs.1.04±0.07,P ＜0.01）.CON组NF-κB主要定位于心肌细胞胞浆中,心肌细胞核中未见NF-κB的定位;ISO组出现明显NF-κB核转位活化,心肌细胞胞浆中的NF-κB较CON组减少,心肌细胞核及间质细胞核均可见明显的NF-κB定位,同时,ISO组心脏组织磷酸化NF-κB的水平明显高于CON组（10.83±2.05vs.1.05±0.27,P＜0.001）.结论：连续7d皮下注射ISO可成功诱导心脏纤维化模型,且此模型心脏组织中活化的核转录因子NF-κB增加.

小鼠心肌缺血再灌注损伤模型制备及心肌梗死面积评价方法学比较

目的对小鼠心肌缺血再灌注损伤模型制备及心肌梗死面积评价方法进行比较。方法40只雄性BAB/c小鼠按完全随机设计方法分为传统方法组和改良方法组,传统方法组的心肌再灌注操作采用再次开胸、松开结扎线的方法,改良方法组的心肌再灌注操作为在体外松开结扎线,无需再次开胸。采用伊文思蓝-TTC双染色方法区分缺血再灌注损伤后心肌的梗死区(IA)、缺血危险区(AAR)和左心室总面积(LV)。同时采用传统算法和质量权重法计算心肌梗死面积,质量权重法即在传统算法的基础上,用切片中各区域面积乘以该片心肌质量的百分比,累加各切片的相应区域面积,再计算百分比。结果无论采用哪种算法,传统方法组与改良方法组心肌梗死面积(IA/AAR)差异无统计学意义(传统算法:传统方法组44.43%±2.28%,改良方法组44.24%±1.68%,P=0.96;质量权重法:传统方法组51.74%±2.26%,改良方法组54.51%±1.14%,P=0.23)。与传统方法组相比,改良方法组术后存活率高、麻醉剂使用剂量小、苏醒时间短(均为P<0.05)。此外,采用质量权重法计算AAR/LV、IA/AAR数据的标准差显著小于传统算法(AAR/LV:传统算法标准差2.90,质量权重法标准差1.24;IA/AAR:传统算法标准差2.22,质量权重法标准差:1.00)。结论与传统方法相比,改良方法能够更加稳定、有效地制备小鼠心肌缺血再灌注模型。此外,采用质量权重法计算的心肌梗死面积数据比传统方法准确性更高。

雌激素对大鼠心内神经节血管内皮生长因子表达的影响

目的:用免疫组织化学方法观察成年雌性大鼠,卵巢摘除组大鼠,卵巢摘除后17beta雌二醇肌肉注射组大鼠的心内神经节血管内皮生长因子(VEGF)的表达及变化。方法:免疫组织化学染色。结果:①各组大鼠心内神经节均存在VEGF表达阳性神经细胞;②卵巢摘除组大鼠心内神经节VEGF阳性神经元明显减少,表达明显减弱(P<0.05)。结论:心内神经节细胞表达血管内皮生长因子(VEGF);雌激素可能影响心内神经节VEGF的表达。

心房利钠肽前体中间片段在呼吸困难的老年患者中对射血分数保留的心力衰竭的诊断价值

目的:探讨心房利钠肽前体中间片段(MRpro-ANP)在呼吸困难的老年患者中,对射血分数保留的心力衰竭(HFpEF)的诊断价值。方法:选取2018年05月至2020年10月,在我院诊治的以呼吸困难为临床表现的老年患者,分析所有的临床资料,按照入排标准,纳入临床确诊为HFpEF和非心力衰竭两组,分析BNP与MR-proANP对HFpEF的诊断价值,分别做ROC曲线,并比较曲线下面积(AUC),分析两者对HFpEF的诊断价值。结果:共纳入患者352例分析,平均年龄(73.3±7.4)岁,分为HFpEF组142例和非心力衰竭组210例,年龄、高血压和2型糖尿病是发生HFpEF的主要因素,HFpEF组按照纽约心脏病协会(NYHA),分为Ⅱ-Ⅳ级,各级血清BNP与MR-proANP均高于非心力衰竭组,且两者升高的程度均与NYHA分级程度相关;ROC曲线分析显示,MR-proANP对HFpEF的诊断ROC曲线下面积AUC高于BNP,两者联合检测诊断价值高于单独检测(P<0.05)。结论:MR-proANP在呼吸困难的老年患者中对HFpEF的诊断价值较BNP有优势,两者联合诊断价值优于单独诊断。

β2-微球蛋白与老年慢性心力衰竭患者预后关系的研究

目的探讨β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2-MG)对老年慢性心力衰竭患者预后的预测价值。方法选择2015年11月至2018年12月在北京老年医院心血管内科住院的185例慢性心力衰竭患者为研究对象,回顾性收集患者的相关病历资料,包括一般资料、检查及治疗结果,并记录相关数据。中位随访时间为25个月(95%置信区间[CI]为19~31),以全因死亡为随访终点。根据随访结果对比不同预后患者β2-MG水平,通过受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线计算β2-MG的临界值,以Kaplan-Meier法绘制生存曲线,并以Log-Rank检验对生存时间进行分析。结果185例患者中男98例,女87例,年龄为28~96岁,平均(73.8±11.9)岁;121例患者出现全因死亡,64例患者存活。死亡组患者血清β2-MG水平显著高于存活组[(8.4±7.6)mg/L比(4.2±2.7)mg/L,P<0.001]。ROC曲线分析结果显示:β2-MG对慢性心力衰竭患者不良预后的最佳预测临界值为5.065 mg/L,灵敏度为80.6%,特异度为55.9%,曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.734,95%CI为0.658~0.810。根据ROC分析结果将患者分为2个亚组:β2-MG≥5.065 mg/L组(81例)和β2-MG<5.065 mg/L组(104例)。Kaplan-Meier单因素分析法显示,β2-MG≥5.065 mg/L组中位生存时间为(16.0±2.5)个月,β2-MG<5.065 mg/L组中位生存时间为(38.0±6.6)个月(P<0.001)。结论慢性心力衰竭患者血清β2-MG水平≥5.065 mg/L时预后较差,患者生存时间显著低于血清β2-MG水平<5.065 mg/L者,该指标可作为慢性心力衰竭患者的预后预测因子。