枸杞籽油对亚急性衰老大鼠睾丸Nrf2/ARE通路和氧化损伤的影响

目的探索枸杞籽油对亚急性衰老大鼠睾丸Nrf2/ARE通路和氧化损伤的影响。方法将60只8周龄♂SD大鼠中的50只(空白组10只)颈部皮下注射D-半乳糖125 mg·kg^(-1),持续8周建立亚急性衰老大鼠模型,β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,β-gal)观察衰老细胞,HE观察睾丸形态,ELISA检测血清中睾酮(testosterone,T)、促卵泡激素(follicle stimulating hormone,FSH)和黄体生成素(luteinizing hormone,LH)及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)的水平,免疫组化和Western blot检测衰老、氧化损伤和Nrf2/ARE通路相关因子表达。结果模型鉴定成功后,经枸杞籽油干预,改善了睾丸形态,下调β-gal和γH2AX表达;升高血清中SOD、GSH以及T、FSH水平及降低MDA和LH水平(P<0.05);上调睾丸组织Nrf2、GCLC、NQO1和SOD2蛋白表达水平(P<0.05)以及支持细胞中Nrf2核表达。结论枸杞籽油激活亚急性衰老大鼠睾丸Nrf2/ARE信号通路表达,降低其氧化损伤,改善其激素水平。

超声冲击处理焊接接头疲劳设计若干问题的探讨

对大量超声冲击处理焊接接头的试验结果进行分析总结,探讨超声冲击焊接接头疲劳设计与原始焊接接头的差异,并得到下述结论：①材料强度对超声冲击方法改善焊接接头疲劳性能的处理效果有一定影响,随着接头材料强度的提高改善效果也越好,因此采用低强钢超声冲击处理焊接接头的疲劳试验结果得到疲劳设计S—N曲线是安全的。②超声冲击处理焊接接头试件S—N曲线的斜率m远大于3(6～23),不能将试验结果硬性规定按m=3．0进行统计处理,推荐取m=10。③经过超声冲击处理后其疲劳强度不再与所外加的平均应力无关,而是随着应力比R的增加,接头所能够承受的疲劳应力幅度有所降低。因此建议采用最大应力对超声冲击处理焊接接头进行疲劳设计。④当采用最大应力对超声冲击处理焊接接头进行疲劳设计时,外载荷中所含平均应力与超声冲击处理焊接接头在FAT(200万次循环次数下的特定疲劳强度,将其定为疲劳级FAT)下的疲劳强度(应力范围)之间．的关系为：F(R)=1．25-0．5R,-1≤R≤0．5。

黄芪甲苷减轻环磷酰胺诱导的早发性卵巢功能不全模型大鼠卵巢炎症反应

目的:研究黄芪甲苷(astragaloside Ⅳ,AS-IV)是否通过抑制核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路降低环磷酰胺(cyclophosphamide,CTX)诱导的早发性卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency,POI)模型大鼠炎症反应。方法:动情周期正常的雌性SD大鼠80只,选取12只为正常对照组,其余68只大鼠用CTX腹腔注射诱导建立POI模型。将模型制备成功的60只大鼠随机分为5组,每组12只,分别为POI模型组、芬吗通组、低剂量AS-IV组、中剂量AS-IV组和高剂量AS-IV组,干预28 d后取样。采用ELISA法测定血清中17β-雌二醇(17β-estradiol,17β-E2)、抗缪勒管激素(anti-Müllerian hormone,AMH)、促卵泡生成素(follicle-stimulating hormone,FSH)和黄体生成素(luteinizing hormone,LH)水平;转录组测序筛选差异表达基因及功能富集;HE染色法观察卵巢组织病理变化并进行卵泡计数;免疫组织化学染色法和Western blot法分别进行p65(胞核)、p-p65和p-IκBα及下游促炎因子IL-6、IL-1β、TNF-α及IL-8的定位表达和相对表达水平检测。结果:用CTX诱导15 d建立的POI模型大鼠动情周期紊乱;与正常对照组相比,POI模型大鼠血清17β-E2和AMH显著降低、FSH和LH显著升高(P<0.01)。经各组相应干预28 d后,与POI模型组相比,中剂量AS-IV组大鼠血清17β-E2和AMH水平升高、FSH和LH水平降低,差异显著(P<0.01)。基于转录组测序结果发现,POI模型组与中剂量AS-IV组有274个差异表达基因,富集在炎症相关功能基因簇。HE染色显示,与正常对照组相比,POI模型组大鼠卵巢组织结构紊乱,初级卵泡和成熟卵泡数目减少,闭锁卵泡数目增多(P<0.01);与POI模型组相比,中剂量AS-IV组大鼠卵巢组织初级卵泡和成熟卵泡数目增多(P<0.01)。芬吗通治疗后初级卵泡数量较模型组没有差异,可见的有腔卵泡数量较模型组增多,但多为闭锁卵泡。与正常对照组相比,POI模型组p65(胞核)、p-p65、p-IκBα、IL-6、IL-1β、TNF-α及IL-8的蛋白表达量显著升高(P<0.05);与POI模型组相比,芬吗通组和中剂量AS-IV组p65(胞核)、p-p65/p65、p-IκBα、IL-6、IL-1β、TNF-α及IL-8的蛋白水平显著降低(P<0.05)。结论:AS-IV可能通过介导NF-κB信号通路抑制卵巢炎症反应,从而改善CTX诱导的POI模型大鼠的卵巢形态结构和功能。

超声疲劳数据采集系统设计

对超声疲劳试验系统进行了技术分析。为了达到在试验过程中能够对数据进行实时采集、实时处理的目的,在采集系统中采用USB进行数据采集和传输,使整个采集系统达到高效、快捷、稳定。

人铁氧还蛋白表达载体构建

目的为了将人铁氧还蛋白(adrenodoxin,FDX)在293T细胞中表达,扩增FDX的ORF,将FDX的ORF插入到哺乳动物细胞表达载体pcDNA的NotI/KpnI,构建表达载体。方法以GeneBank报道的FDX的mRNA序列(NM_004109.5)为模板设计引物,在5'和3'分别引入限制性酶切位点NotI和KpnI,从HepG2的cDNA中扩增FDX的ORF,将FDX的PCR产物和空载体pcDNA3.1用NotI和KpnI双酶切4 h,酶切产物用DNA回收试剂盒回收。将FDX的PCR酶切产物分别连接到空载体NotI/KpnI,连接产物转化DH5α,培养过夜。挑单克隆,用PCR鉴定阳性克隆并测序。结果经1%琼脂糖凝胶电泳和EB染色,观察到一500 bp条带,阳性克隆的测序结果与GeneBank报道的核酸序列一致。结论应用常规分子克隆方法已成功构建了FDX的真核表达载体pcDNA-FDX。

针刺联合脐带间充质干细胞改善卵巢早衰大鼠卵巢储备功能研究

目的观察针刺联合脐带间充质干细胞对卵巢早衰大鼠卵巢储备功能的影响。方法70只雌性SD大鼠随意分为造模组和正常组。造模组大鼠给予去氧乙烯基环己烯(80 mg/kg)腹腔注射,制备卵巢早衰大鼠模型。造模成功后,再将其随意分为模型组、针刺组、干细胞组、联合治疗组,每组12只,剩余12只正常大鼠为空白组。针刺组针刺“关元”“气海”“足三里”;干细胞组在干预的第1、8天,经大鼠尾静脉注入人类脐带间充质干细胞液0.5 mL(细胞数为2.5×106个);联合治疗组进行针刺和尾静脉注入人类脐带间充质干细胞液。干预后,检测大鼠卵巢湿重和卵巢指数;酶联免疫吸附测定检测血清睾酮(T)、雌二醇(E2)、促卵泡激素(FSH)、黄体生成素(LH)和抗米勒管激素(AMH)水平及抗氧化指标丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;HE染色检测各组大鼠卵巢形态结构变化;免疫组织化学法及蛋白质印迹法检测卵巢组织中蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠卵巢湿重、卵巢指数降低(P<0.01);血清LH、T、FSH、MDA水平上升(P<0.05,P<0.01),E2、AMH、GSH、SOD水平下降(P<0.05,P<0.01);HE染色显示卵巢内成熟卵泡减少,闭锁卵泡增多;卵巢组织中Akt、p-Akt、Bcl-2相对表达量下降(P<0.05,P<0.01),Bax相对表达量上升(P<0.01)。与模型组比较,针刺组、干细胞组、联合治疗组大鼠卵巢湿重、卵巢指数上升(P<0.05,P<0.01);血清中的T、FSH水平下降(P<0.05,P<0.01);血清中E2、AMH、GSH、SOD水平上升(P<0.05,P<0.01);HE染色显示卵巢异常情况减少;卵巢组织中p-Akt、Bcl-2阳性表达与蛋白相对表达量上升(P<0.05,P<0.01),Bax阳性表达与蛋白相对表达量下降(P<0.05,P<0.01)。与针刺组和干细胞组比较,联合治疗组卵巢湿重上升(P<0.05),血清T、FSH水平下降(P<0.05,P<0.01),AMH水平上升(P<0.05,P<0.01),Akt阳性表达上升(P<0.05)。与针刺组比较,联合治疗组SOD、GSH水平上升(P<0.01),Bax蛋白相对表达量下降(P<0.01)。与干细胞组比较,联合治疗组血清MDA水平下降(P<0.05)。结论针刺、干细胞和联合治疗对卵巢早衰大鼠均能起到积极治疗作用,均能改善卵巢早衰大鼠卵巢储备功能,促进卵巢颗粒细胞增殖,抑制卵泡凋亡;且联合治疗效果优于单纯针刺和干细胞治疗。

基于Nrf2/HO-1信号通路探讨浓缩当归丸对缓解卵巢功能不全大鼠卵巢氧化应激损伤的影响

目的:探讨浓缩当归丸改善卵巢功能不全大鼠卵巢氧化应激损伤的作用及机制。方法:36只成年雌性SD大鼠,随机分为正常组、模型组、雌二醇(E2)/地屈孕酮片组、浓缩当归丸高、中、低剂量组,每组6只。除正常组外,其余各组大鼠每日腹腔注射乙烯基环己烯(VCD)80 mg·kg^(-1)造模,连续14 d。从第15天起,模型组灌胃生理盐水2 mL·kg^(-1);雌二醇/地屈孕酮片组灌胃芬吗通0.3 mg·kg^(-1);浓缩当归丸高、中、低剂量组灌胃浓缩当归丸2.08、4.16、8.32 g·kg^(-1),每日1次,连续给药28 d。测定大鼠卵巢指数;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中相关激素E2、促卵泡激素(FSH)、卵泡刺激素(FSH)、促黄体生成素(LH)和抗缪勒管激素(AMH)水平,以及血清过氧化物歧化酶(SOD)活性、谷胱甘肽(GSH)含量;硫代巴比妥酸(TAB)法检测血清丙二醛(MDA)含量;苏木素-伊红(HE)染色法观察卵巢形态学变化;免疫组化法(IHC)检测卵巢组织中核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶^(-1)(HO^(-1))、SOD2、SOD1的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测卵巢组织中Nrf2、HO^(-1)、SOD2、SOD1蛋白的相对表达量。结果:与正常组比较,模型组大鼠卵巢中生长卵泡明显减少、卵泡颗粒层排列松散;大鼠体质量、卵巢指数和血清AMH、E2水平显著下降,LH、FSH水平均显著升高(P<0.01);SOD和GSH水平显著下降(P<0.01),MDA水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,E2/地屈孕酮片组和浓缩当归丸各组卵巢指数均明显增加(P<0.05,P<0.01),血清中E2水平明显升高(P<0.05,P<0.01),FSH、AMH、LH水平明显降低(P<0.05,P<0.01);卵巢内生长卵泡数量增多;血清中SOD活性增强,GSH含量升高,MDA含量明显下降(P<0.05,P<0.01);卵巢组织中Nrf2、HO^(-1)、SOD2、SOD1蛋白表达水平明显上调(P<0.05,P<0.01)。结论:浓缩当归丸能够调节血清激素水平,且增加卵巢组织中Nrf2、HO^(-1)、SOD2、SOD1因子的表达,提高卵巢组织抗氧化能力抵抗氧化应激损伤,从而改善卵巢储备功能。

基于NLRP3炎症通路探讨健脾益肾化浊方对多囊卵巢综合征大鼠卵巢功能的影响

目的:探究健脾益肾化浊方(JPYSHZ)改善多囊卵巢综合征(PCOS)卵巢功能的作用机制。方法:将70只SD雌性大鼠随机分为6组,空白组和模型组各15只,二甲双胍组(0.1 g·kg^(-1))、JPYSHZ低、中、高剂量组(1.275、2.55、5.10 g·kg^(-1))组各10只。空白组给予生理盐水(10 mL·kg^(-1))灌胃和普通饲料喂养,其余各组均采用来曲唑(1 mg·kg^(-1))灌胃联合高脂饲料喂养21 d构建PCOS模型,造模结束后,空白组和模型组给与等体积生理盐水灌胃,各药物组给予相应剂量的药物灌胃,共30 d。比较造模前与造模后大鼠体质量和空腹血糖(FPG)变化;苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠卵巢组织形态学改变;酶联免疫吸附测定法(ELISA)监测大鼠血清促卵泡生成素(FSH)、促黄体生成素(LH)、睾酮(T)、抗苗勒管激素(AMH)和雌二醇(E2)水平,并计算LH/FSH;免疫组化法和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠卵巢组织中核苷结合寡聚化域蛋白样受体3(NALP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶-1(Caspase-1)、核转录因子-κB(NF-κB)、白细胞介素(IL)-1β、IL-18和IL-6)蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠卵巢中可见较多囊性扩张的大卵泡,未见优势卵泡、卵泡颗粒层减少且排列松散,黄体数量明显减少;血清T、LH、AMH和LH/FSH明显升高(P<0.05,P<0.01),FSH和E2明显降低(P<0.05,P<0.01);卵巢组织中NALP3、ASC、Caspase-1、NF-κB、IL-1β、IL-18和IL-6蛋白相对表达量均明显升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,JPYSHZ各剂量组和二甲双胍组卵巢组织中可见各级生长卵泡和黄体,囊性扩张卵泡减少,卵泡颗粒层厚度增加,可见成熟卵泡,卵母细胞局部形态完整;血清T、LH、AMH和LH/FSH明显降低(P<0.05,P<0.01),E2和FSH明显升高(P<0.05);卵巢组织中NALP3、ASC、Caspase-1、NF-κB、IL-1β、IL-18和IL-6蛋白相对表达量明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论:JPYSHZ可通过抑制NLRP3炎症小体激活,减少卵巢组织中各炎性因子释放,调节内分泌水平,有效减轻PCOS炎症状态,发挥改善卵巢功能作用。