真核细胞翻译起始因子5A与自然流产相关性的初步研究

目的初步探讨真核细胞翻译起始因子5A(e IF5A)的表达与自然流产的相关性。方法采用免疫荧光染色、real-time PCR和Western blotting技术检测e IF5A-1和e IF5A-2在自然流产模型小鼠、正常生育力对照组小鼠子宫组织以及在自然流产和人工流产蜕膜组织中的表达。结果小鼠子宫组织及人蜕膜组织中e IF5A-1和e IF5A-2均有表达,但e IF5A-1表达水平明显高于e IF5A-2;流产组织标本中e IF5A-1、e IF5A-2mRNA及蛋白水平表达均低于对照组。结论 e IF5A表达下调可能与自然流产的发生和发展有关。

APLP2在子宫内膜癌中的表达及其对预后的预测价值

目的探讨子宫内膜癌中淀粉样肽前体样蛋白2(APLP2)的表达,分析其与各临床参数的相关性。方法通过数据挖掘,分析335例肿瘤基因图谱(TCGA)数据库中的子宫内膜癌RNA-SEQ数据并结合患者的完整生存期信息,采用Kaplan-Meier法分析APLP2表达与子宫内膜癌患者生存之间的关系。采用real-time PCR技术检测正常子宫内膜和子宫内膜癌各30例冰冻组织中APLP2 mRNA的表达情况。应用免疫组织化学法检测88例子宫内膜癌组织和32例正常子宫内膜组织中APLP2蛋白的表达。结果 Kaplan-Meier生存曲线分析表明,APLP2低表达的子宫内膜癌患者整体生存率明显降低(HR=2.87,P=0.002)。实时荧光定量PCR检测结果提示,APLP2 mRNA在子宫内膜癌组织中表达明显低于正常内膜组织(P=0.031)。免疫组织化学结果显示:APLP2蛋白在子宫内膜癌组织中的阳性表达率明显低于正常子宫内膜组织(P=0.025),其表达水平与雌激素受体表达水平相关(P=0.010)。结论 APLP2在子宫内膜癌中起到抑癌基因的功能。APLP2基因可能通过雌激素受体途径起作用。APLP2可能成为子宫内膜癌预后预测及治疗的靶点。

敲减TCF3抑制人子宫内膜基质细胞蜕膜化的研究

目的·探讨转录因子3(transcription factor 3,TCF3)对人子宫内膜基质细胞(human endometrial stromal cell,HESC)蜕膜化功能的影响。方法·用8-溴腺苷3’,5’-环腺苷酸(8-bromoadenosine 3’,5’-cyclic adenosine monophosphate,8-Br-cAMP)和醋酸甲羟孕酮(medroxy progesterone acetate,MPA)方案在体外诱导HESC蜕膜化。用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)沉默TCF3基因,实时荧光定量聚合酶链反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)和Western blotting验证TCF3的敲减效率。RT-qPCR和酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测蜕膜化标志物胰岛素样生长因子结合蛋白1(insulin like growth factor binding protein 1,IGFBP1)和催乳素(prolactin,PRL)的表达水平。Alexa Fluor标记的鬼笔环肽染色检测HESC蜕膜化后及敲减TCF3后细胞形态的变化。将HESC分为3组,分别为未蜕膜化+NC(转染对照siRNA)组、蜕膜化4 d+NC组、蜕膜化4 d+siTCF3(转染TCF3 siRNA)组,进行RNA测序;对测序结果进行聚类分析、京都基因与基因组数据库(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)分析和基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)以探究TCF3调节HESC蜕膜化功能的作用机制,并采用qPCR对测序结果进行验证。结果·在HESC蜕膜化2 d和4 d后,TCF3的表达水平逐渐升高。蜕膜化2 d和4 d,ELISA和RT-qPCR结果均显示敲减TCF3后蜕膜化标志物IGFBP1和PRL的表达水平较NC组下降。鬼笔环肽染色结果表明,蜕膜化后细胞从纤细长梭形结构转变为大而圆的细胞形态,而在敲减TCF3后,细胞形态又恢复成长梭形结构。测序结果表明蜕膜化4 d和敲减TCF3后差异基因主要富集在细胞因子-细胞因子受体通路,GSEA分析验证了这一结果。RT-qPCR结果验证了敲减TCF3调节多种细胞因子的表达,如下调白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL1B)、白细胞介素-1受体1(interleukin-1 receptor type 1,IL1R1)和集落刺激因子1(colony stimulating factor 1,CSF1)。结论·下调TCF3表达可能通过调节细胞因子LIF、IL-6、IL1B、IL1R1和CSF1的表达来抑制HESC蜕膜化。