miR-150-5p缓解肾小管上皮细胞-间质转化及纤维化的作用机制探讨

目的探究miR-150-5p对转化生长因子-β(TGF-β)诱导肾小管上皮细胞间质纤维化的作用及机制。方法利用TGF-β1诱导HK-2细胞构建肾间质纤维化HK-2细胞模型,通过RT-qPCR检测HK-2细胞中miR-150-5p的表达水平;构建的肾间质纤维化HK-2细胞模型转染miR-150-5p mimic和inhabitor后,通过RT-qPCR和Western blot检测各组HK-2细胞中E-cadherin、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Vimentin和Snail的表达;通过RT-qPCR和ElISA分别检测各组细胞及培养液中Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和FN的表达;使用targetscan预测miR-150-5p靶基因,并通过双荧光素酶报告基因实验验证;构建的肾间质纤维化HK-2细胞模型转染miR-150-5p mimic和pcDNA/β-catenin后,通过Western blot和ElISA检测各组细胞中I型胶原蛋白(Col-Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(Col-Ⅲ)和细胞纤连蛋白(FN)的表达。结果在TGF-β1诱导的HK-2细胞中miR-150-5p的表达显著降低(P<0.05);间质纤维化HK-2细胞模型转染miR-150-5p mimic后,miR-150-5p的表达显著升高(P<0.05),E-cadherin mRNA和蛋白表达也显著升高(P<0.05),α-SMA,Vimentin和Snail的mRNA与蛋白表达显著降低(P<0.05);间质纤维化HK-2细胞模型转染miR-150-5p inhabitor后,结果与mimic相反。间质纤维化HK-2细胞转染miR-150-5p mimic后,Col-I、Col-Ⅲ和FN的表达水平显著降低(P<0.05);转染miR-150-5p inhabitor后,Col-Ⅰ、Col-Ⅲ和FN的表达升高(P<0.05)。经双荧光素酶报告验证β-catenin是miR-150-5p的靶基因;间质纤维化HK-2细胞模型共同转染miR-150-5p和pcDNA/β-catenin后,细胞中Col-I,Col-Ⅲ和FN的蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论miR-150-5p通过靶向β-catenin基因,调控TGF-β1诱导的HK-2细胞的上皮间质转化(EMT)过程和细胞外基质(ECM)的积累。

miR-150-5p在枸杞多糖缓解小鼠肾脏纤维化中的作用研究

目的探讨miR-150-5p在枸杞多糖(LBP)抑制小鼠肾脏纤维化过程中的作用。方法21只雌性的Balb/c小鼠随机分成假手术组(只暴露左侧输尿管,不结扎)、模型组(结扎左侧输尿管)和LBP干预组(在模型组的基础上灌胃0.1 mg/g LBP)。通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测胶原蛋白Ⅰ(Col-Ⅰ)、胶原蛋白Ⅲ(Col-Ⅲ)、纤连蛋白(FN)和平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的变化;通过RT-qPCR检测肾脏组织中miR-150-5p的表达;通过生物信息学数据库预测miR-150-5p的靶基因并用RT-qPCR进行验证。结果与假手术组相比,模型组小鼠肾脏湿重以及肾脏指数均显著减小,Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、FN及α-SMA的mRNA表达水平显著升高,miR-150-5p的表达水平显著降低;LBP干预后,小鼠肾脏指数和肾脏湿重均有明显增加,Col-Ⅰ、Col-Ⅲ、FN及α-SMA的mRNA表达水平显著降低,miR-150-5p的表达水平显著上升。通过Targetscan数据库预测miR-150-5p的靶基因,筛选出与肝脏纤维化相关的靶基因总共有2个,分别是Mtmr1和Prickle。验证靶基因Mtmr1和Prickle mRNA的表达情况,结果表明在模型组小鼠肝脏组织中Mtmr1和Prickle的表达显著增加;在LBP干预组小鼠肝脏组织中Mtmr1的表达水平明显降低,Prickle没有显著改变。结论LBP能够调节miR-150-5p的表达并改善肾脏纤维化的作用,其机制可能是通过靶向Mtmr1实现的。

电子输尿管软镜钬激光碎石治疗复杂肾结石137例体会

目的:探讨电子输尿管软镜钬激光碎石术在治疗复杂肾结石中的临床应用价值。方法:回顾分析我院使用奥林巴斯电子输尿管软镜钬激光碎石处理的137例复杂肾结石患者,其中双肾盂肾盏多发性结石68例,孤立肾结石23例,其中孤立肾多发结石10例,孤立肾感染性结13石例,肾盏憩室内结石21例,肾盏嵌顿结石18例,多发性肾乳头黏膜下钙化7例。术中先行输尿管硬镜镜检,留置斑马导丝并放置f12~14输尿管扩张鞘后经鞘或直接沿斑马导丝入镜。软镜进入肾盂后首先镜下观察肾盂及上、中、下各盏并定位结石,根据结石位置选用365μm或200μm光纤,功率选择在0.5~1j、15~30hz范围,以表面蚕蚀、周缘穿孔、中央穿孔等方法将结石完全粉碎至2mm以内,若患者留置输尿管鞘,则以冲水引流、套石蓝取石等方法将结石取出或部分取出。所有患者常规留留置双j管2周,术后第1天拔除导尿管,术后2周拔除双j管,术后4周常规复查泌尿系平片(KuB)或双肾CT平扫,评估结石排净率。残留结石≥4mm为有临床意义的结石残留。结果:本组137例患者116例成功置放输尿管鞘,输尿管镜鞘放置成功率84.67%,进镜成功率100%,术中寻找结石成功率100%。一期手术成功碎石108例,结石均排尽或残余结石<4mm,无需进一步处理。另4例下盏憩室内结石,1例下盏结石,3例肾乳头黏膜下钙化结石/残石均≥4mm,辅助体外冲击波碎石或2期输尿管软镜手术。结论:输尿管软镜特别是最新一代的电子输尿管软镜,视野清晰、微创安全,几乎可以达到所有肾内集合系统所有位置,结合钬激光适合治疗各类复杂肾结石,值得临床推广。