基因工程重组大肠杆菌发酵生物量产出的影响因素评估

大肠杆菌因为生长速度快,易于培养,代谢可塑性强,拥有丰富的遗传和基因工程工具,成为代谢工程和合成生物学的最佳宿主之一[1]。利用重组大肠杆菌的高密度发酵,可以获得较高的生物量和显著提高目的基因表达产物的浓度[2]。但在工业发酵过程中,影响生物量产出的因素非常多,比如培养基的成分(细菌生长所需的营养物质)、发酵过程中生长抑制物的积累、溶氧浓度、培养温度、发酵液的pH值、补料方式以及发酵液流变学特性等[3]。近几年国内有关大肠杆菌高密度培养的文献报道表明,发酵32 h内的菌体密度大概在OD600为79~125[4-6]。

基因工程重组表达血管内皮生长因子的纯化与初步应用

目的血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)可有效促进血管新生和增加血管通透性,是参与多种生理和病理过程的重要因子。通过基因工程重组表达VEGF 165a并进行蛋白纯化,同时建立免疫学活性检测方法,可用于检测开发的生物类似药雷珠单抗的药物活性。方法通过对基因工程构建的rhVEGF 165a工程菌进行均质破菌,得到不可溶的包涵体,并进行包涵体的增溶与变性。通过镍柱亲和层析方法,从尿素溶解的包涵体中有效地复性和纯化rhVEGF 165a。以纯化的rhVEGF 165a建立ELISA分析方法,用于所开发的生物类似药雷珠单抗活性检测。结果纯化后的rhVEGF 165a为天然的二聚体形式,分子量约为40kDa;成功获得纯度达到95%以上的rhVEGF 165a蛋白;间接ELISA结果表明,所研发的生物类似药雷珠单抗与原研雷珠单抗具有相同的药物活性。结论本研究所获得的纯化rhVEGF 165a蛋白以及建立的间接ELISA检测方法,可用于开发的生物类似药雷珠单抗的药物活性分析。