基于PINK1/Parkin途径探究绿原酸对泡沫细胞线粒体自噬-炎症反应的作用机制

目的探讨绿原酸(chlorogenic acid,CGA)通过同源性磷酸酶张力蛋白诱导激酶1(PINK1)/帕金森蛋白(Parkin)信号通路对ox-LDL诱导的泡沫细胞线粒体自噬及炎症反应的调控作用。方法将RAW264.7巨噬细胞分为正常(Control)组、模型(Model)组、CGA低剂量(CGA-L)组、中剂量(CGA-M)组、高剂量(CGA-H)组、CGA-H+Mdivi-1(CGA-H+Mdi)组。油红O法鉴定细胞泡沫化;CCK-8法确定CGA干预浓度;透射电镜观察细胞线粒体结构改变;ELISA检测IL-1β、IL-18、IFN-γ表达;qRT-PCR及免疫荧光标记法检测PINK1/Parkin线粒体自噬通路相关基因及蛋白表达。结果油红O染色显示泡沫细胞模型制备成功。与Model组相比,不同浓度CGA干预后细胞线粒体损伤明显减轻,诱导了PINK1、Parkin、p-Parkin、PHB2、LC3Ⅱ表达,抑制了TOMM20表达,以及降低了IL-1β、IL-18、IFN-γ的表达(P<0.05或P<0.01);与CGA-H组相比,CGA-H+Mdi组细胞线粒体损伤明显加重,抑制了PINK1、Parkin、p-Parkin、PHB2、LC3Ⅱ表达,诱导了TOMM20表达,以及增强了IL-1β、IL-18、IFN-γ表达(P<0.01)。结论CGA可通过调控PINK1/Parkin通路诱导泡沫细胞线粒体自噬以及抑制了促炎因子IL-1β、IL-18、IFN-γ过表达,这可能是CGA抗动脉粥样硬化机制之一。

基于学习通平台的混合式教学模式在“病原生物与免疫学”课程中的应用

文章首先阐述了“病原生物与免疫学”课程教学的痛点,然后论述了基于学习通平台的混合式教学模式在“病原生物与免疫学”课程中的应用,最后说明了基于学习通平台的混合式教学模式在“病原生物与免疫学”课程中的应用效果。

槲皮素通过调控内质网应激信号通路改善非酒精性脂肪肝大鼠肝脏损伤

目的:基于内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)信号通路探讨槲皮素(quercetin,Que)对高脂饲料诱导的非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)大鼠模型的干预作用及其机制。方法:高脂饲料喂养SD大鼠8周建立NAFLD模型,之后随机分为模型组、Que低剂量组(25 mg/kg)和Que高剂量组(50 mg/kg),另设正常饮食大鼠作为正常对照组,给药期间监测大鼠体重、进食量。继续饲养8周后,检测各组大鼠血清中胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein-cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein-cholesterol,HDL-C)、丙氨酸氨基转移酶(glutamic-pyruvic transaminase,ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(glutamic oxalacetic transaminase,AST)以及肝脏组织中TC、TG的含量变化;苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色、油红O染色、马松(Masson)染色观察大鼠肝脏组织的病理学变化;血糖仪检测大鼠血糖值并通过糖耐量试验评估大鼠糖耐量受损情况;酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)试剂盒检测各组大鼠空腹胰岛素水平;实时荧光定量PCR法(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)检测各组大鼠肝脏组织ERS相关基因Bip、Atf6、Atf4、Xbp-1s和Chop的表达变化;Western blot法检测各组大鼠肝脏组织ERS相关蛋白BiP、CHOP、ATF4、ATF6、XBP-1s和XBP-1u的表达变化。结果:实验期间,各组大鼠体重、进食量差异无统计学意义;与正常对照组比较,模型组大鼠血清TG、TC、LDL-C、AST、ALT浓度升高,HDL-C浓度降低(P<0.05);与模型组比较,Que低剂量组大鼠血清TG、TC、LDL-C、AST、ALT浓度降低(P<0.05),Que高剂量组大鼠血清TG、TC、AST、ALT浓度降低(P<0.05)。与正常对照组比较,模型组大鼠肝脏体积增大,重量增加,肝细胞形态明显肿胀且呈空泡化,脂质沉积明显增加,且纤维化区域明显增加,同时大鼠出现胰岛素抵抗和糖耐量受损情况;与模型组比较,以上病理改变在Que低、高剂量组大鼠中有较明显改善。RT-qPCR和Western blot结果显示,与正常对照组比较,模型组大鼠肝脏组织中Bip、Atf6、Atf4、Xbp-1s和Chop mRNA表达显著升高,BiP、CHOP、ATF4、ATF6和XBP-1s蛋白表达显著升高;与模型组比较,Que低、高剂量组大鼠肝脏组织Bip、Atf6、Atf4、Xbp-1s和Chop m RNA表达降低,BiP、CHOP、ATF4、ATF6和XBP-1s蛋白表达也显著降低。结论:Que可以改善高脂饲料诱导的NAFLD大鼠脂代谢异常、糖耐量受损、肝脏脂质沉积以及病理损伤,其机制可能是通过调控ERS信号通路发挥作用。

苗医药发展现状、机遇及面临的挑战发微

苗医药是一种源自中国苗族的传统医学体系,具有悠久的历史和丰富的实践经验。在我国,苗医药得到了广泛的认可和应用。近几年来,科技的飞速发展促使苗医药的研究取得了丰富的成果。这些成果不仅在治疗常见疾病和多发病方面表现出色,也对预防和治疗重大疾病以及保健养生等领域起到了关键作用。同时,苗医药在国际交流与合作中逐渐受到关注,成为我国传统医学的重要组成部分。然而,现代医学的快速发展也使得苗医药在某些方面面临挑战。如何在传承经典的基础上进行创新,以适应现代医学的发展和患者需求。在此,本文对苗医药发展现状、机遇及面临的挑战发表微论,以期为苗医药事业的繁荣和发展提供参考。

基于网络药理学和分子对接探讨黄连解毒汤治疗2型糖尿病的作用机制

目的 通过网络药理学和分子对接探讨黄连解毒汤治疗2型糖尿病的作用机制。方法 首先,根据口服生物利用度和类药性为筛选条件,在TCMSP数据库获取黄连解毒汤的活性成分及对应靶点,运用Swiss Target Prediction数据库进行靶点预测,合并两个数据库所获得的靶点信息,通过UniProt数据库查找对应基因名;其次,在GeneCards、TTD、DrugBank三大数据库中以“type 2 diabetes mellitus”为关键词进行检索,得到疾病靶点;取黄连解毒汤和2型糖尿病的交集靶点、黄连解毒汤的有效成分,利用Cytoscape 3.7.2软件构建成分-靶点网络,并借助STRING数据库对交集靶点进行蛋白相互作用网络分析;然后使用David数据库对交集靶点进行GO富集及KEGG富集分析,最后进行分子对接验证。结果 黄连解毒汤有84个有效成分及859个靶点,疾病靶点1 181个,得到310个防治2型糖尿病的潜在作用靶点,72个活性成分,排名前3的有效成分依次为槲皮素、黄芩苷、巴马汀。通过KEGG富集分析筛选出糖尿病并发症中的AGE/RAGE信号通路,分子对接结果显示槲皮素、黄芩苷、巴马汀与核心蛋白受体RAGE对接良好。结论 黄连解毒汤可能通过槲皮素、黄芩苷、巴马汀等关键成分调控AGE/RAGE信号通路,从而发挥治疗2型糖尿病的作用。

内皮细胞焦亡与动脉粥样硬化的关系及其中药防治研究进展

近年来,动脉粥样硬化作为一种慢性炎症性血管疾病对人类生命产生严重威胁因而成为当代研究热点之一,其发生主要是由于动脉内脂质沉积纤维斑块形成,内皮细胞巨噬细胞等炎性细胞功能障碍导致血管壁硬化血栓形成。与此同时,内皮细胞功能障碍被认为是动脉粥样硬化损伤的始动因素,内皮细胞死亡促炎因子被大量释放加速动脉粥样硬化发展进程。细胞焦亡是近年来细胞死亡方向的研究热点之一,在动脉粥样硬化研究进展中内皮细胞焦亡便是最新热点之一。中药单体或单体有效活性成分都通过发挥自身多靶点、多疗效优势在治疗动脉粥样硬化方面取得了不菲成绩。

葛根散等3首解酒方对急性酒精中毒小鼠Caspase3/8活性的影响

目的探索葛根散等3首解酒方对急性酒精中毒小鼠Caspase3和Caspase8活性的影响。方法以小鼠活动状态和血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天门冬氨酸转氨酶(AST)水平为参考指标,制备急性酒精中毒小鼠模型,分别给予葛根散、石膏汤、葛花解酲汤水煎剂灌胃干预,检测小鼠肝组织Caspase3/8活性。结果 (1)所有造模小鼠出现嗜睡、步态蹒跚、活性减少、身子发抖等状态,模型对照组小鼠血清ALT、AST水平较正常对照组显著升高(P<0.01);3首解酒方一定剂量组实验小鼠血清ALT、AST水平明显降低(P<0.01),且具有剂量差异性。(2)急性酒精性肝损伤小鼠肝组织Caspase3/8活性较正常对照组显著升高(P<0.01);3首解酒方一定剂量组小鼠肝组织Caspase3或/和Caspase8活性较模型对照组显著降低(P<0.01),且具有剂量差异性。(3)Caspase3活性以葛根散大剂量组降低幅度最大,而Caspase8活性则以葛花解酲汤大剂量组降低幅度最大。结论急性酒精中毒小鼠肝组织Caspase3/8活性显著升高,葛根散、石膏汤、葛花解酲汤水煎剂分别对其具有明显抑制作用,这可能是各方抑制肝细胞凋亡、防治酒精性肝损伤的部分机制。

巨噬细胞甘露糖受体结合物筛选模型的初步建立

目的建立巨噬细胞甘露糖受体(MMR)结合物筛选模型,用于筛选以甘露糖受体(MR)为靶标的潜在活性物质。方法将小鼠腹腔巨噬细胞分别与不同浓度的D-甘露糖和D-半乳糖共孵,用流式细胞仪和荧光显微镜检测D-甘露糖和D-半乳糖对Mφ结合异硫氰酸荧光素标记的甘露糖化牛血清白蛋白(M-FITC-BSA)的拮抗作用,优化实验条件,建立MMR筛选模型。结果两种检测方法均显示:随D-甘露糖浓度的上升,M-FITC-BSA标记的Mφ检出率逐步下降(P<0.01),而这种现象在D-半乳糖组中未观察到;当D-甘露糖达到0.080mmol.L-1浓度时,便能明显拮抗Mφ结合M-FITC-BSA(P<0.05或P<0.01)。中药多糖的筛选结果显示:在一定浓度下,黄芪、白术、防风、大枣等中药多糖组分能浓度依赖性地拮抗小鼠腹腔Mφ与M-FITC-BSA的结合(P<0.05或P<0.01)。结论MMR模型对MR结合成分的筛选作用稳定而敏感,对快速筛选中药免疫调节成分、研究中药免疫调节机制具有重要意义。

贵州小型猪胃肠道正常菌群的初步检测

目的检测成年贵州小型猪胃肠内容物和新鲜粪便中正常菌群数量,为相关动物实验提供正常参考值。方法采用滴注接种法,在选择性培养基上需氧或厌氧培养后,定性定量检测胃肠各段菌群。结果经检测,获得了成年贵州小型猪胃肠内容物及新鲜粪便中正常菌群的基本数据。结论贵州小型猪胃肠道正常菌群数量是其相关基础研究和模型应用的重要参考值。

巨噬细胞甘露糖受体模型的初步建立及其在中药复方筛选中的应用

目的:建立巨噬细胞甘露糖受体(MMR)模型,用于筛选中药中以甘露糖受体(MR)为靶标的活性物质。方法:将小鼠腹腔巨噬细胞分别与不同浓度的D-甘露糖和D-半乳糖共孵,用流式细胞仪和荧光显微镜检测D-甘露糖和D-半乳糖对Mφ结合异硫氰酸荧光素标记的甘露糖化牛血清白蛋白(M-FITC-BSA)的拮抗作用,优化实验条件,建立MMR筛选模型;将上述模型用于筛选四物汤等6个复方多糖中的MR结合成分。结果:两种检测方法均显示:随D-甘露糖浓度的上升,M-FITC-BSA标记的Mφ检出率逐步下降(P<0.01),而这种现象在D-半乳糖组中未观察到;当D-甘露糖达到0.080mmol/L浓度时,便能明显拮抗Mφ结合M-FITC-BSA(P<0.05或P<0.01)。复方多糖的筛选结果显示:在一定浓度下,四君子汤、六味地黄汤和玉屏风散多糖组分能明显拮抗小鼠腹腔Mφ与M-FITC-BSA的结合,且具有浓度组间差异性(P<0.05或P<0.01)。结论:MMR模型对MR结合成分的筛选作用稳定而敏感,用于中药MR结合物的筛选,对快速筛选中药免疫调节成分、研究中药免疫调节机制具有重要意义。

基于网络药理学和分子对接探讨青黛防治2型糖尿病的作用机制研究

目的:通过网络药理学和分子对接初步揭示了青黛抗2型糖尿病的作用机制。方法:从中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)中根据吸收和代谢情况选出青黛的有效成分及成分所对应的靶点,将靶点转换成对应的基因,取青黛和2型糖尿病的交集基因做PPI蛋白互作网络图,通过David数据库进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析,最后采用分子对接验证。结果:筛选得到青黛的活性成分9个、交集基因204个,通过蛋白互作分析发现“STAT3、JUN、MAPK3”可能有治疗2型糖尿病的作用,KEGG富集发现,且可能通过positive regulation of transcription from RNA polymerase II promotor、response to drug、positive regulation of gene expression等信号通路进行调控。分子对接结果表明青黛中的Bisindigotin、Indican、Isovitexin等活性成分与“STAT3、JUN、MAPK3”有比较强的结合能力。结论:青黛可能是通过Bisindigotin、Indican、Isovitexin等成分调控positive regulation of transcription from RNA polymerase II promotor等相关信号通路上的STAT3、JUN、MAPK3等基因发挥治疗2型糖尿病的作用。

天花粉及其组份对小鼠NK细胞杀伤活性的影响

目的探讨天花粉及其组份对小鼠NK细胞杀伤活性的影响。方法使用LDH(乳酸脱氢酶 )释放法 ,测定天花粉煎剂、天花粉多糖、天花粉蛋白 (TCS)注射液对小鼠NK细胞杀伤活性的影响 ,进而探讨天花粉及其组份抗肿瘤活性及机制。结果天花粉煎剂 (4g/kg)、天花粉多糖 (2 0 0mg/kg)、TCS注射液 (6mg/kg)能明显提高小鼠NK细胞的杀伤活性 (P <0 0 5 ) ,且具有剂量差异性。结论提示天花粉及其组份具有体内抗肿瘤活性 ,其机制与促进小鼠NK细胞杀伤活性有关。

合欢皮红细胞免疫活性成分及其机制的研究

目的 :摸索合欢皮中红细胞免疫活性成分 ,探讨其活性机制。方法 :采用合欢皮的水提物、乙醇提取物、多糖及皂甙腹腔注射 ,分别观察其对实验小鼠红细胞总数、红细胞ICR及C3bRR、红细胞对白细胞的吞噬促进率、红细胞RFER和RFIR活性、红细胞SOD活性等指标的影响。结果 :合欢皮多糖和皂甙的红细胞免疫活性较强 ,合欢皮水提物和乙醇提取物次之 (P <0 0 5或P <0 0 1)。结论 :合欢皮具有良性调节实验小鼠红细胞免疫功能的作用 ,其活性成分主要是合欢皮多糖和皂甙。

小儿泻停方的抗菌效应及其优化组方研究

目的:对苗族药验方小儿泻停方(由三颗针、黄芩、苦参、五倍子组成)进行体外抗菌效应及优化组方研究,为新药开发打基础。方法:以该方对致病性大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌、白色葡萄球菌的抑制作用为考察指标,运用混料均匀设计法将小儿泻停方组成中的四味药物配制成12种不同比例的复方,通过体外抗菌实验,测试药物抗菌能力,建立回归方程,筛选抗菌最佳组方,并与敏感抗生素进行抗菌效果比较。结果:回归方程通过检验,有意义,可用;苦参、黄芩对Y的贡献不显著,其余两味药以19.56g和5.31g组方时抗菌效果最佳;其优选组方对小儿腹泻的主要病原菌具有良好的抗菌效应。结论:泻停方治疗小儿腹泻可能通过对病原菌的直接杀菌机制;在保证抗菌效应的基础上,可对其药物组成和配比进行调整,实现节约成本、降低毒副反应的目的。

合欢皮醇提物的红细胞免疫效应及体内抗瘤机制研究

本文对合欢皮醇提物的红细胞免疫效应及体内抗肿瘤机制进行了研究 ,结果表明合欢皮醇提物能明显改善红细胞免疫指标 ,增强机体红细胞免疫功能 ,其体内抗肿瘤机制与其对红细胞免疫的促进作用有关 ,且该药对红细胞免疫效应的改善是通过红细胞功能的增强 (非数量的增减 )而实现的 。

中医养生学“卓越医生培养计划2.0”的探究——以贵州中医药大学卓越医生培养实践为例

2018年三部委联合下发《关于加强医教协同实施卓越医生教育培养计划2.0的意见》以来,各大高校在卓越医生培养计划2.0的改革实践上取得了一定成果,目前国内中医养生学专业在“卓越医生培养计划2.0”尚处于初步探索阶段。本研究以贵州中医药大学为例,围绕卓越医生内涵建设、中医养生学“卓越医生”的培养现状及培养实践进行了分析,提出提高人文素养、深化课程改革、健全人才培养体系、完善实践教学体系及创新教学模式等人才培养思路,旨在为中医养生学专业卓越医生培养计划提供借鉴。

小鼠腹腔巨噬细胞模型的优化及其在中药复方筛选中的应用

目的:优化巨噬细胞(Mφ)筛选模型,并应用于四物汤等6个促吞噬组分的筛选。方法:以小鼠腹腔Mφ吞噬中性红的能力作为模型检测指标,考察细胞收集方法、细胞浓度、贴壁孵育时间、培养时间、LPS刺激浓度、中性红浓度、检测波长等因素对检测结果的影响,优化中性红法检测Mφ吞噬功能的实验条件,并用于四物汤等6个复方总多糖中促吞噬活性成分的筛选。结果:本实验条件下,PBS等三种清洗液收集小鼠腹腔Mφ的效率没有显著性差异(P>0.05);Mφ贴壁孵育时间以3h为宜;Mφ加样浓度可选择在2～8×106/ml范围内;LPS在30μg/ml时达到最佳刺激效应;中性红浓度选择0.09%能够满足检测要求;加入中性红后的反应时间以3h的OD值最高;检测波长以520nm时OD值最高。四物汤、四君子汤、六味地黄汤多糖组Mφ吞噬中性红的能力明显高于对照组(P<0.05或P<0.01)。结论:优化中性红法检测Mφ吞噬功能,对筛选中药免疫活性成分具有实用意义。

合欢皮乙醇提取物对荷瘤小鼠IL-2生物活性的影响

目的观察合欢皮乙醇提取物对荷瘤小鼠IL 2生物活性的影响 ,探讨其体内抗肿瘤机制。方法采用EL 4细胞株建立C57BL/ 6小鼠荷瘤模型 ,在不同时间给予合欢皮乙醇提取物腹腔注射 ,观察其对荷瘤小鼠IL 2生物活性的影响。结果荷瘤小鼠造模后给药组IL 2的生物活性明显高于模型对照组 (P <0 0 5 )。结论合欢皮乙醇提取物能对荷瘤小鼠IL 2的生物活性具有显著增强作用 ,提示该药在荷瘤鼠体内的抗瘤活性与其免疫增强作用有关。

贵州小型猪病原生物携带和感染状况的调查

目的检测贵州小型猪病原生物携带和感染状况,为进行微生物与寄生虫控制提供依据。方法采集贵州小型猪封闭群皮毛、分泌物、血液及粪便等标本,采用形态观察、生化反应和血清学方法检测不同部位共36种微生物与寄生虫指标。结果在36种检测指标中,该种群对28种病原生物有不同程度的携带和感染。结论贵州小型猪的病原携带和感染现状是对其进行微生物与寄生虫监测和控制的主要依据。

开展中医药微生态学教学的思考

中医药微生态学作为中西医结合领域的边缘学科,正在发展壮大,并已自成体系,探讨在中医药院校课程体系中,以适当的方式和内容形式开展中医药微生态学教学,具有重要意义。