黄连解毒汤调控NLRP3炎症小体改善动脉粥样硬化的机制研究

目的:探讨黄连解毒汤对小鼠动脉粥样硬化(AS)模型NLRP3炎症小体的调控作用。方法:将ApoE-/-小鼠随机分成空白组、模型组、治疗大剂量组(20 g/kg)、中剂量组(10 g/kg)、小剂量组(5 g/kg)和阳性组(20 mg/kg吡格列酮),每组6只。除空白组外,其他各组均构建AS模型,造模后连续给药6周,检测血清TC、TG、LDL-C、HDL-C含量;HE染色观察主动脉形态学变化;油红O染色评估AS斑块的形态和大小;免疫组织化学技术检测主动脉中NLRP3的含量;ELISA检测血清中TNF-α、IL-18和IL-1β的表达;RT-qPCR检测主动脉组织中IL-1β、Caspase-1、NLRP3、TNF-αmRNA的表达。结果:与模型组比较,用药组小鼠体重明显下降(P<0.05);黄连解毒汤小剂量组和中剂量组主动脉斑块面积显著减少(P<0.05);各剂量组小鼠血清LDL-C、TC、TG和TNF-α、IL-18、IL-1β水平均降低(P<0.05);中剂量组HDL-C含量上调(P<0.05);黄连解毒汤中、大剂量干预后,小鼠主动脉组织中IL-1β、Caspase-1、NLRP3、TNF-αmRNA表达明显下降(P<0.05)。结论:黄连解毒汤可通过调控NLRP3炎症小体的表达,降低小鼠AS模型炎症因子水平,从而发挥抗AS作用。

四妙勇安汤含药血清对ox-LDL诱导的泡沫化巨噬细胞活化与自噬的影响

目的:探究四妙勇安汤含药血清对ox-LDL诱导的泡沫化巨噬细胞活化与自噬的影响,并探讨其抗动脉粥样硬化(AS)的作用机制。方法:灌胃给予SD大鼠不同剂量四妙勇安水煎液制备含药血清。油红O染色观察泡沫化巨噬细胞脂滴变化;CCK-8法观察含药血清对泡沫巨噬细胞活化的影响;ELISA检测炎症性细胞因子IL-6、IL-10和IFN-γ表达;透射电镜观察细胞自噬水平;免疫荧光标记法检测LC3Ⅱ表达;RT-PCR及Western blot检测细胞AMPK/mTOR/p70S6K通路相关因子表达变化。结果:油红O染色显示,ox-LDL干预后胞质内可见大量橘红色脂滴;CCK-8显示浓度30%以下的含药血清干预泡沫化巨噬细胞OD值无明显变化(P>0.05)。与模型组相比,含药血清刺激后,IL-6、IFN-γ表达降低,IL-10表达升高(P<0.05),含药血清组及雷帕霉素组细胞自噬小体形成增加,LC3Ⅱ、AMPK表达提高,mTOR、p70S6K表达降低(P<0.05)。结论:四妙勇安汤含药血清可调节ox-LDL诱导的泡沫化巨噬细胞活化以及AMPK/mTOR/p70S6K信号通路,抑制炎症反应,诱导细胞自噬,可能是其防治AS的作用机制之一。

黄连解毒汤含药血清对ox-LDL诱导的巨噬细胞泡沫化TLR7信号通路的影响

目的:考察黄连解毒汤含药血清对RAW264.7巨噬细胞源性泡沫细胞炎症反应的影响,并通过TLR7/MyD88/NF-κB通路探讨黄连解毒汤抗动脉粥样硬化(AS)的分子作用机制。方法:ox-LDL诱导RAW264.7巨噬细胞构建泡沫细胞模型,制备不同剂量浓度的黄连解毒汤含药血清,并将其作用于泡沫细胞。油红O染色鉴定细胞泡沫化程度;ELISA检测IL-1β、IL-6含量;荧光定量PCR及Western blot测定TLR7/MyD88/NF-κB通路相关mRNA及蛋白表达水平。结果:油红O染色显示ox-LDL诱导后细胞内可见红色颗粒状物明显,提示泡沫细胞模型制备成功。ELISA结果显示,与正常组比较,ox-LDL干预的模型组培养上清IL-1β、IL-6浓度升高;黄连解毒汤干预后细胞IL-1β、IL-6浓度降低(P<0.05,P<0.01);荧光定量PCR及Western blot结果显示,与模型组相比较,黄连解毒汤干预组TLR7、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01)。结论:黄连解毒汤可通过调节TLR7/MyD88/NF-κB通路抑制ox-LDL干预的RAW264.7源性泡沫细胞炎症反应,这可能是黄连解毒汤抗AS的分子机制之一。