固定时间不同的大鼠视网膜血管铺片酶消化技术改进研究

目的探索固定时间不同的大鼠视网膜铺片酶消化方法和消化时间,提高大鼠视网膜铺片质量。方法正常SD大鼠12只,颈椎脱臼法处死后,摘取眼球,随机分3组于4%甲醛溶液中固定2天、3个月及7个月。将固定好的眼球取出,分离视网膜,每例视网膜再随机分为2份,分别行常规胰蛋白酶消化和改进后的蛋白酶K-胰蛋白酶联合消化。消化完全后制备视网膜血管铺片,HE染色,显微镜下观察各级血管形态,直到获得清晰的血管图像为止。结果固定2天、3个月及7个月的大鼠视网膜常规胰蛋白酶消化法所用时间分别为:3%的胰酶消化液10 h、6%的胰酶消化液22 h、9%的胰酶消化液28 h。蛋白酶K-胰蛋白酶联合消化法所用时间分别为:0. 1%的蛋白酶K消化15min,3%胰蛋白酶消化5 h; 0. 1%的蛋白酶K消化15 min,6%胰蛋白酶消化7 h; 0. 1%的蛋白酶K消化20 min,9%胰蛋白酶消化20 h。固定2天、3个月的视网膜在两种消化方法中,成片效果基本相同,血管网铺片完整,各级血管形态、走向清晰,无断裂,血管内皮细胞形态及细胞核均清晰显示,但联合消化法消化的更为彻底几乎无其他组织残留。固定7个月的视网膜,采用单纯胰蛋白酶消化的,存在血管断裂现象,而采用联合消化法的视网膜血管断裂现象优于前者。结论改进后的蛋白酶K-胰蛋白酶联合消化法,优于常规胰蛋白酶消化法,对长时间固定的视网膜消化稳定性较好。

哺乳动物卵母细胞生发泡染色质构型的研究进展

在哺乳动物中,生发泡期(GV期)作为卵母细胞发育的一个重要阶段,决定了其未来的发育走向,而生发泡染色质构型与转录活动、卵泡闭锁状态及体外胚胎发育能力密切相关,近年来已成为研究热点。综述不同哺乳动物卵母细胞在生长和成熟期间其生发泡染色质构型的研究进展。