DCE-MRI评价恩度联合阿瓦斯汀抗肿瘤血管生成疗效

目的:利用动态增强磁共振成像技术(DCE-MRI)评价恩度单独及恩度联合阿瓦斯汀抑制肿瘤血管生成的疗效。方法:将18只人肺腺癌细胞系A549皮下接种裸鼠,随机分成对照组(n=6)、恩度单独给药组(n=6)和恩度联合阿瓦斯汀给药组(n=6)三组,DCE-MRI结合病理学方法评价肿瘤血管生成及其渗透性。结果:给药7天后,对照组肿瘤体积为(0.85±0.25)cm3,恩度单独给药组为(0.37±0.17)cm3,联合给药组为(0.16±0.03)cm3(F=24.455,P=0.000);对照组血管功能参数Ktrans、Kep、Ve及iAUC分别为(0.11±0.03)min-1、(0.67±0.54)min-1、(0.35±0.12)、(13.28±4.25),恩度单独给药组分别为(0.06±0.01)min-1、(0.40±0.25)min-1、(0.31±0.09)、(7.33±3.93),联合给药组分别为(0.04±0.02)min-1、(0.27±0.12)min-1、(0.36±0.19)、(4.29±3.53),给药组Ktrans及iAUC值较对照组明显减小,差异均具有统计学意义(F=15.257,P=0.000;F=8.197,P=0.004);对照组微血管密度(MVD)为(14.24±3.38)条/高倍视野,恩度给药组为(8.88±1.86)条/高倍视野,联合给药组为(6.47±1.78)条/高倍视野,差异具有统计学意义(F=41.305,P=0.000);免疫组化结果显示给药组VEGF呈低表达,对照组呈高表达。结论:DCE-MRI定量参数对评价肿瘤血管生成与病理学结果具有一致性,DCE-MRI具有实时动态、无创等优点,能早期监测肿瘤生长、评价抗肿瘤血管生成药物的疗效。

新型染料IR-808靶向肿瘤近红外荧光成像的体内研究

目的探讨近红外荧光染料IR-808在移植瘤动物模型中特异性的肿瘤靶向示踪作用。方法建立人肺癌细胞系NCI-H460、结肠癌细胞系HCT-116及鼠源肝癌细胞系Hepa 1-6皮下移植瘤裸小鼠模型,未接种癌细胞的裸小鼠作对照。尾静脉注射同等剂量染料IR-808,分别在不同时间点对裸小鼠正常组织及肿瘤组织进行近红外荧光成像,追踪染料在裸小鼠体内的分布,评价其肿瘤靶向作用。结果在未接种的裸小鼠体内,IR-808染料首先在肝脏、心脏聚集,随后信号减弱,48h后基本代谢排出体外;在荷瘤裸小鼠模型体内,IR-808染料注入24h后开始靶向肿瘤,72h后荧光信号仍很稳定;取荷瘤裸小鼠组织进行近红外荧光成像,发现仅肿瘤组织有信号,其他组织无信号。全部实验小鼠状态良好,未见明显毒性反应。结论近红外荧光染料IR-808能特异性靶向肿瘤成像,且信号稳定,无明显毒性,具有重要的应用前景。

293T细胞对介孔二氧化硅纳米材料的摄取研究

目的:研究在脂质体Lipofectamine 2000的介导下,293T细胞对介孔二氧化硅纳米材料(mesoporous silica nanomaterials,MSNs)的摄取变化。方法 :制备和表征MSNs;293T细胞分别与100μg/mL MSNs、MSNs+Lipofectamine2000共孵育,通过透射电镜(transmission electron microscope,TEM)观察及定量分析293T细胞对材料的摄取。结果:TEM、X线衍射及氮气吸附-脱附分析表明,制备的MSNs结构规则、分散性好,尺寸在100 nm左右;TEM定量结果发现,Lipofectamine 2000显著提高了293T细胞对MSNs的摄取,P<0.001。结论:Lipofectamine 2000能提高293T细胞对MSNs的摄取,为MSNs在293T细胞内的生物应用创造了条件。

介孔二氧化硅纳米材料分散性对293T细胞凋亡的影响

目的介孔二氧化硅纳米材料(mesoporous silica nanomaterials,MSNs)的理化性质如分散性会影响细胞摄取率,可能造成细胞凋亡。文中采用体外培养方法观察2种分散性不同的MSNs对293T细胞凋亡的影响。方法制备2种分散性不同的纳米材料MSN-1和MSN-2;透射电镜观察293T细胞对2种材料的吞噬;选择0、100、150、200和250μg/mL共5种浓度与293T细胞体外孵育24 h,流式细胞仪检测细胞凋亡反应。结果与MSN-1比较,MSN-2的分散性较好;293T细胞约吞噬10%的MSNs;与0μg/mL比较,100、150、200、250μg/mL的MSN-1与293T细胞共孵育引起细胞凋亡反应明显(P<0.05),而MSN-2并未引起明显的凋亡反应。结论在一定剂量下,分散性较佳的MSN-2在293T细胞内性能稳定,安全性较高。

新生儿血清胆固醇酯转运蛋白浓度及其与LDL组成的关系

目的分析新生儿血清胆固醇酯转运蛋白（CETP）浓度与LDL组成的关系，以及对血脂、脂蛋白水平的影响。方法采用ELISA法测定40例脐带血CETP浓度，并与80例健康成人比较；用序列超速离心法分离LDL后再用常规方法分析其中TG、CE含量。结果新生儿CETP呈偏态分布、中位数0．20mg／L，范围（0．11-0．49）mg／L，均值（0．25±0．11）mg／L，明显低于成人（2．19±2．04）mg／L（P〈0．0001）；男女间无显著差异[（0．26±0．10）mg／LV8（0．22±0．16）mg／L，P〉0．05]。新生儿血脂、脂蛋白浓度均低于成人，LDL-CE／LDL-TG比值也明显低于成人（1．5V84．7）。结论新生儿血清CETP浓度仅是成人的九分之一，低CETP水平可能是新生儿LDL—CE／LDL—TG比值低的主要原因。

免疫球蛋白游离轻链的测定方法

血清和尿液中免疫球蛋白游离轻链(FLC)是鉴定和监控许多B细胞恶性增殖疾病的重要标记,其测定在临床应用上非常重要。国际上常用的方法主要有两种—电泳法和免疫法,它们在测定的精密性和敏感性上各有优劣。FLC测定方法的关键在于提高其准确性和精密性。该文就FLC常用的几种测定方法和存在的问题进行综述。

外源标记多模态分子成像的研究进展

核素成像、磁共振成像和光学活体成像等医学影像技术与外源标记探针结合,实现细胞及分子水平的靶向治疗,成为当前分子影像学领域研究的热点。文中主要针对现有的分子影像探针及其影像技术作一综述。

近红外荧光染料用于肿瘤检测的初步研究

目的:体内外研究新型近红外荧光染料IR-808对肿瘤的检测作用,并初步探索其潜在的临床应用。方法:体外培养3种人肿瘤细胞(结肠癌细胞系HCT116、肺癌细胞系A549和乳腺癌细胞系MCF-7),与浓度为20μmol/L的IR-808共孵育20 min,以正常人胚肾细胞系293T作为对照;建立乳腺癌皮下瘤动物模型,静脉注射剂量为1 mg/kg的IR-808,24 h后观察体内成像效果;收集1例恶性胸水标本,分别与同等浓度的染料孵育24和48 h,观察其荧光信号的稳定性,并与临床病理结果比较,判断其检测肿瘤细胞的效果。结果:体内外实验证明近红外荧光染料IR-808只靶向肿瘤成像;与胸水共孵育后,IR-808信号稳定,初步证实其能检测到标本中的肿瘤细胞。结论:IR-808具有良好的靶向肿瘤成像的性能,利用此性质可以用来检测临床标本中的肿瘤细胞,具有重要的应用前景。

人源可溶性B淋巴细胞刺激因子在大肠埃希菌中的类泛素蛋白融合表达及鉴定

目的 B淋巴细胞刺激因子(B cell activating factor belonging to the TNF family,BAFF)作为肿瘤坏死因子(tumor necrosing factor,TNF)家族的成员,在B细胞增殖和成熟方面具有重要作用,其缺陷和过表达均能引起机体免疫失衡,诱发自身免疫性疾病,因此获得纯化BAFF蛋白对研究其功能尤为重要。文中采用类泛素蛋白(small ubiquitin-related modifier,SUMO)融合表达系统,构建pET28a/SUMO-BAFF表达载体,经诱导表达和酶切获得纯度较高的人源B淋巴细胞刺激因子(human soluble BAFF,hsBAFF)蛋白,为进一步研究其免疫调节作用奠定了基础。方法 Over-lap PCR方法连接hsBAFF和SUMO基因,构建融合蛋白表达载体pET28a/SUMO-BAFF,测序鉴定后转化至大肠埃希菌,经半乳糖苷诱异剂(isopropul-betaD-thiogalactoside,IPTG)诱导表达和Ni2+-IDA Sepharose CL-6B亲和层析柱纯化蛋白SUMO-hsBAFF,后经SUMO特异性蛋白酶切割和Ni2+-IDA-Sepharose CL-6B亲和层析柱纯化获得hsBAFF蛋白。结果测序证实pET28a/SUMO-BAFF表达载体构建成功,SDS-PAGE与Western blot鉴定获得纯化的融合蛋白SUMO-hsBAFF和经酶切后高纯度的蛋白hsBAFF。结论 SUMO融合表达系统能获得高表达的可溶性目的蛋白,纯化过程简单、高效,为进一步研究蛋白质结构和药物开发奠定基础。

光学活体成像联合MRI在肺癌荷瘤小鼠诊断中的应用

目的 :探讨光学活体成像、扩散加权成像(diffusion weighted imaging,DWI)及动态增强磁共振成像(dynamiccontrast enhanced MRI,DCE-MRI)在肺癌动物模型肿瘤诊断中的应用价值。方法 :将绿色荧光蛋白(green fluorescentprotein,GFP)标记的人肺癌细胞系NCI-H460皮下接种裸鼠(n=6),在接种后第7、12、16天进行光学活体成像,采集荧光信号;随后分别进行DWI及DCE-MRI扫描,获得表观扩散系数(apparent diffusion coefficient,ADC)值及血管功能参数值。结果:在接种后第7天光学活体成像即可检出肿块荧光信号;随着肿瘤体积增大,第12、16天时荧光信号强度增强,肿瘤组织生理功能和代谢水平开始活跃,ADC值及血管功能参数值也有所升高。结论:联合光学及磁共振成像能够评价肿瘤形态、微环境变化及血管功能,为临床肿瘤的诊断与治疗提供重要依据。

动态增强磁共振评价重组人血管内皮抑素抑制人肺癌裸鼠皮下移植瘤的血管生成

目的探讨动态增强磁共振(DCE-MRI)评价重组人血管内皮抑素(恩度)抑制人NCI-H460肺癌裸鼠皮下移植瘤血管生成的可行性。方法 10只人NCI-H460肺癌荷瘤裸鼠,随机分为对照组和实验组,每组各5只。肿瘤接种第10天开始给药,实验组每日腹腔注射恩度0.2ml,对照组每日腹腔注射生理盐水0.2ml。连续给药7天后行DCE-MRI扫描,扫描结束后剖取肿瘤组织行CD34免疫组化染色。结果实验组肿瘤体积为(0.249±0.138)cm3,小于对照组的(0.448±0.096)cm3,差异有统计学意义(P=0.032)。实验组Ktrans、Kep、Ve及iAUC均值分别为(0.052±0.015)/min、(0.334±0.111)/min、0.280±0.191和11.912±7.738,均小于对照组(0.149±0.026)/min、(0.478±0.294)/min、0.558±0.052和36.463±12.534,其中Ktrans、Ve和iAUC两组差异有统计学意义(P<0.05)。实验组微血管密度(MVD)计数为(11.36±4.57)条/高倍视野,明显低于对照组的(20.44±3.46)条/高倍视野(P<0.05)。结论抗肿瘤血管生成药物恩度对裸鼠肺癌皮下移植瘤具有良好的抑瘤作用,DCE-MRI是评价肿瘤血管生成及抗血管生成药物疗效的一种有效手段。

ELISA法检测IgA肾病患者血清β_2-GPI/LDL复合物

目的建立人血清β2-糖蛋白Ⅰ/低密度脂蛋白(β2-GPI/LDL)复合物ELISA检测法,探讨其对IgA肾病的诊断价值。方法建立以抗人β2-GPI抗体为包被抗体、酶标记抗apoB为检测抗体的β2-GPI/LDL ELISA检测法,对50例IgA肾病患者和50例健康对照者检测分析。结果建立的β2-GPI/LDL ELISA检测法灵敏度0.25 U/m l,批内、批间变异系数为5.73%和10.67%,参考范围(0.66±0.17)U/m l。IgA肾病组β2-GPI/LDL水平显著高于对照组[(1.27±0.23)U/m l vs(0.66±0.17)U/m l,P<0.0001]。敏感性86%,特异性为100%。结论β2-GPI/LDL以健康对照组x-+2s即1.0 U/m l为cut off值,对IgA肾病有较高的敏感性与特异性,提示其有潜在的临床诊断价值。

自制肝素亲和柱分离纯化载脂蛋白H及其抗体制备与鉴定

目的:自制肝素-琼脂糖6B亲和柱提纯人血清载脂蛋白H(apoH),免疫制备多克隆抗体,为大量制备与进一步研究做准备。方法:利用间接还原胺化法制备亲和层析柱,并优化反应条件。运用高氯酸沉淀、离子交换及亲和层析从人血清中纯化抗原,制备兔源多克隆抗体。结果:自制亲和柱肝素结合量约5mg/g(介质体积)。纯化的抗原经SDS-PAGE鉴定分子量约50kD,无杂带;16种氨基酸组成分析结果与报道一致。多克隆抗体与购置的国外抗体一样,在进行ELISA与dot-ELISA时与小牛血清白蛋白有交叉反应;但在变性且还原的条件下,Western blot结果显示无交叉反应。结论:自制亲和柱成本低、亲和性好、肝素结合稳定,用之分离纯化得到了高纯度apoH;兔多克隆抗体用于检测血清中载脂蛋白H含量时需进一步纯化。

溶液中稳定分散的介孔二氧化硅纳米球的制备及其生物毒性研究

目的介孔纳米材料有望成为一种新型的药物载体应用于药物领域，文中制备在溶液中能稳定分散的介孔二氧化硅纳米球（MesoporousSilicaNanospheres，MSNs）并探讨其生物毒性。方法以十六烷基三甲基溴化铵为模板剂，采用溶胶凝胶法制备MSNs，利用透射电子显微镜、X射线衍射、氮气吸附-脱附仪检测MSNs的物理化学性质；检测MSNs对293T细胞（人胚肾细胞）增殖的影响；观察BALB／c小鼠尾静脉注射20mg／kg和40ms／kg剂量MSNs后肝、脾、肾、心、脑和肺的病理学变化。结果制备的MSNs在溶液中可稳定分散，平均粒径为100nm，具有高度有序的二维六方结构。体外实验结果：50～400μg／ml范围内，MSNs对293T细胞成活率没有影响（P〉0．05）；体内实验结果：40mg／kgMSNs导致BALB／c小鼠肝和肺出现病理变化。结论在溶液中稳定分散的MSNs对293T细胞没有毒性；长时间尾静脉注射高剂量MSNs对小鼠肝和肺有一定程度的损伤，通过控制MSNs的使用剂量与使用周期可以避免对动物组织器官的毒副作用。

丹酚酸A抑制LTEP细胞迁移及对ERK信号转导通路的影响

目的研究丹酚酸A对人肺腺癌细胞株LTEP迁移及ERK信号转导通路的影响。方法以Tanswell小室迁移实验检测丹酚酸A(0、20、40μg/mL)对LTEP细胞迁移抑制率;以蛋白免疫印迹(Western blot)法检测丹酚酸A对LTEP细胞中p-ERK表达的影响。结果与空白对照组相比,Tanswell小室迁移实验显示丹酚酸A对LTEP细胞迁移的抑制作用具有浓度依赖性;Western blot实验提示丹酚酸A对LTEP细胞中p-ERK表达的抑制作用具有时间依赖性。结论丹酚酸A对LTEP细胞迁移有抑制作用可能与抑制ERK信号通路有关。

增强CT及其后处理技术对肾嗜酸细胞腺瘤和嫌色细胞肾癌的鉴别诊断

目的肾嗜酸细胞腺瘤(renal oncocytoma,RO)和嫌色细胞肾癌(chromophobe cell renal carcinoma,CCRC)术前鉴别困难,文中探讨增强CT及其后处理技术对两者的鉴别诊断价值。方法回顾性分析经手术病理证实的8例(9个)RO(RO组)和15例CCRC(CCRC组)患者的CT增强扫描影像资料,并在工作站上采用多平面重建(multi-plannar reformation,MPR)、最大密度投影(maximum intensity projection,MIP)等技术行图像后处理,应用SPSS16.0软件对2种肿瘤的影像学表现进行统计学处理。结果肿瘤的强化形式及中央星状瘢痕在RO组和CCRC组间差异有统计学意义(P<0.05);肿瘤大小、各期的强化程度以及出现辐轮状强化、节段性增强反转等征象的比较,差异无统计学意义(P>0.05);50%(2/4)的辐轮状强化、33%(3/10)的中央星状瘢痕经MPR重建后明确显示。结论肿瘤强化形式和中央星状瘢痕有助于RO和CCRC的鉴别,增强CT及其后处理技术在术前准确评价RO和CCRC的特征、指导鉴别诊断中具有重要价值。

GFP在绿色荧光裸鼠不同组织中的表达及分析

目的研究外源绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,简称GFP)基因在BALB/c绿色荧光裸鼠主要器官组织中的表达及其差异。方法小动物成像系统和RT-PCR方法检测GFP的组织分布以及荧光表达水平情况。结果经活体荧光影像系统观察及PCR方法检测发现GFP可以在裸鼠多个器官组织中表达,其中在胰腺、心脏、全脑、皮肤、睾丸中表达量较高。结论外源绿色荧光蛋白可以在模型动物体内成功表达且稳定遗传,其中在胰腺组织中高表达。

胆管乳头状瘤的影像学表现2例

病例1：患者男,53岁,主因＂反复上腹部隐痛不适并放射至背部3年余,加重2天＂就诊。体检：巩膜轻度黄染。腹部CT：肝右叶胆管扩张,肝门右侧肝管内见不规则软组织密度影,增强后病灶延迟轻度强化。腹部MRI：肝右叶胆管扩张,肝门部胆管腔内见不规则软组织信号影,呈稍长T1等长T2。

腹股沟区原始神经外胚叶肿瘤1例

原始神经外胚叶肿瘤（primitive neuroeetodermaltumour，PNET）是较罕见的由神经脊衍生的高度恶性的神经系统肿瘤，我院收治1例，本文探讨其诊断及治疗。