hB7-1重组腺病毒感染的肿瘤细胞的生物学特性

目的 在完成hB7 1cDNA克隆并成功构建包含hB7 1基因的重组腺病毒rAdexl B7 1的基础上 ,对经rA dexl B7 1感染的B16细胞的体外生物学特性进行了研究。方法 以FACS、电镜等方法观察病毒感染前后B16细胞的变化。结果 ①重组腺病毒经HEK2 93细胞扩增、CsCl纯化后滴度可达 10 1 0 PFU ml,且 2 0MOI的病毒可使 95 %以上的B16细胞被感染。②细胞动力学研究显示 ,rAdexl B7 1对B16的生长及集落形成能力无影响。③FACS结果表明 ,rAdexl B7 1对B16细胞的增殖周期无影响。④扫描电镜及透射电镜结果表明 ,经rAdexl B7 1感染的B16细胞在表面形态及超微结构上出现变化。结论 重组腺病毒rAdexl B7 1对B16细胞的生长动力学无影响 ,对形态学有轻微影响。

hTNF-α重组腺病毒转染人肺腺癌细胞的体外生物学特性及体内抗肿瘤研究

目的:研究携带hTNF-α基因的第二代重组腺病毒对人肺腺癌细胞系Ani973的体外生物学特性的影响,探讨重组腺病毒在体内抗肿瘤作用。方法:将携带有hTNF-α基因的重组腺病毒(rAd-hTNF-α)感染人肺腺癌细胞系,通过细胞生长实验、克隆形成实验、流式细胞分析、形态学检查等观察其对Anip973肿瘤细胞的作用;利用PCR技术对转染后的细胞进行检测并应用ELISA试剂盒检测转染后的细胞TNF-α的分泌量;通过肿瘤局部注射rAd-LacZ,rAd-hTNF-α的方法观察其在小鼠体内的抗肿瘤作用。结果:rAd-hTNF-α经扩增、纯化后,滴度可达10^(10)PFU/ml,在30MOI时,对Anip973细胞的转染率达90％以上。转染的Anip973肿瘤细胞除表面结构和超微结构有轻微变化外,其生长能力、克隆形成率及细胞周期等无明显变化。24h细胞培养上清TNF-α的分泌量为20pg/ml细胞。体内实验表明注射rAd-LacZ,rAd-hTNF-α的小鼠肿瘤生长缓慢,体积明显小于对照组(P<0.05),生存期显著延长。结论:腺病毒介导的细胞因子基因hTNF-α转染的Anip973肿瘤细胞未见明显变化,而体内实验则有明显的抗肿瘤作用。

癌基因治疗中的腺病毒载体的开发和应用(综述Ⅰ)

在基因治疗中,理想的基因转移载体应具备如下的条件:（1）基因转移效率高。（2）容量大。（3）选择性基因转移。（4）受控制的细胞毒性。（5）受调节的免疫原性。（6）易于构建和操作。（7）费用低。（8）安全且易于应用。（9）可被医生及患者接受。 腺病毒（Ad）载体是目前最理想的载体之一,其原因如下:（1）作为真核基因调控模型,Ad载体已被广泛研究并了解了其特性,这是载体开发的坚实基础。（2）Ad载体有中等大小的基因组（平均约36kb）,它适合开发容量大而含有最少病毒序列的载体。（3）它们相当稳定。

人IL-2重组腺病毒转染人肺腺癌细胞的体外生物学特性及体内抗肿瘤研究

目的 :研究感染hIL 2重组病毒的人肺腺癌细胞 (Anip973)的体外生物学特性及小鼠体内抗肿瘤作用。方法 :将携带有hIL 2基因的重组腺病毒 (rAd hIL 2 )感染人肺腺癌细胞系 ,通过细胞生长实验、克隆形成实验等观察其对Anip973肿瘤细胞的作用 ;利用PCR技术对转染后的细胞进行检测并应用ELISA试剂盒检测转染后的细胞IL 2的分泌量 ;通过肿瘤局部注射rAd hIL 2的方法观察其在小鼠体内的抗肿瘤作用。结果 :rAd hIL 2经扩增、纯化后 ,滴度可达 10 1 0 PFU ml,当病毒量为30MOI时 ,对Anip973细胞的转染率达 90 %以上。转染的Anip973肿瘤细胞其生长能力、克隆形成率等无明显变化。 2 4小时细胞培养上清IL 2的分泌量为 2 0pg 1ml 2× 10 5细胞。体内实验表明注射rAd hIL 2的小鼠肿瘤生长缓慢 ,体积明显小于对照组 (P <0 0 5 ) ,生存期显著延长。结论 :腺病毒介导的细胞因子基因hIL 2转染的Anip973肿瘤细胞体外生物学特性未见明显变化 ,而体内实验则有明显的抗肿瘤作用。

重组腺病毒介导IL-2、TNF-α抗肿瘤实验研究

目的 研究腺病毒介导的细胞因子基因hIL 2、hTNF a对人肺腺癌细胞系的生物学特性的影响 ,探讨重组腺病毒的体内抗肿瘤作用。方法 将分别携带有hIL 2基因、hTNF a基因的重组腺病毒 (rAd hIL 2、rAd hTNF a)感染人肺腺癌Anip973细胞系 ,通过细胞生长实验、克隆形成实验等观察其对肿瘤细胞的作用 ;利用PCR技术对转染后的细胞进行检测并应用ELISA试剂盒检测转染后的细胞IL 2、TNF a的分泌量 ;通过肿瘤局部注射rAd hIL 2、rAd hTNF a的方法观察其在小鼠体内的抗肿瘤作用。结果 rAd hIL 2、rAd hTNF a经纯化后 ,滴度可达 10 1 0 PFU ml,当病毒为 30MOI时 ,对Anip973细胞的转染率达 90 %以上。体外转染的肿瘤细胞生长能力、克隆形成率等无明显变化。 2 4h细胞培养上清IL 2的分泌量为 5 0pg 2× 10 5细胞 ,TNF a的分泌量为 2 0pg 2× 10 5细胞。体内实验表明注射rAd LacZ、rAd hIL 2、rAd hTNF a的小鼠肿瘤生长缓慢 ,体积明显小于对照组 (P <0 0 5 ) ,生存期显著延长。结论 腺病毒介导的细胞因子基因hIL 2、hTNF a转染的肿瘤细胞形态学未见明显变化。转染hIL 2、hTNF a基因的肿瘤细胞可表达IL 2及TNF a。rAd hIL 2、rAd hTNF

几种脂肪酸对不同转移能力的人肺腺癌细胞膜脂流动性的影响

脂肪酸是细胞膜正常流动性的主要调节因素之一。不同转移表型癌细胞膜的脂肪酸组成有较大差异,其细胞膜流动性亦有显著差异。但不同脂肪酸对转移能力不同的癌细胞膜流动性的影响如何未见报导:本文应用荧光偏振技术对不同转移表型的人肺腺癌细胞经脂肪酸改造后膜流动性的改变进行了初步研究。

高低转移性人肺腺癌细胞膜脂区流动性的测定及比较

本文应用荧光探剂DPH(1,6-dipheny1-1,3,5-hexatriene)及荧光偏振技术,对高转移性的人肺腺癌细胞系Anip-973及其低转移性的母系AGiY-83a,经S相(S-phase)同步后细胞膜的流动性进行了测定并作了对比分析。结果表明,高转移性的人肺腺癌细胞膜比其低转移性的母系细胞膜具有较大流动性。

重组腺病毒抗小鼠移植瘤生长

目的:研究携带细胞因子基因hIL-2、hTNF-a的重组腺病毒对小鼠移植瘤生长抑制作用。方法:将分别携带有hIL-2基因、hTNF-a基因的重组腺病毒感染人肺腺癌Anip973细胞系,应用ELISA试剂盒检测转染后的细胞IL-2、TNF-α的分泌量;通过肿瘤局部注射重组腺病毒的方法观察其在小鼠体内的抗肿瘤作用。结果:转基因的肿瘤细胞生长能力、克隆形成率等无明显变化。24h细胞培养上清IL-2的分泌量为50pg/2×105细胞,TNF-α的分泌量为20pg/2×105细胞。体内实验表明注射重组腺病毒后小鼠肿瘤生长缓慢,体积明显小于对照组(P<0.05),存活期显著延长。结论:瘤内注射重组腺病毒具有明显抗肿瘤作用。

不同转移表型人肺癌细胞膜磷脂、脂肪酸组成和膜流动性分析

目的探讨肿瘤细胞膜组成及流动性在癌转移中的作用及机制。方法以具有不同转移表型的人肺腺癌细胞系Ａｎｉｐ及ＡＧＺＹ为对象，采用３２Ｐ标记法及薄膜层层析和气相层析技术分析两个细胞系的膜脂及脂肪酸组成，并用荧光偏振技术测定两者的膜脂流动性。结果两者在磷脂和脂肪酸及膜流动性上均有显著不同，转移性较高的Ａｎｉｐ细胞质膜含有较多的磷脂酸（ＰＡ）和磷脂酰肌醇（ＰＩ）及较少的肉豆蔻酸（ｍｙｒｉｓｔｉｃａｃｉｄ），并具有较低的流动性。结论癌细胞的转移能力与膜脂肪酸组成有密切关系。

腺病毒CD-80基因转导B16-F10细胞的体外生物学特征(英文)

目的 探讨含hB7 1基因的重组腺病毒hCD80rAd对B16 F10肿瘤细胞体外生物学特性的影响。方法 以腺病毒为载体 ,将CD80基因导入B16 F10肿瘤细胞后 ,以PCR方法检测基因导入 ,以电镜、FACS等方法观察对其体外生物学特性的影响。结果 重组腺病毒的滴度可达 10 1 0 PFU mL ,2 0MOIsrAd可使 95 %以上的B16 F10细胞被感染。转染CD80基因后 ,B16 F10细胞的生长能力、克隆形成能力等均无变化 ,电镜下 ,细胞表面结构及胞内超微结构有轻微变化。结论 重组腺病毒hCD80rAd可以有效地将hCD80基因导入肿瘤细胞而不会引起明显的生物学特性改变 。

应用TNF基因导入TIL细胞的初步研究

近几年来,用淋巴因子进行肿瘤的过继免疫疗法取得了很大的进展,然而由于淋巴因子进入体内后极易被机体分泌的酶类降解。半衰期较短,因此需要不断地从外界进行补充,而基因重组的淋巴因子价格昂贵,给过继免疫疗法的临床应用带来了一定的问题。1990年9月。

蛋氨酸酶联合顺铂协同抑制人肺腺癌细胞GLC生长作用

目的纯化重组蛋氨酸酶并探讨其联合化疗药物顺铂对人肺腺癌GLC细胞生长的协同抑制效应.方法对原核表达体系pGEX-4T-1-Met/Dh5a菌液破碎后上清过纯化柱(GST)纯化后,采用MTT比色法测定重组蛋氨酸酶与顺铂联合应用对GLC细胞增殖的抑制作用,采用金正均法计算q值判断两药合用是否具有协同作用.结果重组蛋氨酸裂解酶浓度为0.22 mg/mL,纯度达95%,活性为0.568 IU/mg.给药72 h后单用顺铂对GLC细胞抑制率为24.80%,单用蛋氨酸酶抑制率为27.49%,两药合用抑制率为66.80%.q=1.47>1.15,表现出明显协同作用.结论蛋氨酸酶及顺铂均有抑制GLC增殖作用,并且两者联合使用存在协同作用.

hGM-CSF基因的克隆及重组腺病毒的构建

目的采用RT-PCR技术、基因重组技术及脂质体转染技术等克隆得到hGM-CSF基因并获得高滴度重组腺病毒。最终目的是为GM-CSF造血干细胞肿瘤基因治疗提供基础研究准备。方法应用RT-PCR技术从人脐带血淋巴细胞中克隆出hGM-CSF基因,再应用基因重组技术构建含hGM-CSF基因的重组腺病毒载体,进而通过反复转染293包装细胞得到高滴度重组腺病毒。结果克隆出hGM-CSF基因,经测序证实结果正确;得到高滴度的重组腺病毒,提取病毒DNA证实含目的基因。结论用LoxP/Cre体外重组法成功构建了hGM-CSF的复制缺陷型重组腺病毒。

高低转移性人肺腺癌细胞膜磷脂组成分析

癌转移是一极其复杂的生物学过程,国内外研究表明,它与多种因素有关,但与膜脂质代谢的关系,在人癌细胞中,尚未见报导。磷脂是构成生物膜双脂层的基本成份。癌细胞的转移,与膜的性质有关,如细胞的粘附、运动、变形等。为探讨癌转移的分子生物学机制。

高低转移性不同的人肺腺癌细胞膜脂肪酸分析

脂肪酸类是构成生物膜双脂层的非极性部分,在生物膜的功能方面起着重要作用。癌细胞的转移与膜的性质有关,如细胞的粘附、运动、变形等。以前,我们分析了人肺腺癌细胞的磷脂组成,现对该细胞系进行脂肪酸分析比较。

迷迭香醇提取物对肺腺癌细胞增殖的影响及其机制

目的研究迷迭香醇提取物(RE)对人肺腺癌细胞株(AGZY)增殖的影响及其机制.方法采用改良MTT法、集落形成试验检测RE对AGZY生长增殖的影响;采用流式细胞术检测RE对AGZY细胞增殖周期的影响.结果RE为12.5、25、50μg/mL和100μg/mL浓度作用5d对AGZY的抑制率分别为47%、35%、86%和98%,半数抑制浓度IC50为17.8μg/mL;RE为25μg/mL作用AGZY15d,细胞集落形成明显减少,与溶媒对照比较差异有高度显著性;RE在50μg/mL浓度作用细胞5d,流式细胞仪检测到凋亡峰,100μg/mL有明显的凋亡峰出现.结论RE体外明显抑制人肺腺癌细胞株(AGZY)的生长增殖,其对细胞增殖周期的阻滞可能是其抑制细胞增殖的机制之一.

2种重组真核蛋氨酸酶原核体系表达及活性比较

目的构建2种真核L-蛋氨酸γ-裂解酶(MGL1 MGL2)的高效原核表达载体,诱导表达及纯化,比较活性差异.方法通过分子克隆技术构建2种重组表达质粒pGEX-4T-1-MGL1,pGEX-4T-1-MGL2;重组质粒转化感受态大肠杆菌Dh5α,诱导表达纯化蛋氨酸酶.结果构建了高效表达载体pGEX-4T-1-MGL1,pGEX-4T-1-MGL2;pGEX-4T-1-MGL1表达的酶纯度为82.5%,活性为0.505 2 IU/mg,pGEX-4T-1-MGL2表达的酶纯度为81.4%,活性为0.305 2 IU/mg.结论 pGEX-4T-1-MGL1,pGEX-4T-1-MGL2都能表达蛋氨酸酶;pGEX-4T-1-MGL1表达的蛋氨酸酶纯度比较高,酶活性比较高.

人CD80重组腺病毒感染的肺癌细胞的生物学特性

目的 :本文在利用COS/TPC同源重组法高效制备人CD80重组腺病毒的基础上 ,对感染人CD80重组腺病毒的肺癌细胞的体外生物学特性进行研究。方法 :以缺陷型重组腺病毒为载体 ,将人CD80基因导入肺癌细胞 ,利用PCR和琼脂糖电泳对肺癌细胞中人CD80基因进行了检测 ,以FACS、电镜等方法观察分析肺癌细胞被rAd CD80感染前后的变化。结果 :人CD80重组腺病毒经扩增、纯化后 ,滴度可达 10 10 PFU/ml ,当病毒为 30MOI时 ,腺病毒对肺癌细胞Anip973的转染率达 90 %以上。转染rAdCD80的肺癌细胞除表面结构和超微结构有轻微变化外 ,其生长能力及克隆形成率无明显变化 ,rAdCD80对肺癌细胞的增殖周期亦无影响。结论 :以上结果为制备肿瘤疫苗打下基础。

人IL-4真核细胞表达载体的构建与分析

本研究应用牛乳头瘤病毒质粒(BPV-1)构建了一个表达载体pdBHhIL—4。该载体应用SV40启动子,可以有效地启动外源基因的表达,保留了BPV-1的氨基苄青霉素抗性(Amp^R)基因作为筛选标志,经限制性内切酶和Southern杂交分折提示构建是成功的,新的载体不仅促进了IL—4转化和表达,也为其它真核基因在真核细胞的表达提供了工具。

RT—PCR检测基因重组腺病毒感染AGZY表达效率及遗传稳定性研究

目的 研究基因重组腺病毒转染人肺腺癌细胞AGZY后目的基因的表达效率及遗传稳定性。方法以两种rAd分别转染AGZY细胞，RT—PCR半定量检测hIL-2和hGN—CSF基因mRNA表达。结果rAd—hIL-2、rAd—hGM—CSF在人肺腺癌细胞AGZY内的表达量随时间的增长而增加，细胞传代对表达无明显影响。结论rAd—hIL-2、rAd—hGM—CSF可在AGZY细胞内稳定表达外源基因，表达强度不受细胞传代影响。