人骨髓间充质干细胞脑内移植治疗锰中毒模型的可行性

背景:研究证明骨髓间充质干细胞可以治疗中枢神经系统疾病,具有进行自我更新和分化成多种神经细胞类型的功能,而且被证明可以在移植入动物模型脑后成功分化为多巴胺神经元。目的:观察移植的骨髓间充质干细胞对锰中毒大鼠行为学以及脑内多巴胺神经元的影响。方法:通过向SD大鼠腹腔内注射四水氯化锰构建锰中毒大鼠模型,将锰中毒大鼠随机分为骨髓间充质干细胞组和对照组,分别向锰中毒大鼠右侧纹状体内移植5μL第3代人骨髓间充质干细胞悬液或等量PBS。移植1个月后对大鼠进行行为学评分。通过免疫荧光观察骨髓间充质干细胞的分化情况,用ELISA检测大鼠右侧纹状体内多巴胺、脑源性神经营养因子、胶质细胞源性神经营养因子的含量。结果与结论:移植后观察到骨髓间充质干细胞组较对照组行为学评分显著下降。移植后的骨髓间充质干细胞组脑内可见人类特异性细胞核/酪氨酸羟化酶和人类特异性细胞核/胶质细胞源性酸性蛋白双标阳性细胞,而对照组脑内未见此两类双标阳性细胞;骨髓间充质干细胞组多巴胺、脑源性神经营养因子、胶质细胞源性神经营养因子含量与对照组接近。这表明骨髓间充质干细胞可以改善锰中毒大鼠的行为学,可以分化为多巴胺神经元和星形胶质细胞。

《职业性刺激性化学物致慢性阻塞性肺疾病的诊断》标准的德尔菲法专家调研

目的探讨GBZ／T237-2011版《职业性刺激性化学物致慢性阻塞性肺疾病的诊断》标准指标体系在应用中遇到的问题，为新标准修订提供参考。方法采用德尔菲（Delphi）专家调研法，对《职业性刺激性化学物致慢性阻塞性肺疾病的诊断》的6个一级指标（适用范围、诊断原则、诊断指标、处理原则、诊断分级、附录A）及其相应的若干个二级指标的合理性咨询专家意见。结果第一轮德尔菲法结果：适用范围中关于标准适用范围的问题，诊断指标中关于长期职业史问题、吸烟史问题、临床诊断指标问题的合理性均数小于7，变异系数大于0．25，表明专家对原标准中适用范围提出异议；诊断指标中长期职业史问题、吸烟问题过于苛刻给临床诊断带来了困难。第二轮德尔菲法结果：适用范围中扩大职业性刺激性气体范围均数为7，变异系数为0．24，表明专家意见集中，认为可以扩大适用范围；诊断指标中无明确吸烟史、3年工龄均数分别为1．78、3．43（小于7），表明专家意见一致，认为这两个诊断指标不利于职业病临床医师的实践工作，可以考虑去除此类诊断指标；诊断指标中综合考虑吸烟史、吸烟量以包．年衡量、均数分别为7．6l、7．61（大于7），变异系数小于0．25，表明专家意见集中，一致认为可以考虑把这类指标纳入诊断指标体系。结论《职业性刺激性化学物致慢性阻塞性肺疾病的诊断》在实施过程中应采取的改进措施是扩大职业性刺激性气体范围，吸烟问题可以结合临床综合考虑，职业接触史可考虑适当缩减。

锰诱导神经细胞线粒体自噬作用

锰作为人体必需的微量元素，对维持人体生命活动具有重要作用，而锰的过度暴露则对人体有害，主要损伤中枢神经系统，导致神经系统疾病目。在锰矿开采、电焊等行业，工人因长期接触锰烟尘可导致慢性锰中毒。

锰中毒大鼠差异基因功能注释及代谢通路分析

目的 探讨锰中毒差异基因表达的功能分类及代谢通路,为研究锰中毒机制以及基因调控防治锰中毒提供依据。 方法 选取SPF级健康雄性SD大鼠6只,按体重随机分为对照组和实验组,每组3只。实验组大鼠给予25 mg/kg MnCl2 · 4H2O,按0.2 ml/100 g进行腹腔注射,每48 h注射1次;对照组按相同注射剂量注射PBS缓冲液。暴露1个月后,将大鼠麻醉后经心脏采血法处死,冰上取大脑纹状体,提取组织RNA并建立DNA数据文库,采用全基因组测序的方法,筛选锰中毒差异基因并分别进行GO功能富集分析、Pathway富集分析,探讨差异基因可能参与的代谢途径。 结果 大鼠大脑纹状体共检测到18 439条基因,筛选出17个锰中毒差异表达基因,其中10个基因为上调基因,7个基因为下调基因;根据基因功能分析,共筛选出富集程度较高的164条基因功能分支以及26条代谢通路。基因功能较多富集在突触信号、信号传导等功能,其中富集效果最为显著的是行为功能;代谢通路中基因富集较多的通路为胞吞途径、PI3K-Akt通路以及神经活性配体-受体相互作用通路,其中PI3K-Akt信号通路与筛选出的FoxO信号通路及mTOR信号通路有同一差异基因(29517基因)富集,神经活性配体-受体相互作用通路与谷氨酸能突触通路有同一差异基因(24415基因)富集。 结论 锰中毒差异基因可能通过PI3K-Akt信号通路、mTOR信号通路或FoxO信号通路影响锰中毒易感性,并且可能参与行为学的改变。

锰暴露对大鼠空间探索能力的影响

将22只健康雄性SD大鼠(SPF级)随机分为慢性染锰组和对照组,分别腹腔注射25 mg/kg四水氯化锰(MnCl2·4H2O)溶液和等量生理盐水,每48 h注射1次,连续12周。于染锰第12周结束后,连续6 d采用Morris水迷宫试验(空间探索实验)检测大鼠的空间学习记忆能力。结果显示,在定位平台探索试验中,随训练次数的增加,大鼠逃避潜伏期逐渐缩短。第1~5天,组内逃避潜伏期染锰组(F=9920,P<000)、对照组(F=27735,P<000)差异均有统计学意义;逃避潜伏期两组差异无统计学意义(F=0273,P>005)。在空间探索实验中,染锰组大鼠穿环次数、中心活动时间与路程的均值少于对照组,两组差异有统计学意义(P<005)。提示锰暴露会对大鼠的空间记忆能力产生一定影响,记录大鼠的中心活动时间与路程对于探讨其记忆能力具有实用参考意义。

行为学改变对锰中毒大鼠模型的判别分析

目的初步探讨仅通过观察行为学改变对锰中毒大鼠模型的判别作用。方法将24只SPF级雄性SD大鼠按体重随机分为4组,每组6只,分别为对照组、低剂量组(15.0mg/kg)、中剂量组(25.0mg/kg)和高剂量组(50.0mg/kg),染锰3个月,并对其进行行为学评分、肌张力改变、平衡木试验、水迷宫实验几项行为学测试,染锰结束后检测其大脑纹状体酪氨酸羟化酶(Tyrosine Hydroxylase,TH)表达含量,并以对照组大鼠平均水平的30.00%为界划分锰中毒组和非锰中毒组,通过多项行为学指标联合建立判别分析函数。结果锰中毒组大鼠行为学评分、肌张力评分、平衡木评分均高于非锰中毒组(P<0.01),TH表达量锰中毒组低于非锰中毒组(P<0.01);Fisher判别法形成判别函数,符合率为91.67%(22/24),误判率为8.33%(2/24);该判别函数对非锰中毒组和锰中毒组的正确判别符合率均高于85.71%。结论通过行为学评分、肌张力改变、平衡木试验几项行为学测试组合对锰中毒性大鼠模型做判断初步可行。

硬金属粉尘暴露大鼠Th17细胞的表达

采用SPF级雄性大鼠,随机分为四组,硬金属高、低剂量组(各9只)、二氧化硅组(7只)、生理盐水组(7只)。染尘30 d处死大鼠,灌注取肺组织,进行病理组织学观察;大鼠取外周血进行流式细胞术检测Th17细胞比例。结果显示, Th17细胞比例硬金属高、低剂量组与生理盐水对照组比较、硬金属低剂量组与高剂量组比较,二氧化硅组与硬金属高剂量组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。提示大鼠硬金属粉尘暴露后, Th17细胞显著性增高,说明其可能参与了硬金属粉尘的致病作用,对Th17细胞检测可能对硬金属肺病的确定有辅助诊断参考价值。