重组角质细胞生长因子(KGF)的原核表达及优化

[目的]在原核表达系统中进行重组人角质细胞生长因子(KGF)的表达及优化。[方法]选取缺失N端23个氨基酸残基的KGF片段作为目的基因,按照大肠杆菌的密码子偏好性,将其进行密码子优化。使用BL21(DE3)菌株表达KGF(ΔN23)、SUMO融合的SUMOKGF(ΔN23)和Fh8-SUMO融合的Fh8-SUMO-KGF(ΔN23),并测试不同表达温度(37、23℃)对KGF(ΔN23)表达结果的影响。[结果]在BL21(DE3)菌株中,37℃表达时KGF(ΔN23),SUMO-KGF(ΔN23)和Fh8-SUMO-KGF(ΔN23)的表达量都较高,其中可溶性蛋白表达量KGF(ΔN23)<SUMO-KGF(ΔN23)<Fh8-SUMO-KGF(ΔN23)。降低诱导温度为23℃后,3种KGF的表达量都显著降低,但是可溶性蛋白的占比显著提高,均接近100%。[结论]降低诱导温度能够促进KGF的可溶性表达,但是总蛋白的表达水平显著下降;与可溶性标签蛋白融合表达能够提高KGF在37℃表达时可溶性蛋白占比,其中融合Fh8-SUMO标签的KGF表达量和可溶性蛋白占比较高。

自噬在糖尿病肾损害中的作用

自噬是高度保守细胞"自我吞食"的行为,是细胞降解并循环利用自身大分子及器官的途径。自噬不仅有助于肾小球及肾小管稳态的维持,且在糖尿病肾病的发病过程中同样伴随着细胞自噬功能的受损。激活自噬通路或恢复自噬功能可能具有肾脏保护作用。本文综述与糖尿病相关的自噬机制,以增加对此研究方向的前沿知识理解。

慢性肾脏病在社区的筛查和干预——困惑与挑战

目的通过对社区危险人群中慢性肾脏病(CKD)的筛查,反映全科医生在慢性肾脏病防治、管理中面临的困惑与挑战。方法以北京大学医学部社区为单位,2008年5月—2009年10月对本院门诊就医的608例高血压患者给予常规肾功能检查,使用国际通用的MDRD公式计算肾小球滤过率(eGFR),筛查早期CKD,并给予相应的健康教育与健康管理。结果608例高血压患者中,肾功能不同程度受损者共计287例,占47.2%;符合CKD诊断标准者145例,高血压人群CKD的患病率为23.8%。对以往患有高血压而血肌酐正常尚未诊断慢性肾脏病的58例患者,根据MDRD公式计算eGFR<90ml/min,其中eGFR在60～89ml/min者27例(男16例,女11例;尿常规异常者8例);eGFR在30～59ml/min者31例(男10例,女21例;尿常规异常者7例)。这58例患者中合并糖尿病15例。经改变生活方式,并加强对原发病治疗后病情好转23例。结论社区高血压人群的CKD患病率较高,并且有相当一部分患者血肌酐尚在正常范围。如能通过全科医生对此类人群早期筛查,早期干预,同时给予规范的健康管理,将能大大延缓和控制CKD的病情,相应遏制由此产生的巨额医疗资源的消耗,有利于指导治疗、监测病情和改善预后。

腹膜透析患者血尿酸与动脉僵硬度的相关性研究

目的动脉僵硬是心血管疾病的重要危险因素。本研究探讨腹膜透析患者血尿酸和动脉僵硬度的关系。方法采集158名稳定腹膜透析患者的临床和生化数据,测定其颈-股动脉脉搏波速度(CF-PWV)作为动脉僵硬度的指标。结果根据血尿酸浓度,患者被分为4组。在组间有显著性差异的指标有C反应蛋白(CRP)(P<0.05)和CF-PWV(P<0.01)。Pearson相关分析显示,和CF-PWV明显相关的因素包括收缩压(P<0.05)和尿酸浓度(P<0.01)。多元逐步回归分析显示,血尿酸浓度(β=-0.300,P=0.001)和钙磷乘积(β=0.179,P=0.027)是CF-PWV的独立影响因素。结论血尿酸水平和动脉僵硬度有独立的相关关系。血尿酸浓度升高和动脉僵硬度增加有关,可能参与了心血管事件的发生。

不同诊断标准下腹膜透析患者代谢综合征与大动脉僵硬度的关系

目的对腹膜透析患者在不同诊断标准下诊断的代谢综合征与大动脉僵硬度的关系进行研究,从而确定一个最适合腹膜透析患者的标准,同时对影响大动脉僵硬度的因素进行分析。方法选取稳定透析的持续不卧床腹膜透析患者155例,测量颈股动脉脉搏波速度作为大动脉僵硬度的评价指标,用WHO 1999、IDF 2007和ATPⅢ2001三个标准分别诊断代谢综合征,比较不同标准下代谢综合征组与非代谢综合征组脉搏波速度有无差别,并对脉搏波速度的相关因素进行分析。结果用WHO 1999、IDF 2007和ATPⅢ2001标准诊断的合并代谢综合征的持续不卧床腹膜透析患者均比无代谢综合征患者有较高的脉搏波速度(P<0.05)。脉搏波速度与持续不卧床腹膜透析患者的年龄、腰围、收缩压及血糖呈正相关(P<0.05或P<0.01),与血高密度脂蛋白胆固醇呈负相关(P<0.05),它们都是脉搏波速度的独立影响因素。结论无论用WHO 1999、IDF 2007和ATPⅢ2001中任何一个代谢综合征标准,合并代谢综合征的持续不卧床腹膜透析患者大动脉僵硬度均较非代谢综合征患者增加。年龄和代谢综合征中多数因子均是脉搏波速度的独立影响因素。经多方考虑,我们推荐在持续不卧床腹膜透析患者用ATPⅢ标准诊断代谢综合征。

血液透析患者中透析间期体重增加对脉搏波速的影响

目的观察血液透析(hemodialysis,HD)患者中透析间期体重增加(interdialytic weight gain,IDWG)对脉搏波速的影响情况。方法选取北京大学第三附属医院血液透析患者27例,在血液透析结束后以及下一次透析前,分别测量其体重、收缩压、舒张压、细胞外液(extracellular water,ECW)和颈股脉搏波传导速度(carotid-femoral pulse wave velocity,CF-PWV)以评估IDWG及大动脉僵硬度的变化。结果研究人群中,男性患者为12例,女性患者为15例,平均年龄为(61±12)岁。透析间期体重由(62.5±11.2)kg增长至(64.1±11.9)kg(P<0.001)。ECW由(14.0±2.5)L增长至(15.5±3.1)L(P<0.001)。PWV(11.8±1.8)m/s至(10.4±2.0)m/s,(P>0.05)、收缩压与舒张压均未见明显改变。根据IDWG的中位值,患者被分为低IDWG组(n=14)和高IDWG组(n=13),与低IDWG组相比,高IDWG组有较高的体重、ECW和收缩压增长,但PWV的改变(△PWV)仍无统计学意义。Pearson相关分析显示收缩压、舒张压的升高与PWV的增长呈正相关(r=0.554,P<0.01和r=0.537,P<0.01)。以PWV升高或下降为标准,将患者分为PWV下降组(△PWV<0,n=18)和PWV升高组(△PWV≥0,n=9),发现PWV升高组收缩压增加较大(P<0.05),其余指标未见无统计学意义。多元回归分析发现仅有收缩压为PWV的独立影响因素(β=0.039,P<0.005,调整R2=0.268)。分类变量逻辑回归分析,结果同样显示仅有△SBP为PWV升高的独立危险因素(β=0.055,P<0.05),年龄、糖尿病状态和IDWG均被排除在外。结论在透析过程中,IDWG不会导致明显的PWV改变。与年龄、糖尿病状态和IDWG相比,PWV的改变主要受收缩压的影响为主。

胰激肽原酶对糖尿病肾病患者肾功能及血流动力学的影响

目的观察胰激肽原酶(PKK)对老年2型糖尿病肾病患者肾功能及血流动力学的影响。方法将142例老年2型糖尿病肾病患者随机分PKK组和对照组,各71例。对照组接受常规降糖治疗,PKK组在此基础上肌注PKK 40 IU/d,连续使用8周。检测并比较两组治疗前后24 h尿蛋白、尿微量蛋白及肾段动脉收缩期血流峰值速度(Vmax)、舒张末期血流速度(Vmin)及阻力指数(RI)变化值。结果 PKK组24 h尿蛋白、尿微量白蛋白、Vmax、Vmin、RI改善幅度均高于对照组(P均<0.05)。结论 PKK用于老年2型糖尿病肾病患者,可以降低患者24 h尿蛋白和尿微量蛋白水平,且可以改善肾动脉血流动力学指标。

利拉鲁肽抑制高糖诱导足细胞损伤的作用

目的探讨利拉鲁肽抑制高糖诱导足细胞损伤的作用机制。方法培养小鼠肾脏足细胞MPC5,按照培养条件分为对照组(Mock)、高糖组(HG,10、20、30、40 mmol/L)和30 mmol/L D-葡萄糖+不同浓度利拉鲁肽组(1、10、50、100 nmol/L)。干预36h后收集足细胞,RT-PCR检测Grem1 mRNA的表达,免疫印迹检测Nephrin表达。结果给予30 mmol/L葡萄糖作用36 h后,Grem1 mRNA表达明显升高,同时Nephrin表达水平降低(P<0.01)。在高糖条件下给予不同浓度的利拉鲁肽,结果表明利拉鲁肽部分逆转高糖上述作用,且存在剂量依赖性。结论利拉鲁肽可抑制高糖诱导的足细胞损伤。

代谢综合征在腹膜透析患者中的初探

代谢综合征（MS）是心血管病（CVD）的多种危险因素在个体内集结的状态.MS患者CVD患病率及病死率是非MS者的2～3倍,腹膜透析患者又比普通人群CVD发病率明显增高.但腹膜透析人群MS的患病情况、相关因素,与CVD的关系等研究还较少,且目前尚无公认的MS诊断标准,对于腹膜透析患者用哪个标准更合适尚无研究.我们的研究希望解决上述问题.