血清FGF21、Sfrp5、miRNA-21对冠心病经皮冠状动脉介入治疗术后支架内再狭窄的预测价值

目的探讨血清成纤维细胞生长因子21(FGF21)、分泌型卷曲蛋白5(Sfrp5)、微小RNA-21(miRNA-21)对冠心病(CHD)经皮冠状动脉介入治疗术(PCI)后支架内再狭窄(ISR)的预测价值。方法选择商水县人民医院2021年1月至2022年9月间行PCI手术治疗的CHD患者218例为CHD组,同期非心血管疾病的住院患者97例为对照组,比较两组FGF21、Sfrp5及miRNA-21;CHD组术后随访6个月,以是否发生ISR分为ISR组(n=56)及无ISR组(n=162);分析CHD患者行PCI手术后发生ISR的影响因素,分析FGF21、Sfrp5及miRNA-21对ISR的预测价值。结果CHD组FGF21、miRNA-21均高于对照组,Sfrp5水平低于对照组,差异有统计学意义(t=11.196、15.030、13.685,P<0.05);ISR组低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、FGF21、miRNA-21均高于无ISR组,Sfrp5水平低于无ISR组,差异有统计学意义(t=7.093、7.216、6.388,P<0.05),ISR组吸烟、合并糖尿病比率高于无ISR组,差异有统计学意义(χ^(2)=6.015、11.295,P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,LDL-C、合并糖尿病、FGF21、Sfrp5、miRNA-21是CHD患者行PCI术后发生ISR的影响因素(P<0.05);ROC曲线分析显示,FGF21、Sfrp5、miRNA-21三者单独及联合检测预测PCI术后发生ISR的AUC分别为0.772、0.758、0.763、0.905(P<0.05)。结论血清FGF21、Sfrp5、miRNA-21在行PCI手术后发生ISR的CHD患者中表达异常,联合检测三者水平对于预测CHD患者PCI术后发生ISR具有较好的应用价值。

成年大鼠心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的共表达

目的探讨成年大鼠心肌中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的组织学构筑及比例关系。方法采用免疫组织化学、免疫荧光双标记和Western blotting等方法,观察10只成年大鼠心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原的构筑特点;利用图像分析系统对Ⅰ、Ⅲ型胶原进行定量分析。结果Ⅰ型胶原主要表达在心肌细胞群周围和血管外膜,多形成粗纤维,Ⅲ型胶原主要表达于每个心肌细胞周围和血管外膜,主要构成细纤维。免疫荧光双标记显示,粗、细两种胶原纤维均含有Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白。心肌Ⅲ型胶原总含量略高于Ⅰ型胶原。结论由粗细胶原纤维构成的心肌胶原网络是由Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白共同构成,任何一种蛋白改变都可能影响心肌间质的功能。

肾性高血压模型大鼠左心室壁Ⅰ、Ⅲ型胶原网络重建

目的探讨肾性高血压大鼠左心室壁重构过程中Ⅰ、Ⅲ型胶原分布的变化规律。方法采用双侧肾动脉狭窄法制作动物模型,32只SD大鼠随机分为假手术组、术后2周组、术后5周组和术后7周组,利用无创动物血压分析测试仪评价高血压动物模型质量,免疫组织化学、Western blotting和图像分析方法检测各组左心室肌组织Ⅰ、Ⅲ型胶原的改变。结果与假手术组相比,Ⅰ、Ⅲ型胶原网络在术后2周均无明显变化,术后5周心肌细胞及肌束周围Ⅰ型胶原粗细纤维束呈断裂、聚集或部分缺如。心室壁小动脉管壁Ⅰ型胶原鞘不规整,纤维束断裂,胶原聚集或堆积,血管外膜粗纤维束向间质延伸;术后5周组肌细胞周围Ⅲ型胶原粗、细纤维束均出现严重松散或紊乱;血管壁Ⅲ型胶原鞘呈现松散现象。图像分析结果显示:术后5周组与术后7周组相比,Ⅰ型胶原平均吸光度和平均面积比均存在显著差异(P<0.05);Ⅲ型胶原平均吸光度各组间无显著差异(P>0.05),平均面积比术后2周组与术后5周组之间差异显著(P<0.05)。Western blotting检测结果表明,手术5周后Ⅰ型胶原蛋白表达量呈增高趋势,Ⅲ型胶原蛋白表达量呈降低趋势。结论高血压可导致左室壁Ⅰ、Ⅲ型胶原网络发生重建或破坏,血管外膜胶原结构严重受损。

发育和成熟大鼠心室肌细胞α-actinin和myomesin的表达及意义

目的观察发育和成熟大鼠心室肌细胞中α-辅肌动蛋白(α-actinin)和myomesin分布、强度和面积百分比增龄变化,探讨其生物学意义。方法选择胎鼠(孕约19 d)、新生(9 d)、青年(8个月)、老年(14个月)的SD大鼠,采用免疫组织化学技术研究不同年龄段大鼠心室肌细胞中α-actinin和myomesin表达部位和强度差异,用图像分析系统进行定量分析,并进行统计学处理。结果从发育到成熟阶段,α-actinin逐渐由肌浆中均质弥散分布转变为短棒状分布,新生鼠阳性表达强度和面积百分比与其他各组比较差异均有统计学意义(P<0.05);Myomesin表达部位及特点与α-actinin相似,新生鼠表达强度与青年和老年鼠相比差别具有统计学意义(P<0.05),新生鼠阳性面积百分比与其他各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论大鼠心室肌组织发育和成熟过程中,α-actinin和myomesin逐渐由胞浆内弥散分布转变为有规律的点状分布,不同年龄段表达强度和密度不同,这可能与肌组织行使功能和机体血流动力改变相关。

改良大鼠海马透射电镜快速取材方法

目的探讨一种改良的大鼠海马透射电镜(以下简称电镜)快速取材方法。方法16只SD大鼠被随机分为常规灌注固定取材组(常规组)和改良取材组(改良组)。改良组从动物断头处死、颅骨剥离及海马取出方式等操作方面进行了改进,对2组取材时间和取材效果进行比较。结果改良组和常规组平均取材时间分别为(1.27±0.07)min、(21.67±0.88)min,改良组明显短于常规组(P<0.01)。电镜下观察2种取材方法均保证了大鼠海马超微结构完整无损伤。结论改良法缩短了取材时间,提高了取材效率,尤其适用于大批样本量的取材。

“医学生物学电镜技术”研究生课程实验教学方法探索与实践

电子显微镜(以下简称电镜)技术在形态学研究方法中具有不可替代的优势。结合研究生"医学生物学电镜技术"课程教学实践,分析了当前"医学生物学电镜技术"教学现状,介绍了作者在研究生教学过程中的经验和教训,旨在探索适用于高等医学院校"医学生物学电镜技术"研究生课程的教学模式,为研究生培养及学科发展提供参考。

肾性高血压大鼠左心室整合素β1和黏着斑激酶的表达

目的探讨肾性高血压大鼠左心室壁重构过程中整合素β1(integrinβ1)和黏着斑激酶(FAK)的表达变化。方法采用双侧肾动脉狭窄法制作动物模型,40只SD大鼠随机分为假手术组(sham)、术后2周组、术后5周组和术后7周组,血压及左心室重量指数评价造模成功后,取左心室组织,采用HE染色观察心肌细胞的形态变化,免疫组织化学和Western blotting检测各组左心室肌组织integrinβ1和FAK的表达。结果 HE染色结果显示,实验组大鼠左心室组织的心肌纤维走向紊乱,心肌细胞间隙变大;integrinβ1和FAK蛋白分别表达于心肌细胞膜和心肌细胞质近膜区,呈线样或细颗粒状分布;integrinβ1的表达强度在术后随时间呈逐渐上升趋势,至5周组趋于平稳;FAK在2周组的表达强度相对于假手术组明显下降(P<0.01),实验组随术后时间增加表达量增强;Western blotting结果显示,integrinβ1和FAK在各手术组的表达均明显高于假手术组(P<0.01),5周组较2周组下降明显(P<0.01),7周组和5周组差异不明显(P>0.05)。结论 Integrinβ1和FAK在心室肌的表达变化可能是高血压心肌肥厚的重要原因。

肌节骨架蛋白ɑ-actinin和Myomesin-1在肾血管性高血压大鼠心室肌中的表达

目的探讨肾性高血压大鼠左心室壁重构过程中肌节骨架蛋白ɑ-actinin和Myomesin-1的表达变化规律。方法采用双侧肾动脉狭窄法制作动物模型,40只SD大鼠随机分假手术组(control)、术后2周组、术后5周组和术后7周组,血压及左室重量指数评价造模成功后,取左心室肌组织,采用免疫组织化学染色和Western blotting检测各组左心室肌组织ɑ-actinin和Myomesin-1的表达,并进行图像分析和统计学处理。结果ɑ-actinin和Myomesin-1蛋白表达主要呈点状或短棒状表达,在高血压进程中呈现弥散状分布的特点;免疫组织化学和Western blotting结果显示,与对照组相比,术后2周组ɑ-actinin和Myomesin-1蛋白表达均显著增高(P<0.01);在高血压进程中,两蛋白的表达量均随时间增加而下降,组间比较差异具有统计学意义(P<0.05);ɑ-actinin阳性表达区的宽度在高血压进程中呈先降低后升高的趋势,且相邻组间差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论ɑ-actinin和Myomesin-1参与高血压心肌肥厚的发生,提示肌节收缩能力与血压的高低有关。

大鼠左心室内膜超微结构年龄特征

目的探讨大鼠左心室内膜超微结构随年龄变化规律。方法取新生(9日龄)、青年(3月龄)、中年(11月龄)和老年(23月龄)Sprague-Dawley大鼠的左心室内膜组织,体积分数4%戊二醛磷酸缓冲液固定,制作透射电子显微镜(TEM)和扫描电子显微镜(SEM)样品,TEM下观察内皮细胞及内皮下胶原超微结构,SEM观察心肌内皮超微结构。结果随大鼠年龄增长,内皮细胞质膜变得薄而疏松,质膜小泡及突起逐渐减少;内皮下胶原从幼年到中年逐渐增多,排列方向一致;老年大鼠的胶原束排列紊乱松散,大鼠内皮细胞表面皱折增多,细胞核形态变长且排列趋于一致。结论随着年龄的增长,大鼠心内膜组织的超微结构发生明显变化,这与心脏功能的改变以及心脏疾病的发生相关。

心肌细胞株的特性及其在心血管疾病研究中的应用

心肌细胞株是研究心血管疾病发病机制和药物筛选的重要材料,不同的心肌细胞株其生物学特性存在较大差异。在心血管疾病研究中,心肌细胞株的选择与研究结果密切相关。现围绕当前心肌细胞株的生物学特性及其在研究中的应用展开综述,并提出了研究展望,以进一步拓展对于心肌细胞株的认识,为心血管疾病研究提供参考。

钙激活氯通道蛋白ANO1在心肌成纤维细胞分化过程中的表达及其钙激活氯通道电生理特性变化

目的:研究钙激活氯通道蛋白ANO1在心肌成纤维细胞(CFs)向成肌纤维细胞(MFs)分化过程中的表达规律及其电生理特性,探索ANO1在心肌纤维化进程中的作用。方法:以刚分离贴壁的大鼠原代CFs及其分化的MFs为研究对象,利用全细胞膜片钳检测钙激活氯通道电流变化,采用免疫荧光标记技术和Western blot检测ANO1、α-SMA和vimentin在CFs和MFs细胞中的表达特征。结果:刚贴壁培养的CFs钙激活氯通道电流密度远高于MFs;ANO1主要表达于CFs和MFs的细胞核周围及细胞核上,少量表达于细胞膜;ANO1在刚贴壁的CFs中表达较弱,而在有分裂增殖趋向的MFs细胞中表达较为明显。结论:ANO1的表达与MFs的分化过程密切相关,提示其可能参与调节心肌纤维化进程。

氯离子通道蛋白1在心肌纤维化进程中的表达特征

目的探讨氯离子通道蛋白1(ANO1)在心肌纤维化进程中的表达特征,为抑制心肌纤维化寻找新的靶点。方法采用冠状动脉结扎法制作大鼠心肌梗死模型,1周后取心肌梗死组和假手术组大鼠左心室组织,采用免疫组织化学染色、免疫荧光双标记检测梗死区和正常组织ANO1表达的变化;体外分离培养心肌成纤维细胞,采用免疫荧光标记、Real-time PCR和Western blotting检测心肌成纤维细胞中ANO1表达情况。结果制造模型1周后心肌梗死区ANO1表达明显增强,并与α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)共表达; ANO1蛋白明显表达于心肌成纤维细胞的核膜和胞质中,且表达强度和α-SMA具有相同的趋势;与刚分离贴壁心肌纤维细胞相比,ANO1在培养和48h后的心肌成纤维细胞中表达量明显增强。结论 ANO1在心肌成纤维细胞转化为成肌纤维细胞过程中表达量增加,提示ANO1可能在心肌纤维化进程中发挥重要调控作用。

猪流行性腹泻病毒N蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备

本研究旨在采用原核表达系统表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)的核衣壳蛋白(N),并进一步制备其单克隆抗体。将构建重组原核表达质粒pET28a-N转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达重组蛋白,并采用Ni-NTA亲和层析和分子筛进行纯化。将纯化后的重组N蛋白免疫BALB/c小鼠,取小鼠脾脏B淋巴细胞与SP2/0瘤细胞融合,采用间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞株,并对其分泌抗体的特性进行了分析。结果显示:重组质粒pET28a-N在E.coli BL21中高效表达,筛选获得了2株稳定分泌抗N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株1A3和4F6,其分泌的抗体均为IgG1亚型,腹水效价分别为5.12×10^5、1.28×10^5。本研究为进一步研究N蛋白的功能以及建立PEDV免疫学诊断方法奠定了基础。

多媒体技术在动物免疫学教学中的应用与思考

从多媒体在动物免疫学教学中的必要性出发,分析了多媒体的应用优势及存在的不足,并对多媒体在动物免疫学教学中的合理应用进行了探讨。

仔猪回肠绒毛M细胞的形态、分布及其与猪流行性腹泻病毒感染的关系

为了探索新生仔猪回肠绒毛上皮是否存在M细胞以及自然感染条件下猪流行性腹泻病毒(PEDV)与回肠绒毛M细胞之间的关系。采用免疫荧光、免疫组化及形态学方法研究了正常情况下仔猪回肠绒毛M细胞的分布特点和形态学特征,以及自然感染条件下PEDV与仔猪回肠绒毛M细胞之间的关系。免疫荧光结果证实正常仔猪回肠绒毛上皮存在M细胞,沿隐窝至绒毛顶端上皮方向,M细胞的数量逐渐减少。电镜下,正常仔猪的回肠绒毛M细胞具有典型的M细胞特征。自然感染PEDV的仔猪回肠绒毛M细胞病变明显,在其顶膜、细胞质、细胞核及其上皮下层均观察到成簇的PEDV颗粒,而相邻的其他上皮细胞病变不明显,且细胞内没有观察到病毒粒子。以上研究结果表明,新生仔猪回肠绒毛上皮存在M细胞,在绒毛的不同位置其分布比例存在差异。仔猪回肠绒毛M细胞可能是PEDV入侵肠道的重要通道。

大肠杆菌P4 FliC蛋白结构分析及同源建模

为了进一步认识大肠杆菌鞭毛蛋白(Escherichia coliFliC)的结构及功能,深入研究细菌鞭毛的生物学特性,采用生物信息学方法,对组成Escherichia coliP4 FliC蛋白质的理化性质、二级结构及三级结构等进行生物信息学分析,并在三级结构的基础上进行同源建模。理化性质分析结果表明,E.coliP4 FliC蛋白为酸性结构蛋白,与沙门氏菌鞭毛蛋白性质较为接近,二级结构以α-螺旋和随机卷曲为主要构件,其空间结构与Salmonella typhimurium的3a5xA蛋白相似性较高,以此为模板成功构建了可靠的三维结构分子模型。FliC蛋白为多种细菌的鞭毛蛋白,与细菌的运动功能关系密切,本研究为深入研究细菌的运动机制及致病机理奠定基础。

培养细胞超薄切片制备方法改进

目的探讨培养细胞超薄切片的制备方法。方法取肝癌患者手术标本进行原代培养后分为常规组和改良组,比较2组培养细胞的超微结构特征。结果常规组细胞结构模糊,有大量细胞自溶、皱缩和挤压现象。改良法超薄切片显示细胞结构清晰可见,自溶及皱缩现象少。结论改良法能更好地显示细胞的超微结构,是制备培养细胞超薄切片的好方法。

猪胸膜肺炎放线杆菌flic蛋白二级结构与B细胞表位预测

目的:预测和分析猪胸膜肺炎放线杆菌(Actionobacillus pleuropneumoniae,APP)鞭毛蛋白(flic)的二级结构和B细胞表位。方法:利用生物信息学方法对flic基因推导的氨基酸序列进行结构特征和B细胞表位预测分析。结果:flic蛋白为非稳定型脂蛋白,含有2个酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点(39-42 SirD,164-167 SvkD)和3个蛋白质激酶C磷酸化位点(39-41 SiR,161-163 TsR、164-166 SvK)。该蛋白无信号肽,在21Ala^38Ala处存在跨膜区的可能性最大。flic蛋白的二级结构主要由无规卷曲区域、α-螺旋和β-折叠组成,而形成较少的转角结构。该蛋白的B细胞表位可能位于55~61和152~158区段内或其附近区域。结论:预测结果将有助于确定flic蛋白的B细胞表位,为进一步研究flic基因功能及研制APP基因工程疫苗提供参考。

猪胸膜肺炎放线杆菌ApxIIA基因的序列分析及其B细胞表位预测

摘要：为了进一步研究猪胸膜肺炎放线杆菌（Actionobacillus pleuropneumoniae，App）ApxⅡA基因的结构和功能，选取GenBank中6株不同App分离株，采用生物信息学方法对其ApxⅡA基因及其编码氨基酸序列进行同源性比对，并选择其中AY232288．1菌株（湖北分离株）ApxⅡA基因为研究对象，分析该基因所编码蛋白质的理化性质，并对其可能形成的二级结构及B细胞表位进行预测和分析。结果表明，6株不同App分离株ApxⅡA基因核苷酸及氨基酸序列同源性分别为65．56％和88．42％，在AY232288．1菌株ApxⅡA蛋白的肽链中，745—751和801—807区段可能是其B细胞表位优势区。本研究首次利用生物信息学方法对ApxⅡA基因及其蛋白质结构进行了分析和预测，为ApxⅡA基因功能的深入研究及APP多表住疫苗的设计奠定了基础。