Ag85B-ESAT6重组腺病毒肺结核疫苗的遗传稳定性

目的 分析Ag85B-ESAT6重组腺病毒(rADV-Ag85B-ESAT6)肺结核疫苗的遗传稳定性。方法将纯化的重组腺病毒rADV-Ag85B-ESAT6在HEK293细胞上连续传代20次,观察细胞病变情况;PCR扩增及序列比对分析重组腺病毒基因的稳定性;Western blot分析重组腺病毒Ag85B-ESAT6融合蛋白的表达稳定性。结果重组腺病毒rADV-Ag85B-ESAT6引起HEK293细胞病变的速度和形态均未发生明显变化;第10代和第20代重组腺病毒均可扩增出1 322 bp的外源基因片段和860 bp的重组腺病毒特征基因E2b片段,野生型腺病毒引物未扩增出特征条带;Western blot分析表明,第10代和第20代重组腺病毒rADV-Ag85B-ESAT6在相对分子质量约47 000处可见Ag85B-ESAT6融合蛋白表达条带。结论重组腺病毒rADV-Ag85B-ESAT6在体外传代20次,表现出良好的基因结构稳定性。