用聚乙二醇沉淀法粗提纯植物病毒

南方菜豆花叶病毒(SBMV)经两次PEG沉淀提纯的粗提纯病毒制剂和经密度梯度提纯的精提纯病毒制剂,在电镜下均能观察到大量的球状病毒,且均具有典型的核蛋白吸收图谱。两种方法提纯的病毒制剂免疫家兔,都能制备出效价高达1/1024(免疫双扩散法)的抗血清。此外,烟草花叶病毒(TMV),黄瓜花叶病毒(CMV),马铃薯Y病毒(N株系)(PVY^N),苜蓿花叶病毒(AMV)和烟草坏死病毒(TNV)用PEG沉淀法粗提纯病毒也均获得良好的效果。

番茄环斑病毒的提纯

通过对番茄环斑病毒繁殖寄主、抽提缓冲液、澄清剂、浓缩方法和悬浮缓冲液等比较试验,初步筛选出得率高,并能保持病毒完整的提纯程序,即:用番杏为繁殖寄主,用0.05M 磷酸钾缓冲液(pH 7.5,内含0.02M 巯基乙醇)抽提,加1%Tritonx-100澄清,经8%聚乙二醇沉淀,接着差速离心(28000转/分,4小时)浓缩病毒,最后用0.01 MPB(pH 7.5内含0.002MEDTA)悬浮,低速离心,上清液为部分提纯的病毒制剂。此提纯制剂具有侵染性;病毒粒体完整,为等轴对称,直径约28μm;且具有典型的核蛋白吸收曲线。

南方菜豆花叶病毒单克隆抗体的初步研究

南方菜豆花叶病毒(Southern bean mosaic virus,SBMV)是一种既能通过种子远距离传播,又有介体带毒扩散力的危险性病毒。目前,国内尚未发现.SBMV主要危害菜豆、豇豆等在我国种植面积大、范围广的豆科植物。随着进出口贸易和种质交换日益增多,此病毒传入机会大大增加。为了提高检疫技术水平,了解病毒特性和建立快速检测技术,本文对SBMV单克隆抗体进行了初步研究。

ELISA检测植物病毒过程中减少非特异反应的有效方法——酶联板处理

酶联免疫吸附试验(ELISA)是一种快速、准确、经济、简便的免疫学检测手段,并具有作大规模检测和灵敏度高的优点。但用于植物病毒粗汁液检测,往往存在着病健样品的吸收值之比(P/N)太低,阴阳性反应难以判别的问题。酶联板的处理能消除或大大减缓此问題。在本实验中,我们用氢氧化钠/乙醇液处理酶联板,效果十分显著。在对不同组10种植物病毒粗汁液的检测中,使用处理板并设未处理板作对照,结果前者无一例外的大大提高了病毒特异性吸收值及P/N值,从而使ELISA检测植物病毒粗汁液的特异性吸收值提高0.8～5倍,灵敏度提高10～1000倍。

免疫电镜技术在植物病毒研究中的应用和进展

早在1941年 Anderson 和 Stanley 曾在电镜下,观察到烟草花叶病毒(TMV)抗血清与抗原结合的络合物,然而免疫电镜技术直接应用于植物病毒诊断和研究,还是从本世纪六十年代开始,七十年代以来才发展较快。由于免疫电镜取样很省,

Ds-RNA检测技术在植物病毒及其有关病原研究中的应用前景

在植物病毒及其有关病原的研究中,检测方法的建立是以病原及其寄主的性质和相互作用为基础的。这包括症状,寄主范围,病原在寄主体内性质,介体,病原传播途径和传播特点,病原形态、病原体及外壳蛋白和基因组核酸的理化性质等。近年来,病毒及病毒类病原亚基因组RNA在病毒研究中的作用,也日益受到研究者的重视,如卫星病毒。