响应面法优化连翘苷超声提取工艺

在单因素实验基础上,采用Box-Behnken中心组合设计原理优化提取溶剂甲醇的浓度、超声提取时间、超声功率和液料比。以连翘苷得率为响应值进行多元二次响应回归分析,得到连翘苷的最佳提取工艺条件为:甲醇浓度100%,超声提取时间27min,超声功率416W,液料比12∶1。回归模型预测最优条件下连翘苷得率为0.082%,验证值为0.080%,与预测值的相对误差为2.39%。

新型抗结核分枝杆菌药物筛选模型的建立

为建立基于酶水平和细胞水平的新型抗结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)药物的筛选模型,以M.tuberculosis H37Rv基因组DNA为模板,PCR特异性扩增异柠檬酸裂解酶(ICL)基因,构建表达载体,在E.coli BL21(DE3)中高效表达,使用N i2+亲和层析柱纯化重组ICL,检测其活性。优化ICL酶反应条件,考察待筛选样品溶剂对酶活性的影响,建立ICL抑制剂酶水平筛选模型;考察与优化耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegma)在以乙酸盐为唯一碳源的培养基中的生长状况,建立基于M.sm egma的乙醛酸代谢途径抑制剂的细胞水平筛选模型;利用上述2种筛选模型对1 060种可能具有拮抗活性的微生物代谢样品进行初筛和复筛,两者筛选结果正相关性较好。

对商业银行应用管理会计的几点思考

随着金融体制的改革和各种金融衍生产品的出现,商业银行的收益、成本、盈亏要到到期日才能见分晓,这一趋向已经对传统会计提出了挑战,需要我们尽快认清建立商业银行管理会计的必要性,找出其应用的限制性因素,分析应用管理会计的基本条件,切实把握好应用管理会计的方法,使管理会计在商业银行充分发挥效能。

HPLC法测定肝素钠注射液中6种抑菌剂

目的建立高效液相色谱(HPLC)法同时测定肝素钠注射液中苯酚、苯甲醇、三氯叔丁醇、羟苯甲酯、羟苯乙酯、羟苯丙酯6种抑菌剂。方法采用Agilent Zorbax SB-C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相A为水,流动相B为甲醇,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min^(-1),检测波长为220 nm及256 nm,柱温30℃。结果苯酚、苯甲醇、羟苯甲酯、羟苯乙酯、三氯叔丁醇、羟苯丙酯分别在25.00~400.06μg·mL^(-1)(r=1.0000)、104.49~1671.88μg·mL^(-1)(r=0.9999)、30.65~490.4μg·mL^(-1)(r=0.9999)、5.36~85.81μg·mL^(-1)(r=0.9999)、49.60~793.54μg·mL^(-1)(r=0.9999)、5.03~80.45μg·mL^(-1)(r=1.0000)内线性关系良好,平均回收率分别为100.3%、99.7%、99.8%、100.0%、99.4%和100.1%,RSD分别为1.0%、1.2%、1.3%、1.4%、1.4%和1.4%(n=9)。结论方法准确,重现性好,结果可靠,可用于肝素钠注射液中6种抑菌剂的测定。

HPLC法测定复方胃蛋白酶颗粒中维生素B_1的含量及含量均匀度

目的:建立HPLC法测定复方胃蛋白酶颗粒中维生素B_1的含量及含量均匀度。方法:色谱柱为Thermo BDS HYPERSIL C_(18)(4.6 mm×150 mm,5μm),流动相为甲醇-乙腈-0.02 mol·L^(-1)庚烷磺酸钠溶液(含1%三乙胺)(用磷酸调节pH值为3.7)(10∶10∶80),检测波长为260 nm,柱温30℃,流速1.0 m L·min^(-1)。结果:维生素B_1进样量在25.4~634.1 ng范围内线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为100.1%,RSD为1.12%(n=9)。维生素B_1含量测定结果为:83.4%;含量均匀度测定结果为:各厂家A+2.2S均大于15.0。结论:方法快速准确,灵敏度高,重现性好,结果可靠,为复方胃蛋白酶颗粒的质量控制提供依据。

依诺肝素钠注射液分子量与分子量分布比较研究

目的比较不同方法测定依诺肝素钠注射液分子量与分子量分布的差异,同时考察了各企业产品与原研制剂的一致性,为统一质量标准提供参考。方法分别采用各企业注册标准的检验方法及原研制剂注册标准的方法测定了6家国产仿制制剂及原研制剂的分子量与分子量分布。结果国内各仿制制剂采用原研制剂方法测得的重均分子量普遍高于法定检验结果,分子量分布也有所差异;部分企业的分子量与分子量分布与原研制剂相比差异较大。结论不同方法测得的分子量与分子量分布有所差别,国内仿制药与原研制剂也存在差异,建议尽快统一质量标准,提高产品质量。

UPLC-MS/MS法测定花生油和牛奶中黄曲霉毒素含量

目的建立超高效液相色谱-串联质谱法测定花生油和牛奶中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2和M1含量的方法。方法采用Waters BEH C^(18)柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以0.1%甲酸溶液和0.1%甲酸乙腈溶液作为流动相,梯度洗脱,ESI^+方式、多反应监测测定,基质配置标准溶液工作曲线法定量。结果此法检出限4.04~5.06 pg,回收率79.6%~94.3%。结论此法可同时测定黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2和M1,具有操作方便、准确等优点,可满足食品中黄曲霉毒素的检测要求。

ICP-MS检测脂肪乳注射液及包材中的18种元素

建立电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法测定脂肪乳注射液及包材中的18种元素含量。方法采用标准曲线法,优化电感耦合等离子体质谱技术参数,检测脂肪乳注射液及包材中镉、汞、钴、铅、钒、砷、镍、锑、铝、钡、铁、锌、铈、钛、硼、硅、锂、铜共18种元素含量,并进行方法学验证。结果脂肪乳注射液及其包材中硼硅玻璃输液瓶和溴化丁基橡胶塞样品的前处理方法反应比较彻底,可以充分消除脂肪乳注射液中大豆油、软磷脂等成分对元素测定的影响。结论该方法操作简便、准确,精密度、准确性、稳定性、专属性好,适用于测定脂肪乳注射液及包材中的18种元素含量。

电感耦合等离子体质谱法测定丙氨酰谷氨酰胺注射液中铝的含量

提出了电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)测定丙氨酰谷氨酰胺注射液中铝含量的方法。移取供试品7.5 mL共6份,分别置于6个15 mL塑料离心管中,各加入一定量的铝标准溶液,再用5%(体积分数)硝酸溶液稀释至刻度,摇匀,经0.22μm水膜过滤,得到供试品加标溶液系列,标准加入法定量。ICP-MS分析中选择雾化气稀释高基体样品引入-氦气碰撞(HMI-He)模式。结果显示:某供试品加标溶液中铝的质量浓度在30.00μg·L^(-1)内与其对应的响应值呈线性关系,检出限(3s)为0.88μg·L^(-1);对供试品加标溶液进行精密度试验,铝测定值的相对标准偏差(n=6)均小于2.0%;对同一供试品进行3个浓度水平的加标回收试验,回收率为101%~106%。方法用于12批丙氨酰谷氨酰胺注射液的分析,铝的检出量为20.00~31.22μg·L^(-1)。

下颌第二磨牙根管显微镜下根管口分型探讨

目的通过显微镜分析下颌第二磨牙根管口的解剖特点及分型。方法选择患牙髓炎或根尖周炎的下颌第二磨牙653个,根管显微镜下观察并记录根管口形态,对其根管口形态分类计数,计算其出现率。结果下颌第二磨牙单根牙Ⅰ-1型47例(7.20%),Ⅰ-2型65例(9.95%),Ⅰ-3型263例(40.27%),Ⅰ-4型22例(3.37%);C形根管256例(39.21%)。完全C形根管及部分C形根管分别占17.31%、21.90%。结论根管显微镜下可以更好地观察下颌第二磨牙根管口形态,提高C形根管诊断率。根管口形态呈C形根管系统较多,不利于根管的彻底清理和充填。

柱前衍生高效液相色谱法检测盐酸莫西沙星中侧链方法研究

目的建立测定盐酸莫西沙星中侧链的方法。方法采用柱前衍生反相高效液相色谱(HPLC)法,采用C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以0.1%三乙胺溶液(用磷酸调节p H值至7.5)-乙腈(50∶50)为流动相,流速为1.0 m L·min-1,检测波长为245 nm。结果盐酸莫西沙星侧链在0.210~1.577μg·m L^(-1)浓度范围内呈良好的线性关系,检测限为0.013μg·m L^(-1),定量限为0.042μg·m L^(-1),加标回收率为102.8%~106.2%。结论该方法简单快速,专属性强,准确度好,灵敏度高。

布洛芬颗粒在中国健康受试者体内的人体生物等效性研究

目的研究布洛芬颗粒剂在中国健康受试者体内的生物等效性,为一致性评价提供依据。方法采用单中心、随机、开放、单剂量、两周期、两序列、交叉试验设计,将纳入的空腹、餐后各24名健康志愿者分别随机分为2组,分别口服受试制剂和参比制剂0.2 g,采用超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)技术,建立了快速、简单、灵敏的测定人血浆中布洛芬浓度的分析方法,用于布洛芬颗粒人体生物等效性试验研究。采用Phoenix WinNonlin 8.2软件计算其药动学参数,评价其生物等效性。结果空腹给药后布洛芬受试制剂和参比制剂的主要药动学参数为:C_(max)分别为(21.8±4.21)μg/ml和(23.3±4.74)μg/ml;T_(max)分别为1.00 h和0.25 h;AUC_(0-t)分别为(71.83±16.08)μg/ml和(69.02±16.34)μg/ml;AUC_(0-∞)分别为(72.89±16.27)μg/ml和(70.04±16.53)μg/ml。餐后给药后布洛芬受试制剂和参比制剂的主要药动学参数为:C_(max)分别为(10.7±2.25)μg/ml和(10.6±2.57)μg/ml;T_(max)分别为4.00 h和4.00 h;AUC_(0-t)分别为(65.27±13.79)μg/ml和(65.76±16.37)μg/ml;AUC_(0-∞)分别为(66.45±14.13)μg/ml和(67.12±16.93)μg/ml。结论空腹和餐后受试制剂AUC_(0-t)、AUC_(0-∞)和C_(max)的90%置信区间均在参比制剂相应参数的80.00%~125.00%范围内。方差分析及双单侧t检验结果显示,受试制剂布洛芬颗粒剂与参比布洛芬颗粒剂具有生物等效性。

吲达帕胺片在中国健康受试者体内的人体生物等效性研究

目的研究吲达帕胺受试制剂(片剂)和参比制剂(片剂)空腹给药的人体生物等效性。方法采用开放、随机、单剂量、两周期、两序列、交叉试验设计,将纳入的12名健康志愿者随机分为2组,分别口服受试制剂和参比制剂2.5 mg,采用超高效液相色谱串联质谱(UHPLC-MS/MS)技术,建立了快速、简单、灵敏的的分析方法测定人全血中吲达帕胺浓度,用于吲达帕胺片人体生物等效性预试验研究。利用DAS软件计算其药动学参数,评价其生物等效性。结果吲达帕胺受试制剂和参比制剂的主要药动学参数:C_(max)分别为(128.7±19.4)ng/ml和(126.5±19.2)ng/ml;T_(max)分别为(1.5±0.6)h和(1.5±0.5)h;AUC_(0-t)分别为(2163.4±352.4)ng/ml和(2148.5±346.2)ng/ml;AUC_(0-∞)分别为(2241.1±383.8)ng/ml和(2228.4±371.5)ng/ml,相对生物利用度为99.5%±6.2%。结论受试制剂AUC_(0-t)、 AUC_(0-∞)和C_(max)的90%置信区间均在参比制剂相应参数的80.00%~125.00%范围内。方差分析及双单侧t检验结果显示,受试吲达帕胺缓释片与参比吲达帕胺缓释片具有生物等效性。

国家评价性抽验复方胃蛋白酶颗粒质量分析

目的:评价复方胃蛋白酶颗粒质量现状及存在的问题,为国家药品标准的建立和修订提供更加科学的依据,同时为行政监管提供有力保障。方法:对国家评价性抽验的265批复方胃蛋白酶颗粒进行全项检验,并对检验结果进行统计分析。结果:按照标准检验,有2批次样品不合格,总体不合格率为0.8%。不合格项目均为胃蛋白酶效价。按照探索性研究方法检验,发现维生素B1含量及均匀度不合格、加速试验中部分企业胃蛋白酶活性下降幅度较高等问题。结论:复方胃蛋白酶颗粒的现行质量标准不能满足质量控制的要求,仍需进一步充实和完善。

二次微波消解-电感耦合等离子体质谱联用技术同时测定蒙脱石原料及其制剂中的三氧化二铝、二氧化硅及氧化镁

目的:建立一种同时测定蒙脱石及其制剂中三氧化二铝、二氧化硅及氧化镁3个成分的含量测定方法。方法:采用稀硝酸-氢氟酸-饱和硼酸溶液二次微波消解与电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)联用技术,优化建立以铑(103Rh)为内标可同时测定蒙脱石中铝(27Al)、硅(28Si)及镁(24Mg)3个元素的分析方法,并分别与《中华人民共和国药典》二部中EDTA容量法测定三氧化二铝、马弗炉炽灼燃烧法测定二氧化硅,美国药典偏硼酸锂熔融样品后原子吸收分光光度法测定氧化镁的测定方法进行了比较分析。结果:建立的蒙脱石测定三氧化二铝、二氧化硅及氧化镁含量分析方法,铝(Al)和硅(Si)的线性均在25~300 ng·mL^(-1),镁(Mg)的线性在20~240 ng·mL^(-1),r≥0.999;Al、Si、Mg的检测限依次为0.49、1.30、0.71 ng·mL^(-1),各剂型的平均回收率依次在99.7%~100.6%、99.9%~101.2%、99.8%~101.2%,重复性RSD(n=6)依次为0.3%~1.3%、0.4%~1.2%、0.4%~1.0%。采用新建方法和原标准方法分别测得蒙脱石中三氧化二铝的含量依次为2.3%~2.4%、2.0%~2.2%,二氧化硅的含量依次为58.7%~61.5%、55.3%~59.4%,氧化镁的含量依次为15.9%~20.6%、14.6%~19.4%,测定结果基本一致。结论:本文采用的二次微波消解与ICP-MS联用方法简单快捷,灵敏度高,准确性好,可用于蒙脱石原料及制剂的三氧化二铝、二氧化硅及氧化镁含量测定。

增强ESAT6-CFP10融合蛋白诱导小鼠细胞免疫应答佐剂的筛选

目的筛选能增强特异性抗原早期分泌抗原靶6蛋白(Early secretory antigenic target 6,ESAT6)-培养滤出液蛋白-10(Culture filtrate protein 10,CFP-10)融合蛋白(E1C0)诱导小鼠细胞免疫应答的佐剂,建立基于细胞免疫应答的小鼠模型,以评价基于体外干扰素γ释放分析(IFNγrelease assay,IGRA)结核诊断方法中特异性刺激抗原E1C0的活性。方法建立小鼠IFNγ双抗体夹心SABC-ELISA检测系统,并验证系统的线性、灵敏度、重复性和特异性。将BALB/c小鼠随机分为7组:E1C0+单磷酸类脂A(Monophosphoryl lipid A,MPL)+双十八烷基二甲基溴化铵(Dimethyl dioctadecylammonium bromide,DDA)组、E1C0+DDA组、E1C0+MPL组、E1C0+弗氏不完全佐剂(IFA)组、E1C0组、生理盐水组和MPL+DDA联合组,每组6只,经小鼠后肢内侧皮下免疫3次,间隔2周,免疫剂量为:E1C0 100μg/只,MPL 25μg/只,DDA 250μg/只,IFA 100μl/只。末次免疫4周后处死小鼠,无菌取脾,分离脾淋巴细胞,加入E1C0进行培养,MTT法检测特异性淋巴细胞增殖反应,ELISA法检测培养上清中IFNγ水平。采用筛选出的最佳佐剂与抗原组合免疫3批BALB/c小鼠,进行IFNγ诱生测定。结果检测系统的线性范围为:40～2 560 pg/ml(R>0.98);灵敏度为40 pg/ml;变异系数(CV)<15%,检测大鼠、豚鼠和兔血清IFNγ均为阴性;E1C0+MPL+DDA组、E1C0+IFA组和E1C0+DDA组小鼠特异性淋巴细胞增殖刺激指数均明显高于生理盐水组(P<0.01);E1C0+MPL+DDA组小鼠的脾淋巴细胞经E1C0体外刺激后,产生的IFNγ水平明显高于其他组(P<0.001);重复试验结果显示,E1C0+MPL+DDA组3批小鼠免疫后,脾淋巴细胞诱生的IFNγ水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论 E1C0与MPL和DDA联合免疫所诱导的小鼠Th1型细胞免疫应答最强,成功建立了用于评价刺激抗原E1C0活性的小鼠模型。

依诺肝素钠注射液质量分析及一致性评价

目前依诺肝素钠注射液没有统一的药典标准,属于存在安全性风险的品种,因此对其进行质量监督至关重要。连续3年对该产品进行跟踪检验,抽样范围广,样品规格全,代表性强,能较好地反映全国依诺肝素钠注射液的质量现状。在日常监督抽验的基础上,结合国家评价性抽验已有的研究成果,该研究总结了8家生产企业的200余批样品质量现状,评估了不同企业依诺肝素钠注射液的质量差异。此外,首次考察了国内企业产品与原研制剂的质量一致性,以及首次对比分析了在中国市场、美国市场和欧洲市场上市的原研制剂质量,为质量标准提升及临床用药安全提供参考。通过调研、按现行法定标准检验以及探索性研究,结合现行标准的科学性、合理性综合分析,发现依诺肝素钠注射液仍然存在质量标准不统一、个别企业处方与生产工艺不一致以及一些其他问题。因此,现行质量标准仍存在缺陷,需进一步统一和完善。

结核疫苗的研究策略与进展

结核病是由结核分枝杆菌感染引起的慢性消耗性传染病，严重威胁人类健康和生命。据世界卫生组织（WHO）估计，如果不能有效控制结核病，2000年至2020年将有10亿人感染结核分枝杆菌，2亿人发展为结核病，3500万人死于该病^[1]。结核分枝杆菌高水平的潜伏感染以及与HIV的合并感染，给结核病的预防、诊断和治疗带来了很大困难口^[2]。

溶瘤I型单纯疱疹病毒的研究进展

溶瘤病毒(Oncolytic virus,OV)是可以靶向感染并杀伤肿瘤细胞的一类病毒,其中溶瘤I型单纯疱疹病毒(Oncolytic herpes simplex virus type 1,OHSV-1)是目前研究最多的溶瘤病毒之一,可通过多种策略进行构建,已有多种OHSV-1进入临床试验,大量结果显示其具有较好的安全性和有效性。本文主要介绍OHSV-1的分子生物学特性与优势、主要的开发及靶向性策略、各类OHSV-1的研究进展以及目前存在的问题等。

肠道病毒71抗原ELISA检测方法构建及其应用

目的 建立肠道病毒71型（EV71）抗原的ELISA检测方法.用于EV71的抗原定量、TCID50试验及EV71免疫原性与免疫保护性的关系分析.方法 以高亲和力的EV71中和单抗K8G2和Y8H2-HRP构建检测EV71抗原的双抗体夹心ELISA方法.比较本方法与显微镜观察法检测的EV71 TCID50.分析EV71抗原的特异比活与免疫血清中和抗体水平的关系.结果 本试剂定量检测抗原的线性范围为0.125 ～4.0 U/ml,R2 =0.9911,试剂不与EV71之外的受试物反应,试剂的回收率为0.89 ～ 1.16,变异系数小于15％,37℃9 d的热回收率大于85％.本法与显微镜观察法检测的EV71 TCID50的相关系数r=0.990.21株EV71抗原的特异比活与免疫血清中和抗体水平的相关系数r=0.930.结论 构建了EV71抗原ELISA检测试剂,可用于EV71的抗原含量检测、TCID50分析,为特异比活与免疫血清中和性关系研究提供了一些有价值的信息.