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柑橘衰退病毒RT-RPA-LFD可视化检测方法的建立及应用
被引量:
1
1
作者
申世凯
曾婷
+3 位作者
乔兴华
陈力
任杰群
周彦
《果树学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第12期2652-2660,共9页
【目的】柑橘衰退病由柑橘衰退病毒(citrus tristeza virus,CTV)引起,是一种世界性的重要柑橘病害。为实现CTV的田间快速检测,建立一种准确、快速且可视化的检测方法。【方法】以CTV外壳蛋白(CP)的保守区域为靶标,设计3对特异性引物和探...
【目的】柑橘衰退病由柑橘衰退病毒(citrus tristeza virus,CTV)引起,是一种世界性的重要柑橘病害。为实现CTV的田间快速检测,建立一种准确、快速且可视化的检测方法。【方法】以CTV外壳蛋白(CP)的保守区域为靶标,设计3对特异性引物和探针,通过引物筛选,以及优化引物浓度、反应时间和反应温度等条件,建立CTV的反转录-重组酶聚合酶扩增-侧流层析试纸条(RT-RPA-LFD)快速检测方法,明确其灵敏度,并用于田间疑似样品的检测。【结果】建立了CTV的RT-RPA-LFD检测方法:最佳检测引物为RPA-1F/R,对应探针为RPA-P,最佳反应条件为40℃,25 min,且与其他5种柑橘病毒无交叉反应。该方法的灵敏度是RT-PCR的100倍,最低可检测到2.12×10^(1)拷贝·μL^(-1)的CTV核酸,与RT-qPCR相当。采用RT-RPA-LFD法在67份田间样品中检测出CTV阳性样品41份,与RT-PCR法检测结果一致。【结论】建立的CTV RT-RPA-LFD法具有操作简单、快速、结果可视等优点,适合基层植保工作者对田间样品开展快速检测。
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关键词
柑橘
柑橘衰退病毒
反转录-重组酶聚合酶扩增-侧流层析试纸条
快速检测
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职称材料
柑橘褪绿矮缩病毒dot-ELISA检测方法的建立及应用
2
作者
秦阳阳
陈香玲
+3 位作者
王甲军
叶肖
申世凯
周彦
《果树学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第11期2181-2187,共7页
【目的】柑橘褪绿矮缩病毒(Citrus chlorotic dwarf-associated virus,CCDaV)是一种新的柑橘病毒,为给我国柑橘脱毒苗木质量控制和田间监测提供技术支撑,建立了一种灵敏度高、特异性强的快速检测方法。【方法】通过序列分析和相似性比对...
【目的】柑橘褪绿矮缩病毒(Citrus chlorotic dwarf-associated virus,CCDaV)是一种新的柑橘病毒,为给我国柑橘脱毒苗木质量控制和田间监测提供技术支撑,建立了一种灵敏度高、特异性强的快速检测方法。【方法】通过序列分析和相似性比对,明确抗原靶标;构建CCDaV-CP的原核表达载体,诱导目的蛋白表达后作为抗原用于注射兔子,制备抗血清。运用Western blot检测效价。通过优化抗体浓度,建立CCDaV的dot-ELISA检测方法,明确其灵敏度,并用于田间疑似样品检测。【结果】以外壳蛋白(CP)的保守区域为靶标,成功构建了表达载体pET28a-CCDaV-CP,其在18℃,IPTG浓度0.5 mmol·L^(-1)时,诱导12 h,目的蛋白的表达量高。制备的特异性抗血清效价为1:3000。由此建立的dotELISA检测方法在提取液被稀释640倍时,仍能检测出CCDaV。应用该方法对42份田间疑似样品的检测结果与PCR法的符合率为94.73%。【结论】首次获得了CCDaV的抗血清,并以此建立了快捷、灵敏、准确的dot-ELISA检测方法,为CCDaV的快速检测和防控提供了技术支撑。
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关键词
柑橘褪绿矮缩病毒
外壳蛋白
抗血清
斑点酶联免疫吸附法
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职称材料
题名
柑橘衰退病毒RT-RPA-LFD可视化检测方法的建立及应用
被引量:
1
1
作者
申世凯
曾婷
乔兴华
陈力
任杰群
周彦
机构
西南大学柑桔研究所国家柑桔工程技术研究中心
重庆市万州区植物保护与果树技术推广站
重庆三峡农业科学院
出处
《果树学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023年第12期2652-2660,共9页
基金
财政部和农业农村部国家现代农业产业技术体系(CARS-26-05B)。
文摘
【目的】柑橘衰退病由柑橘衰退病毒(citrus tristeza virus,CTV)引起,是一种世界性的重要柑橘病害。为实现CTV的田间快速检测,建立一种准确、快速且可视化的检测方法。【方法】以CTV外壳蛋白(CP)的保守区域为靶标,设计3对特异性引物和探针,通过引物筛选,以及优化引物浓度、反应时间和反应温度等条件,建立CTV的反转录-重组酶聚合酶扩增-侧流层析试纸条(RT-RPA-LFD)快速检测方法,明确其灵敏度,并用于田间疑似样品的检测。【结果】建立了CTV的RT-RPA-LFD检测方法:最佳检测引物为RPA-1F/R,对应探针为RPA-P,最佳反应条件为40℃,25 min,且与其他5种柑橘病毒无交叉反应。该方法的灵敏度是RT-PCR的100倍,最低可检测到2.12×10^(1)拷贝·μL^(-1)的CTV核酸,与RT-qPCR相当。采用RT-RPA-LFD法在67份田间样品中检测出CTV阳性样品41份,与RT-PCR法检测结果一致。【结论】建立的CTV RT-RPA-LFD法具有操作简单、快速、结果可视等优点,适合基层植保工作者对田间样品开展快速检测。
关键词
柑橘
柑橘衰退病毒
反转录-重组酶聚合酶扩增-侧流层析试纸条
快速检测
Keywords
Citrus
Citrus tristeza virus(CTV)
Reverse transcription-recombinase polymerase amplifi-cation-lateral flow dipstick test strip
Rapid detection
分类号
S666 [农业科学—果树学]
下载PDF
职称材料
题名
柑橘褪绿矮缩病毒dot-ELISA检测方法的建立及应用
2
作者
秦阳阳
陈香玲
王甲军
叶肖
申世凯
周彦
机构
西南大学柑桔研究所国家柑桔工程技术研究中心
广西农业科学院园艺研究所
出处
《果树学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第11期2181-2187,共7页
基金
国家重点研发计划(2019YFD1001802)
财政部和农业农村部:国家现代农业产业技术体系(CARS-26-05B)
重庆市自然科学基金项目(cstc2019jcyj-msxmX0557)。
文摘
【目的】柑橘褪绿矮缩病毒(Citrus chlorotic dwarf-associated virus,CCDaV)是一种新的柑橘病毒,为给我国柑橘脱毒苗木质量控制和田间监测提供技术支撑,建立了一种灵敏度高、特异性强的快速检测方法。【方法】通过序列分析和相似性比对,明确抗原靶标;构建CCDaV-CP的原核表达载体,诱导目的蛋白表达后作为抗原用于注射兔子,制备抗血清。运用Western blot检测效价。通过优化抗体浓度,建立CCDaV的dot-ELISA检测方法,明确其灵敏度,并用于田间疑似样品检测。【结果】以外壳蛋白(CP)的保守区域为靶标,成功构建了表达载体pET28a-CCDaV-CP,其在18℃,IPTG浓度0.5 mmol·L^(-1)时,诱导12 h,目的蛋白的表达量高。制备的特异性抗血清效价为1:3000。由此建立的dotELISA检测方法在提取液被稀释640倍时,仍能检测出CCDaV。应用该方法对42份田间疑似样品的检测结果与PCR法的符合率为94.73%。【结论】首次获得了CCDaV的抗血清,并以此建立了快捷、灵敏、准确的dot-ELISA检测方法,为CCDaV的快速检测和防控提供了技术支撑。
关键词
柑橘褪绿矮缩病毒
外壳蛋白
抗血清
斑点酶联免疫吸附法
Keywords
Citrus chlorotic dwarf-associated virus
Coat protein
Antiserum
Dot enzyme linked immunosorbant assay
分类号
S666 [农业科学—果树学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
柑橘衰退病毒RT-RPA-LFD可视化检测方法的建立及应用
申世凯
曾婷
乔兴华
陈力
任杰群
周彦
《果树学报》
CAS
CSCD
北大核心
2023
1
下载PDF
职称材料
2
柑橘褪绿矮缩病毒dot-ELISA检测方法的建立及应用
秦阳阳
陈香玲
王甲军
叶肖
申世凯
周彦
《果树学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022
0
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职称材料
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