结核特异性多肽E6、E7和C14对单核-巨噬细胞亚型极化的影响

目的运用流式细胞术检测单核-巨噬细胞极化亚型M1(CD14^+CD16^+)及M2(CD14^+CD163^+),探讨结核特异性多肽对单核-巨噬细胞极化分型的影响。方法以3种结核特异性多肽E6、E7和C14作为刺激物,刺激人急性白血病单核细胞株(THP-1细胞)、结核病患者胸水单个核细胞及外周血单个核细胞(PBMC),用流式细胞术检测刺激物不同时间点对单核-巨噬细胞极化表面标记表达的影响。结果结核特异性多肽E6刺激THP-1 24+0 h、24+24 h、24+48 h、24+72 h后,CD16/CD163阳性率分别为16.85%/13.78%、19.59%/15.68%、18.14%/14.19%、13.61%/11.47%。E7刺激效果与E6相似,C14对THP-1的CD16/CD163表达影响不如前两种多肽强。结核特异性多肽E6刺激结核患者胸水或血标本单核细胞19 h后,CD14+CD16+阳性率(1#患者:1.66%,2#患者:4.37%)与CD14^+CD163^+阳性率(1#患者:1.76%,2#患者:2.82%)差异不大,但CD14^+CD16^+CD86^+阳性率(1#患者:2.20%,2#患者:6.16%)大于CD14^+CD163^+CD206^+阳性率(1#患者:1.37%,2#患者:0.92%)。E7刺激效果与E6相似,C14对结核患者胸水或血标本单核细胞CD14/CD16/CD163表达影响不如前两种多肽强。结论 3种结核特异性多肽特别是E6、E7体外刺激单核细胞株THP-1、结核患者胸水或血标本单核细胞主要向M1型单核-巨噬细胞极化。

结核分枝杆菌一特异性多肽E7诱导单核一巨噬细胞向M2型分化的信号通路

目的探讨结核分枝杆菌(MTB)-特异性多肽E7诱导单核-巨噬细胞向M2型分化的信号通路。方法将相同个数的单核-巨噬细胞分为空白对照组、M1阳性组[用脂多糖及γ-干扰素(IFN-γ)共同刺激]、M2阳性组(用IL-4和IL-13共同刺激)和E7实验组(用MTB-特异性多肽E7刺激),分别于刺激后12、18、24和36h检测细胞的M1型标志物CD16、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和M2型标志物CD163、CD206、IL-10的表达水平;用过氧化物酶体增殖剂激活受体-γ(PPAR-γ)阻断剂分别处理空白对照组、M2阳性组和E7实验组24h,检测各组在加入阻断剂前后PPAR-γ和CD163的表达情况,采用t检验对各组结果进行比较。结果与阳性组和空白对照组比较,E7实验组在刺激巨噬细胞至18h时,TNF-α的表达逐渐达到高峰(相对表达量为20.02),随后逐渐下降且伴随CD163表达逐渐升高,24h时CD163的表达至高峰(相对表达量为2.44);在加入阻断剂后E7实验刺激组的细胞PPAR-γ表达的量较阻断前明显降低(阻断前为0.94±0.06,阻断后为0.69±0.09,P=0.028);CD163的表达水平较阻断前明显下降(阻断前为3.95±0.61,阻断后为2.87±0.20,P=0.047)。结论MTB-特异性多肽E7可诱导单核-巨噬细胞向M2型分化,与PPAR-γ涉及的非受体酪氨酸激酶信号转导子和转录激活子信号通路相关。