薄池吸收宽带紫外光度检测器的研制

设计和制作了利用宽带吸收技术进行宽带表观吸光度测定的薄池宽带紫外光度检测器 (large bandwidthUVabsorptiondetector,简称LBUAD) ,并进行了性能表征。该检测器在光学系统上采用氘灯做为紫外光源 ,通过宽带紫外玻璃得到入射宽带光 ,并利用中心对称的双透镜聚焦光学系统对宽带光进行聚焦 ,聚好的光斑通过蓝宝石球进一步会聚后照射吸收池 ,然后进行检测。毛细管薄池中系列高锰酸钾溶液的表观吸光度测定结果表明 :该仪器的动态范围为 2～ 3个数量级 ,对硝基苯肼的表观吸光度测定结果表明 ,其检出限达到10 - 6 AU ,基线漂移小于 0 .0 0 1AU h。与商品DD2 0 0 0紫外检测器的比较以及在实际电泳分离中的检测进一步表明

肝癌转移相关的核心岩藻糖基化蛋白质表达谱的研究

通过比较研究不同转移潜能肝癌细胞系中核心岩藻糖基化蛋白质表达谱的差别,筛查与转移相关的重要糖蛋白.用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、双向电泳(2-DE)和凝集素印迹技术联合基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-MS/MS)分析,建立3种不同转移潜能人肝癌细胞系Hep3B、MHCC97L和MHCC97H的核心岩藻糖基化蛋白质表达图谱.比较研究发现,不同转移潜能肝癌细胞呈现不同的SDS-PAGE/LCA凝集素印迹图谱,MHCC-97H和MHCC-97L在35～45 ku和45～60 ku间出现了Hep3B未见的条带.在核心岩藻糖基化蛋白质表达图谱中,Hep3B、MHCC97L和MHCC97H分别平均检测到(55±7)个蛋白质点(n=3),(60±6)个蛋白质点(n=3),(61±4)个蛋白质点(n=3);以各自双向电泳图谱为参考胶,Hep3B、MHCC97L和MHCC97H分别与其匹配的平均匹配点数为(25±3)个(n=3),(30±4)个(n=3),(28±3)个(n=3).该图谱中,与Hep3B相比,MHCC97L有13个点未匹配,其中9个点为Hep3B(-)/MHCC97L(+);MHCC97H有9个点未匹配,其中6个点为Hep3B(-)/MHCC97H(+),MALDI-TOF-MS/MS可鉴定出Annexin1、Keratin 8等12种差异蛋白质.这些结果证实了不同转移潜能的肝癌细胞有明显的核心岩藻基化糖蛋白差异性表达.提示肝癌转移可能与这些差异糖蛋白及其核心岩藻糖基化有关.

毛细管电泳-电喷雾质谱联用技术及其在蛋白质分析领域中的应用

综述了毛细管电泳与电喷雾质谱联用的接口技术、分离模式及其在蛋白质分析领域中的应用 。

糖蛋白结构质谱解析的样品前处理

基于高分辨率、高精度、高灵敏度及良好表现力的多级质谱,以标准糖蛋白辣根过氧化物酶(HRP)、核糖核酸酶B(RNaseB)为对象,探索了糖蛋白质谱分析前样品处理的技术流程。通过对糖蛋白样品前处理的各个步骤(包括蛋白变性方法(RNaseB适合化学变性,HRP适合热变性)、酶的选择及条件(RNaseB适用内蛋白酶Lys-C酶解,HRP适用胰蛋白酶酶解,酶解时间控制在12～16h)、提肽液的组成(对于低丰度糖蛋白用50%乙腈-5%三氟乙酸提取)、基质的组成、点样方法("三明治"式))进行了优化,形成了简单易行、无需糖肽富集标记的糖蛋白溶液酶解-质谱分析和胶上分离酶解-质谱分析的技术路线,为实际样品体系中糖蛋白的结构解析提供了可行的方法。

蛋白质质谱检测技术在临床中的应用

质谱技术前期在大分子离子化技术与仪器技术以及蛋白质质谱(组)定性定量方法学的进展,为临床蛋白质质谱的应用奠定了技术基础。由于蛋白质是生命的执行体,蛋白的表达与否和表达量与人们的健康情况及疾病状态紧密的相连,人类蛋白质组计划的实施推动了医学界对临床蛋白质检测和临床蛋白质组的关注和应用,以蛋白质组学驱动的精准医学很快将和以基因组学驱动的精准医学并驾齐驱。通过重点介绍蛋白质质谱定性和定量技术的进展,总结如何通过临床质谱和临床蛋白质组方法,尤其是采用三重四级杆质谱和同位素标记参比的多重反应监测质谱方法,寻找重要疾病的临床标志物群的技术路线和方案。

靶向干扰CXCR7基因表达对肝癌(HCC)细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨CXCR7基因在不同肝癌细胞系及肝癌组织中的表达情况,并研究靶向抑制CXCR7基因表达对肝癌细胞增殖及凋亡的影响。方法应用Western blot检测不同肝癌细胞系及10例肝癌组织中CXCR7蛋白的表达水平。采用短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰技术沉默HCCLM3与MHCC97L细胞中CXCR7基因的表达,分别采用Western Blot和qRT-PCR检测shRNA的靶向沉默效果。通过CCK-8增殖实验与Annexin V-FITC/PI细胞双染色研究CXCR7抑制对HCCLM3与MHCC97L增殖及凋亡的影响。结果CXCR7表达水平与肝癌细胞的恶性程度呈正相关,肝癌组织中CXCR7表达水平较癌旁显著升高。实验成功构建了9个慢病毒表达载体,其中CXCR7shRNA-566序列干扰效率最高。增殖实验显示干扰表达组细胞生长速度受到明显抑制(P<0.05);流式细胞仪分析显示干扰CXCR7表达可诱导细胞凋亡的发生。结论 CXCR7表达水平与肝癌恶性程度呈正相关,靶向干扰CXCR7表达可抑制细胞的增殖能力,诱导细胞发生凋亡。

高效液相色谱-质谱法对冠心病患者血清的脂质组学研究及其临床意义

采用高效液相色谱-质谱法(HPLC-MS)对冠状动脉慢性完全堵塞(CTO)患者在不同患病阶段的血清试样进行了脂质组学研究。试验采集了CTO疑似人群、CTO患者及CTO患者经皮冠状动脉介入治疗(PCI)手术后24h和72h的血清,分别采用氯仿和体积比为25∶75的乙酸乙酯-异辛烷混合溶液提取脂质,离心分离后,上清液用于Shotgun法(MS)和多反应监测(MRM)法(HPLC-MS)分析。样本直接进样电喷雾(ESI)质谱分析,用于Shotgun法进行广谱的脂质组学分析鉴定。通过Analyst 1.6软件提取质谱数据,并通过生物信息学工具"Lipid MS Predict"确认脂质分子,总共得到1504种脂质分子,并利用MRM法确认其中有临床意义的631个脂质分子。通过生物信息学分析,得到对于CTO具有诊断价值的包括胆固醇酯CE 16∶1和溶血磷脂酰乙醇胺LPE 18∶1在内的9个标志性脂质分子。结合临床回访结果和脂质组学研究数据证实,CTO患者手术治疗后的预后情况和磷脂酸、磷脂酰胆碱、胆固醇酯等3类脂质的含量变化有关。确定的脂质标志物应用于临床诊断早期冠心病和评估手术治疗后的风险,具有显著而明确的临床医学价值。

差异荧光凝胶电泳法分析不同转移潜能人肝癌细胞系的蛋白质组

本研究应用差异凝胶电泳(Difference gel electrophoresis,DIGE)和质谱鉴定技术,系统分析了4种具有不同转移潜能的人肝癌细胞系的蛋白质表达差异。胶上鉴定了约1700个蛋白质斑点,经过比对后发现167个蛋白质点存在差异,经过质谱分析成功鉴定了146个蛋白质点,对应96个与肝癌转移相关的非冗余差异蛋白。对差异蛋白进行生物信息学分析,结果表明细胞组装和运动相关的蛋白在转移过程中被富集。差异蛋白前列腺脱氢酶(Hydroxyprostaglandin dehydrogenase,HPGD)首次被证明与肝癌转移正相关,具有抗凋亡和促侵袭的能力。

RNA干扰CXCR7基因对人肝癌MHCC97H细胞生物学特性的影响

通过构建针对CXCR7的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)干扰表达质粒,转染人肝癌细胞系MHCC97H,嘌呤霉素筛选建立低表达CXCR7基因的稳转株,分别采用qRT-PCR和Western Blot检测shRNA靶向沉默效果。通过CCK-8增殖实验与流式细胞术研究CXCR7抑制对细胞增殖及凋亡的影响;通过划痕愈合实验研究CXCR7抑制对MHCC97H细胞迁移能力的影响。结果表明:成功构建了慢病毒表达载体pLKO.1-CXCR7shRNA,显著下调MHCC97H细胞中CXCR7mRNA及蛋白的表达。增殖实验显示,与阴性对照组相比,干扰表达组细胞生长速度受到明显抑制(p<0.001);干扰CXCR7表达可诱导细胞凋亡,尤以早期凋亡率上调为著;划痕实验显示抑制CXCR7表达延长细胞的伤痕愈合时间。

静电轨道离子阱离子切向引入的新方式和模拟

静电轨道离子阱质谱仪的关键垄断技术是将离子引入静电轨道离子阱的C形离子阱。本工作提出一种新的离子引入方式,即设计了一种O形离子阱,用于将更多的离子以较少的损失引入到静电离子阱中进行分析。O形离子阱嵌套在静电轨道离子阱外轨道上,可以直接使离子从O形圆轨道下滑降轨内切至椭圆轨道,再沿椭圆轨道下滑降轨外切,最终射入静电轨道离子阱中的圆轨道。新的离子引入方式避免了C形离子阱远距离传输离子,离子流可连续进入O形圆轨,在脉冲电压作用下进入静电轨道离子阱;随着离子的引入面增大,离子的引入量有所增加。另外,还推导了离子运动轨迹方程及降轨脉冲的能量方程,对离子引入方式进行模拟,结果表明,多离子多位置同时引入对离子轨迹无明显影响,而离子是否切向引入则至关重要,偏离切向引入会大大降低离子寿命。

棕榈酸通过调节癌细胞膜流动性和葡萄糖代谢抑制肝细胞癌的进程

【据《Hepatology》2017年7月报道】题：棕榈酸通过调节癌细胞膜流动性和葡萄糖代谢抑制肝细胞癌的进程（作者Lin L等） 脂质是细胞膜的重要组成成分和机体的主要能量来源,脂质代谢的激活已经被认为是恶性肿瘤的标志之一。通过大规模＂鸟枪法＂脂质组学定性定量研究,来自复旦大学生物医学研究院与基础医学院系统生物学系的Lin在不同转移潜能的肝癌细胞系中共鉴定到1700余种脂质分子,主要来自三种脂质类型（磷脂、鞘脂和甘油脂）。

任务准备对二语口语产出影响的研究综述

在任务复杂度的研究中,准备是一个引起研究者诸多注意的概念。迄今为止,国内外已有不少二语习得研究者以Robinson的认知假设或Skehan的有限注意力资源模型为基础,从言语产出的三个方面-准确度、流利度和复杂度分析了任务准备和二语口语产出之间的关系。多数研究表明了准备对口语产出的促进作用,但对不同类型的准备效用存在争议。

人肝细胞性肝癌组织转移相关分子的比较蛋白质组学研究

目的应用比较蛋白质组学方法研究肝细胞性肝癌(HCC)转移相关的关键蛋白分子。方法用双向凝胶电泳(2DE)对有转移的HCC组织和未发生转移的HCC组织总蛋白进行分离,两组间差异蛋白点用质谱和数据库搜索鉴定,并在蛋白质和mRNA水平上进一步检测验证。结果鉴定出16个差异表达蛋白,包括S100钙结合蛋白(S100)、热休克蛋白27(HSP27)、细胞角蛋白18(CK18)等。对在转移性HCC组织中表达显著增高的HSP27,应用western blot分析在蛋白水平上验证了2-DE结果,RT-PCR检测出两组间mRNA水平也存在差异,但不显著,免疫组织化学检测显示HSP27主要定位于肝细胞胞浆内。结论HCC转移与多种蛋白表达相关,其中HSP27高表达可能在转移中发挥作用,可能为潜在的判断HCC 转移的分子标记或控制转移的治疗靶点。

不同转移潜能人肝癌细胞系的差异表达蛋白质组分析及意义

目的 比较研究转移性肝癌细胞系中蛋白质表达谱的改变 ,筛查在转移中起重要作用的关键蛋白质分子。方法 用双向电泳 (2 DE)及液相色谱 电喷雾 串联质谱 (LC ESI MS/MS)对 3种不同转移潜能人肝癌细胞系Hep3B、MHCC97L、MHCC97H的差异蛋白质组进行分析。结果 Hep3B、MHCC9TL和MHCC9TH分别平均检测到 976± 112个蛋白点 (n =3)、10 92± 4 0个蛋白点 (n =3) ,和 888± 15个蛋白点 (n =3) ,以其中MHCC97L图谱为参考胶 ,Hep3B、MHCC9TL和MHCC9TH分别与其匹配的平均匹配点数为 6 37± 37个 (n =3)、771± 16个 (n =2 )和 5 89± 5 1个 (n =3) ,平均匹配率分别为6 5 7% ,72 1% ,6 6 2 %。不同胶间蛋白质斑点的位置偏差 [等电聚焦 (IEF) ]方向为 (2 95± 0 95 )mm ,聚丙烯酰胺凝胶电泳方向为 (2 87± 0 88)mm。Hep3B、MHCC97L、MHCC97H中有 35 9个蛋白质点匹配。与Hep3B比 ,MHCC97L有 10 3个点未匹配 ,相差 10倍以上的上调点和下调点分别为 5 7个和 4 9个 ;MHCC97H有 113个点未匹配 ,相差 10倍以上的上调点有 4 7个 ,相差 10倍以上的下调点有 5 2个。质谱可鉴定出S10 0A4 ,S10 0A6 ,S10 0A11,Annexin1等 2 6种胶内差异蛋白质。结论 与不转移肝癌细胞相比 ,转移性肝癌细胞有明显的差异性蛋白表达谱?

不同转移潜能人肝癌细胞系酪氨酸磷酸化蛋白质差异分析

目的研究不同转移潜能人肝癌细胞系中酪氨酸磷酸化蛋白质表达的差异并筛查与肝癌转移相关的酪氨酸磷酸化蛋白质分子。方法应用双电泳(2-D E)、免疫印迹法及基质辅助激光解析电离飞行时间质谱分析,对三种不同转移潜能人肝癌细胞系Hep 3B、MHCC97L和MHCC97H进行酪氨酸磷酸化蛋白质组分析。结果对照2-DE胶和免疫印迹发光胶片,Hep3B检测到10个点,MHCC 9 7L检测到19个点, MHCC97H检测到17个点。经质谱鉴定,得到膜连蛋白Ⅰ等19个差异点。结论细胞内酪氨酸磷酸化蛋白的表达差异与肝癌的侵袭转移有关。

肝癌细胞分泌蛋白质的多种提取方法比较

由于分泌蛋白在重大生理和病理过程中的重要角色和功能,使得分泌蛋白质组的研究备受人们关注.高效提取分泌蛋白质是分泌蛋白质组学研究的第一步,也是关键的一步.本研究首次比较了3种常用的提取方法:超滤法、沉淀法和透析法.以具有高自发性转移潜能的人肝癌细胞系LM3为研究对象,采用3种方法平行提取分泌蛋白,发现超滤法的提取效率最高;蛋白质经过溶液酶解,在线的一维反相高效液相色谱分离和ESI-MS/MS质谱鉴定,共鉴定了360个非冗余蛋白,其中有34,110和29个蛋白分别只在超滤法、沉淀法和透析法提取的样品中被鉴定到,沉淀法占优势,3种方法互相补充.360个蛋白中,有42个分泌蛋白为首次被鉴定到,扩大了已有的人肝癌转移细胞分泌蛋白数据库.

具核梭杆菌具核亚种蛋白质组及其在癌症pH环境下的差异蛋白质组分析

利用LC-MS/MS对F.nucleatum的蛋白质表达谱进行了深入研究,共鉴定到1198个蛋白质的表达,占基因组58%的编码基因.通过在p H 6.5(癌症组织p H环境)和p H 7.5(正常组织p H环境)两种条件下F.nucleatum蛋白质表达的定量蛋白质组学分析,发现处于癌症微环境p H条件下蛋白质表达的变化明显集中于金属离子转运,硫胺素代谢,糖代谢等过程和功能.产丁酸发酵的能量代谢通路中的七个代谢酶在蛋白质组数据中找到,其中有五个在癌症p H条件下显著下调,这五个酶包含了丁酸盐代谢的整个过程,这为结直肠癌患者肠道丁酸盐含量降低提供了新的证明.此外,癌症p H条件下F.nucleatum的丁酸代谢受到抑制,造成产丁酸能力下降,可能是其促进结直肠癌发展在代谢水平上的原因之一.

表达蛋白质质谱分析

对基因编码的蛋白质进行系统分析可以为注释基因组信息和研究疾病发生机理提供参考.质谱因其高通量、高灵敏度和高精度等特点成为蛋白质表达谱研究的核心技术.过去10年,质谱技术的发展大大促进了蛋白质表达谱的研究.本文综述了蛋白质表达谱的定性和定量研究进展,并展望了进一步的研究方向.