微生物脂肪酶的研究进展及其在食品工业中的应用

脂肪酶(EC3.1.1.3)是一类可以水解长链甘油三酯的水解酶。脂肪酶在动物、植物和微生物中广泛存在,而微生物中脂肪酶的种类多,作用温度范围较广且底物特异性高,可用于生产高纯度的酶制剂。目前,微生物脂肪酶作为一种重要的工业酶,在传统工业和新型的产业中都有广泛的应用,一直是行业中的研究热点。对微生物脂肪酶的种类、结构、催化机理、固定化和在食品工业中的应用进行了概述,并对其未来的发展进行了展望。

H因子结合蛋白单克隆抗体的制备及ELISA法含量检测初探

目的:制备B群脑膜炎球菌H因子结合蛋白A(fHBP A)和H因子结合蛋白B(fHBP B)亚家族的单克隆抗体,建立检测fHBP抗原含量的ELISA方法。方法:重组表达并纯化fHBP A(His)和fHBP B(His)标签蛋白免疫小鼠,将小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,筛选3株稳定分泌抗fHBP单克隆抗体的细胞株A,B和AB。以抗AB为一抗,辣根过氧化物酶标记抗A、抗B为二抗,分别建立检测fHBP A和fHBP B的双抗夹心ELISA方法。结果:3种单抗效价均在4.4×10^(5)~8.8×10^(5),Western Blot及ELISA显示3种抗体均有结合特异性,且单抗AB和A,B对应不同的抗原识别位点,相互独立。双抗夹心ELISA方法灵敏度达到10 ng·mL^(-1),变异系数<10%。结论:采用单克隆抗体检测fHBP抗原的ELISA方法特异性和适用性良好,为进一步建立快速灵敏检测和鉴定fHBP抗原的方法奠定了基础。

响应面法优化fHBP-A蛋白双水相萃取工艺的探究

目的采用双水相萃取技术对重组B群脑膜炎奈瑟菌H因子结合蛋白A(fHBP-A)进行分离纯化,研究不同双水相萃取体系对fHBP-A粗提纯化的影响,应用响应面法优化fHBP-A在PEG/(NH_(4))_(2)SO_(4)双水相体系中的萃取工艺。方法首先建立PEG 2000/(NH_(4))_(2)SO_(4)、PEG 4000/(NH_(4))_(2)SO_(4)、PEG 6000/(NH_(4))_(2)SO_(4)和乙醇/(NH_(4))_(2)SO_(4)共4种双水相萃取体系相图;然后考察PEG相对分子质量、PEG质量分数、(NH_(4))_(2)SO_(4)质量分数、萃取体系pH这4个因素对fHBP-A萃取率、下相中fHBP-A纯度的影响;最后采用Box-Behnken试验设计以及响应面分析对fHBP-A双水相萃取工艺进行优化。结果确定fHBP-A双水相萃取的最佳工艺条件为PEG 4000质量分数为28%、萃取体系pH为6.0、(NH_(4))_(2)SO_(4)质量分数为13%。此条件下fHBP-A纯度达到68.11%。结论采用优化的工艺可以较好地提取及初步纯化fHBP-A,为进一步fHBP-A的纯化研究奠定基础。