过继性细胞免疫治疗在宫颈癌中的研究进展

宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,复发或转移性宫颈癌5年生存率仅为17%,临床治疗十分棘手;程序性死亡受体1(programmed death-1,PD-1)单抗已用于复发或转移性宫颈癌一线治疗。但PD-1单抗单药治疗存在客观反应率低和易耐药等瓶颈,限制了临床应用。近年来,过继性细胞免疫治疗改变了癌症免疫治疗的格局。过继性细胞免疫治疗主要通过向体内回输具有抗肿瘤活性的免疫细胞,从而达到抗肿瘤的目的。目前过继性细胞免疫治疗主要有3种类型:肿瘤浸润性淋巴细胞、T细胞受体修饰T细胞和嵌合抗原受体T细胞。相关研究表明过继性细胞免疫治疗对改善晚期宫颈癌患者生存及预后具有重要价值。综述过继性细胞免疫治疗的原理、生物学特征、在宫颈癌治疗中的应用及局限性,以期通过优化其生产技术并与其他肿瘤治疗方式联合治疗,为提高宫颈癌免疫治疗疗效提供新的思路。

细胞外基质重塑在肿瘤进展转移中的作用研究进展

细胞外基质(ECM)是肿瘤微环境的重要组成部分,参与调控多种肿瘤的恶性表型。驻留细胞和ECM之间通过细胞—基质相互作用和ECM重塑进行双向交流,从而动态塑造组织结构。肿瘤利用ECM重塑创造促进肿瘤发生和转移的微环境。由肿瘤驱动的改变促进肿瘤生长、增强肿瘤细胞的迁移能力,并重塑远处器官的ECM,以允许肿瘤细胞转移。对于肿瘤及肿瘤相关基质细胞如何沉积、生物化学和生物物理修饰以及降解肿瘤相关ECM深入了解,有助于理解ECM重塑在肿瘤进展和转移中的潜在机制。

肿瘤相关成纤维细胞在妇科恶性肿瘤中的研究进展

肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)是肿瘤微环境(TME)中的重要细胞成分,其来源多样且具有分子和功能异质性。TME是肿瘤赖以生存的内环境,在肿瘤的发生、发展过程中发挥着重要作用。CAFs在TME中可通过分泌多种细胞因子、趋化因子等调控信号通路参与肿瘤细胞的增殖、侵袭、迁移等生物学过程,也可以通过调节免疫细胞为肿瘤细胞的免疫逃逸提供条件。CAFs参与妇科恶性肿瘤的增殖、淋巴结转移和免疫逃逸等过程,靶向CAFs治疗可能改善患者预后。近年来随着CAFs在宫颈癌、卵巢癌、子宫内膜癌中研究的不断深入,探索其发生发展机制有助于妇科恶性肿瘤的治疗。

新形势下检验医学进修生教学质量管理探析

国家越来越重视人才的培养,其中进修生继续教育是目前提高人才队伍素质最主要的方式之一。由于临床工作繁忙及各类学生带教任务繁重,带教教师的精力有限和投入不足,进修生的教学质量不容乐观。武汉大学人民医院检验科开展进修生继续教育教学改革1年有余,前期积累了一定的实践经验,接下来将针对检验医学进修生教学质量管理加强以下几个方面的工作:(1)进修生教学融入思政教育内容;(2)进修生教学制定个性化轮转计划;(3)进修生教学内容增加临床检验诊断路径;(4)进修生教学严格执行每月学习汇报;(5)进修生教学开展带教教师分层培训;(6)进修生教学管理实行导师负责制;(7)进修生教学发挥先进典型的示范教育作用;(8)进修生教学严格实行出科考核。通过以上举措进一步提高进修生教学质量,为进修单位培养优秀检验医学人才。

M2型巨噬细胞在宫腔粘连患者子宫内膜中的浸润情况及与子宫内膜纤维化相关性分析

目的研究宫腔粘连(IUA)患者子宫内膜中M2型巨噬细胞的浸润情况,探讨M2型巨噬细胞与子宫内膜纤维化之间的关系,为IUA的临床治疗提供新思路。方法收集2021年3月至2022年7月于武汉大学人民医院首次确诊并行宫腔镜下粘连分离术的中重度IUA患者子宫内膜30例作为IUA组,收集同期因子宫肌瘤等良性疾病行子宫切除术或因黏膜下肌瘤行子宫肌瘤剔除术患者的子宫内膜30例作为对照组。组织标本制成石蜡切片后分别行HE染色观察子宫内膜形态,Masson染色观察子宫内膜纤维化水平,免疫组化检测纤维化指标α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和α1-Ⅰ型胶原(COL1A1)及巨噬细胞标志物CD68、M2型巨噬细胞标志物CD206等蛋白的表达水平。对α-SMA和COL1A1的表达水平与CD206阳性细胞数进行Pearson相关性分析。结果与对照组相比,IUA组子宫内膜形态紊乱,腺体数目显著减少(P<0.01),纤维化水平显著增加(P<0.01);子宫内膜的α-SMA[(22.43±6.63)%vs.(3.21±1.41)%]和COL1A1[(17.43±3.78)%vs.(3.92±1.25)%]的阳性表达水平均显著升高(P均<0.01);子宫内膜中CD68[(17.73±5.50)个vs.(47.27±5.26)个]和CD206[(12.83±4.69)个vs.(43.47±5.34)个]阳性巨噬细胞数量均显著减少(P均<0.01)。Pearson相关性分析结果显示,IUA组子宫内膜中CD206阳性巨噬细胞数目与α-SMA(r=-0.8987,P<0.0001)和COL1A1(r=-0.9560,P<0.0001)的表达水平呈显著负相关。结论IUA患者子宫内膜中CD206阳性巨噬细胞(M2型巨噬细胞)明显减少并与纤维化相关,可能在IUA患者子宫内膜纤维化的发生发展中起重要作用。

miR-20b-5p与TGFBR2在宫颈癌组织中的表达及意义

目的通过分析miR-20b-5p、TGFBR2在宫颈癌组织中的表达水平及与临床病理特征的关系,探讨miR-20b-5p与TGFBR2在宫颈癌转移中的作用。方法选取2018年1月至2020年10月诊治的58例宫颈癌患者为宫颈癌组,选取同期32例因子宫肌瘤或子宫腺肌症行全子宫切除术患者的正常宫颈组织为对照组。RT-PCR检测2组宫颈组织中miR-20b-5p、TGFBR2 mRNA表达情况,免疫组化及Western blot检测宫颈癌组织中TGFBR2蛋白表达情况,通过在线网站预测miR-20b-5p与TGFBR2的靶向结合位点,并分析两者相关性,讨论两者其在宫颈癌组中表达差异与临床病理特征的关系。结果宫颈癌组中miR-20b-5p表达量显著高于对照组(P<0.01),而宫颈癌组中TGFBR2 mRNA表达量显著低于对照组(P<0.01)。免疫组化及Western blot结果进一步证实TGFBR2在宫颈癌组中表达水平显著低于对照组(P<0.01)。miR-20b-5p表达水平与TGFBR2 mRNA表达水平呈负相关(r=-0.7366,P<0.01)。且miR-20b-5p表达水平与宫颈癌患者的FIGO分期、淋巴结转移相关(P<0.05),与年龄、病理类型、分化程度、肿瘤大小无相关性(P>0.05);TGFBR2表达与宫颈癌患者的分化程度、FIGO分期、淋巴结转移相关(P<0.05),与年龄、病理类型、肿瘤大小无相关性(P>0.05)。结论miR-20b-5p与TGFBR2的异常表达可能参与了宫颈癌的发生发展,且两者存在密切联系,可能作为宫颈癌淋巴转移和预后的标志物。

湖北地区4819例HPV感染亚型分布及差异分析

目的 探讨湖北地区4 819例HPV感染亚型分布及差异分析。方法 选取2022年2-12月在武汉大学人民医院就诊并进行脱落细胞标本HPV 27种基因分型检测的患者共4 819例患者,其中男性277例,女性4 542例,男性年龄18~86岁,女性年龄16~85岁。采用流式荧光杂交分型检测方法对其进行27种HPV亚型检测。结果 男性患者HPV6、11、42、52、53、58、61、68感染率与女性患者比较,差异有统计学意义(P<0.05),其中HPV6、11感染率高于女性患者(P<0.05),均为低危型HPV亚型;而HPV42、52、53、58、61、68感染率低于女性患者(P<0.05),其中HPV52、53、58、68为高危型HPV亚型,42、61为低危型HPV亚型。男性单纯低危型HPV感染率、多重风险混合型HPV感染率明显高于女性,而单重单纯高危型HPV感染率、总单纯高危型HPV感染率明显低于女性,差异有统计学意义(P<0.05)。单纯高危型HPV感染和多重风险混合型HPV感染以中年人感染居多。结论 湖北地区男性与女性HPV感染具有差异,男性HPV感染倾向于低危型,而女性HPV感染倾向于高危型,且均集中于中年感染。

BALB/c小鼠精原干细胞体外长期培养和鉴定

目的：建立小鼠精原干细胞长期培养体系，探讨精原干细胞体外增殖分化的关键因子。方法：收集出生4～6dBALB／c绿色荧光小鼠睾丸，采用改良的两步消化法获得细胞悬液，种植到铺有明胶的培养皿中，分别于种植后1、5、24h通过差速贴壁法去除体细胞，获得高度纯化的精原干细胞，种植到丝裂霉素C处理的小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上培养。基础培养液为StemPro-34SFM干细胞培养液并补充15种添加成分；添加20ng／ml大鼠胶质细胞源神经营养因子（GDNF）、10ng／ml碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和200ng／mlDDNF受体α1（GFRM）促进精原干细胞增殖。分别采用免疫荧光染色和RT—PCR检测精原干细胞已知抗原和标志性基因的表达。结果：饲养层上培养3～4d后精原干细胞增殖形成典型的克隆，为边缘不清楚的团块状；小鼠精原干细胞能在该培养体系中稳定传代培养达3个月。免疫荧光共聚焦显微镜观察示Oct-4特异性表达在培养的精原干细胞核上；而GFRM显著表达在培养的精原干细胞膜表面；RT—PCR也证实培养的精原干细胞表达Oct-4、GFRal、Sox2和c—Ret等象征未分化精原细胞的标志基因。结论：BALB／c小鼠精原干细胞可在体外长期培养（3个月），该培养体系的建立将为研究精原干细胞增殖分化调控机制及精原干细胞移植治疗男性不育奠定基础。

高浓度盐的摄入对认知功能影响的研究进展

盐是世界上大多数现代饮食中普遍存在的成分,世卫组织的建议(<5 g/d盐)[1]。饮食中钠的主要来源是作为调味品的食盐。我国的钠摄入量是世界上最高的,根据2015年的研究显示我国成年人的钠摄入量中位数为3960 mg/d,相当于10 g/d的食盐摄入量[2]。世界上其他国家食盐摄入量也处于高位水平,例如日本(11 g/d)[3]、印度(9.45~10.41 g/d)[4]、澳大利亚(9.6 g/d)[5]。随着高盐摄入对疾病影响的研究进一步深入.

过表达人抗菌肽LL37腺病毒构建及转染阴道上皮细胞

背景:LL-37作为唯一存在人体的抗微生物肽,不仅能促内皮细胞增殖,而且具有较强的促进血管生成能力,在组织修复初期的血管生成中起重要作用。目的:构建过表达人抗菌肽LL37基因的重组腺病毒,体外转染犬阴道上皮细胞,检测抗菌肽LL37的表达和分泌情况。方法:PCR法扩增LL37基因片段,构建融合绿色荧光蛋白(EGFP)和LL37的重组腺病毒表达质粒,限制性内切酶酶切和测序法鉴定构建的重组腺病毒表达质粒,采用HEK293包装后反复冻融扩增、纯化过表达LL37的腺病毒,终点稀释法检测腺病毒滴度。体外分离培养犬阴道上皮细胞,转染过表达LL37腺病毒,分别于转染后1,2,3,5和7 d采用荧光显微镜观察细胞转染情况,ELISA法测定细胞培养上清液中LL37的分泌表达情况。结果与结论:1限制性内切酶酶切鉴定与DNA测序证实成功构建了GV314-LL37腺病毒表达载体,包装纯化后腺病毒滴度达到3×109 pfu/m L;2犬阴道上皮细胞可在体外成功分离培养并稳定传代;3过表达LL37腺病毒可高效转染阴道上皮细胞,转染24 h后荧光显微镜下即可见绿色荧光蛋白表达,随时间延长表达逐渐增强,转染72 h时表达最强,转染效率达89%;4ELISA证实阴道上皮细胞转染过表达LL37腺病毒后表达分泌LL37,转染后细胞培养上清中LL37表达量显著高于空白组,表达呈时间依赖性,转染3 d表达最强,转染后7 d仍持续分泌表达;5结果说明,成功构建了过表达人抗菌肽LL37基因的重组腺病毒,转染犬阴道上皮细胞后高效表达分泌LL37,为构建具有抗感染能力和促血管生成的功能性组织工程化阴道奠定了基础。

犬阴道上皮细胞和平滑肌细胞可在体外长期稳定培养

背景:体外分离培养获得足够活性良好的种子细胞是构建阴道组织工程的关键。文献报道阴道上皮细胞体外纯化培养和传代较为困难,尤其是体外长期培养犬等大动物的阴道种子细胞尚未见报道。目的:建立体外稳定培养犬阴道上皮细胞和平滑肌细胞方法。方法:获取犬小块阴道组织,机械分离阴道黏膜上皮,Dispase酶和胰蛋白酶分步消化收集上皮细胞,接种于无血清角化细胞培养液中培养和传代;机械分离阴道平滑肌组织后采用Ⅱ型胶原酶消化获得平滑肌细胞,在含体积分数10%胎牛血清的DMEM培养液中连续培养传代。动态观察上皮细胞和平滑肌细胞生长增殖情况,分别采用特异性抗体行细胞免疫化学染色鉴定。结果与结论:原代培养的上皮细胞24-36 h后开始贴壁铺展,四五天后呈对数生长,七八天可达70%融合,为单一的上皮细胞,呈典型铺路石样,未见成纤维细胞混杂。每四五天可传代1次,连续传代六七次,细胞免疫化学染色角蛋白AEl/AE3抗体阳性。平滑肌细胞原代培养24 h后贴壁呈梭形,此后呈对数生长,4 d后融合呈典型的"峰和谷"样,每三四天可传代1次,连续传代七八次,细胞免疫化学染色示α-肌动蛋白染色阳性。结果证实,犬阴道上皮细胞和平滑肌细胞可在体外长期稳定培养,可为体外构建组织工程化阴道提供足够的种子细胞。

上调蛋白磷酸酯酶2A水平可显著抑制宫颈癌细胞迁移

目的:探讨蛋白磷酸酯酶2A(PP2A)在宫颈癌迁移中的作用。方法:培养Hela宫颈癌细胞,通过药物或质粒转染干预PP2A水平。药物实验中将Hela细胞分为3组,即正常对照组(DMSO处理,n=6),DES组(10nM PP2A激动剂DES处理,n=6)和OA组(10nM PP2A抑制剂OA处理,n=6);质粒转染实验中将Hela细胞分为DsRed-vector组(n=6),DsRed-PP2Ac组(n=6)和DsRed-siPP2Ac组(n=6),按分组要求转染相应质粒。采用划痕实验观察各组不同时间点(药物0h、24h、48h;转染0h、48h)Hela细胞迁移情况并比较组间差异。结果:药物或基因上调PP2A可显著抑制宫颈癌细胞的迁移,而药物或基因下调PP2A水平则明显促进宫颈癌细胞的迁移。结论:PP2A在宫颈癌的发展中起重要的作用,该研究可为宫颈癌的发展提供新的分子机制,亦可为宫颈癌临床药物的开发提供新的靶点。

基于课堂问卷调查的PDCA循环在提高妇产科学课堂教学质量中的作用

目的进一步提高妇产科学课堂教学质量,提升本科生学习兴趣。方法设计一份同时针对授课教师和学生的在线问卷,然后选取武汉大学2017级“5+3”学制学生为研究对象,每次课堂采用问卷星的形式及时进行问卷调查,通过对问卷调查结果进行分析总结,提出合理的改进措施,并及时将改进工作融入下一次课堂,以此形成质量改进循环(PDCA)。年终将PDCA改进后的2017级“5+3”学制与未改进的2016级“5+3”学制学生学习效果进行比较,观察学生学习状况是否有所改善。结果2017级“5+3”学制学生对教师提问、学习方法、重难点掌握、多媒体使用等不满意的比例明显下降,且结果有统计学意义;对多媒体及学习方法很满意的学生比例明显上升;课堂上更喜欢与教师互动的学习方式,且课外善于通过微信与教师沟通,学习成绩显著提高。此外,学生对教师的内在素质(穿着与精神状态、知识面及涵养等)也较为关注。结论实施基于课堂问卷调查的PDCA循环后,2017级“5+3”学制学生妇产科学教学质量显著提高,该教学模式可推广应用于其他学科教学。

组织工程技术在泌尿外科的应用

介绍组织工程学基础和临床应用。利用此技术重建修复尿道和治疗膀胱输尿管反流已初步用于临床,但尚有很多科学问题需要进一步研究解决。

血清HE4、CA125和CA199联合检测对卵巢癌早期诊断的临床研究

目的探讨血清人附睾蛋白4(HE4)、糖类抗原125(CA125)和糖类抗原199(CA199)联合检测在卵巢癌早期诊断中的价值。方法选取武汉大学人民医院妇产科2014年6月至2016年8月收治入院患者的临床资料,依据术后组织病理报告结果,将患者分为卵巢癌组和卵巢良性肿瘤组,其中卵巢癌患者90例,卵巢良性肿瘤患者94例,同期选取该院体检中心体检的健康女性98例作为健康对照组。该研究采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清HE4水平,采用化学发光法检测血清CA125和CA199水平。结果与健康对照组比较,卵巢癌组中血清HE4、CA125、CA199水平均显著升高,差异有统计学意义(P<0.01),其中HE4和CA125水平升高更为明显。与卵巢良性肿瘤组比较,卵巢癌组HE4、CA125水平显著升高,差异有统计学差异(P<0.01),CA199轻度升高(P<0.05)。与健康对照组比较,卵巢良性肿瘤组中CA125、CA199水平亦有明显升高(P<0.05)。相关性分析结果显示,卵巢癌组中HE4、CA125和CA199 3个检测指标间均有较强相关性,差异有统计学意义(P<0.01)。在卵巢癌单项标志物检测中,血清CA125的灵敏度最高(87.8%),而血清HE4的特异度最高(95.7%)。血清HE4、CA125和CA199联合检测的灵敏度最高(96.7%),而特异度较差(61.0%)。结论血清HE4、CA125和CA199联合检测可显著提高卵巢癌检出率,但特异度尚需结合其他实验室检查综合分析诊断。

机械力对女性阴道前壁成纤维细胞骨架及凋亡的影响

目的:探讨机械力对人阴道前壁成纤维细胞骨架及凋亡的影响,分析两者的相关性。方法:采取改良酶消化法获得人阴道前壁成纤维原代细胞,并进行成纤维细胞鉴定,对非SUI患者阴道前壁成纤维细胞进行周期性力加载,采用鬼笔环肽染色及流式细胞术检测非SUI组、SUI组、非SUI加力组患者的阴道前壁成纤维细胞的actin细胞骨架和细胞凋亡的情况,并对3组细胞的actin细胞骨架和凋亡进行相关性分析。结果:SUI组患者的成纤维细胞凋亡率和actin细胞骨架的破坏程度均高于非SUI组,对非SUI组患者成纤维细胞加载周期性机械力后其细胞凋亡率和actin细胞骨架破坏程度增加。相关性分析发现,SUI组和非SUI加力组的细胞凋亡率与actin细胞骨架的完整度呈负相关。结论:成纤维细胞凋亡和actin细胞骨架的破坏可能均参与了SUI的发生发展,且两者可能存在一定内在联系。

7746例妇女宫颈脱落细胞HPV基因分型结果研究

目的了解湖北省人民医院就诊的女性患者人乳头瘤病毒(HPV)基因亚型及年龄分布,并对HPV感染特征进行统计分析。方法对2016年1月6日至2017年1月12日在湖北省人民医院就诊的7 746例女性患者的宫颈脱落细胞样本进行HPV感染基因分型检测。结果 7 746例女性患者标本,检出HPV阳性1 336例,总阳性率为17.2%;HPV感染的各亚型分布中感染频率前8位依次为HPV16型、HPV52型、HPV58型、HPV53型、HPV81型、HPV18型、HPV39型、HPV56型;单一亚型感染1076例,占80.5%;二重感染202例,占15.1%;三重感染47例,例占3.5%;四重感染及以上11例,占0.9%;HPV总感染率及中高危亚型感染率随年龄的增长而升高,低危亚型感染率随年龄的增长呈下降趋势;比较不同年龄组HPV感染检出率,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HPV基因亚型基本符合亚洲人群分布规律,HPV高危亚型感染年龄主要分布在40岁以上。

妇产科教学中CPPT模式初步探索

目前我国传统的医学教学模式已不能适应当代社会发展的要求,这迫切需要我们探索新的教学模式,进行课程体系、教学方法、教学理念等方面的改革,以适应全球化发展的要求。文章就一种新型的教育模式CPPT在妇产科教学中的运用进行系统地介绍和初步地解析。

出血性放射性膀胱炎合并膀胱自发性破裂的诊治分析

目的探讨出血性放射性膀胱炎合并膀胱自发性破裂的临床特点和诊治方法。方法分析12例急诊膀胱破裂修补术后诊断为出血性放射性膀胱炎的临床资料、术后治疗手段和程序。结果 12例患者均存在盆腔放疗史,术前存在膀胱血块梗阻8例,有憋尿史4例。术中均发现膀胱壁广泛不规则增厚,病检提示膀胱慢性炎症。术后1～2周内,10例再发膀胱大量出血,给予膀胱灌注1%甲醛。3例治愈,7例因严重出血膀胱内血块引起排尿困难,给予电切镜下膀胱血块清除术加膀胱壁广泛电凝止血后,出血控制。术后给予高压氧治疗后治愈。近期2例于膀胱修补术后早期给予高压氧治疗,未发生再发出血。结论膀胱自发性破裂术中发现膀胱壁病变、有盆腔放疗史的患者,应高度怀疑出血性放射性膀胱炎的可能,术后再发膀胱出血率高,治疗可分步骤进行。术后早期给予高压氧治疗对预防再发出血是必要的。

宫颈癌患者宫颈组织中PP2A水平的研究

目的探讨宫颈癌患者肿瘤组织中蛋白磷酸酶2A(PP2A)水平变化。方法分别选取正常对照组45例,宫颈癌患者35例。首先采用上海透镜人类乳头瘤病毒(HPV)分型试剂盒检测两组人群宫颈脱落细胞HPV感染情况;然后进一步采集宫颈组织(对照组10例,宫颈癌组8例)进行深入研究。采用酶活试剂盒检测组织PP2A酶活性,进一步采用RT-PCR技术检测PP2A在组织中的基因表达水平。结果宫颈癌患者高危型HPV感染率为94.29%,显著高于对照组(4.44%,P<0.01);肿瘤组织中PP2A酶活性显著下调。RT-PCR检测结果发现宫颈癌组织中PP2A mRNA表达水平显著低于对照组。结论高危型HPV感染是宫颈癌发生最主要的病因。宫颈癌患者肿瘤组织PP2A酶活性和基因表达均显著下调,提示PP2A在宫颈癌的发生中起重要作用。