四株鳖源致病性嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)的表型、分子鉴定及其毒力基因检测

采用生态毒理学、表观分类学及分子生物学方法,对具白底板病典型症状濒死中华鳖内脏中分离获得的4株病原菌开展了以致病性、表型分析、分子鉴定及毒力基因检测为内容的实验研究,结果表明:(1)4株病原菌均具致病性,致死力由大到小依次为ZHYYZ-2、ZHYYZ-4、ZHYYZ-1、ZHYYZ-3;(2)4株病原菌均为呈短杆状、具溶血活性的革兰氏阴性细菌,VITEK2型全自动细菌鉴定与药敏系统和ATBExpression型细菌鉴定与药敏智能系统均显示为嗜水气单胞菌;(3)ZHYYZ-1、ZHYYZ-2、ZHYYZ-3、ZHYYZ-4的16SrDNA序列长度分别为1460、1464、1466、1461,经Blast同源性检索表明它们所扩增的16SrDNA序列与GenBank数据库中登记的71株嗜水气单胞菌的相似性均为99%;(4)经PCR特异性检测,各实验菌均含有Aha、AHH、AerA和OMP。根据4株实验菌的表型和分子生物学特征,判定它们均为气单胞菌属的致病性嗜水气单胞菌。

注射鳖源致病性嗜水气单胞菌ZHYYZ-1引发中华鳖(Trionyx sinensis)稚鳖感染和致死的定量研究

以20日龄中华鳖稚鳖为实验动物,采用静水停食实验法,在水温(27.4±1.3)℃、pH7.1条件下,进行了注射鳖源嗜水气单胞菌ZHYYZ-1引发中华鳖稚鳖感染和致死的定量实验研究。结果表明:(1)该菌为高致病性菌株,异常排泄是该菌致稚鳖表露临床感染症状的重要标志;(2)注射该菌引起稚鳖感染与致死具明显的剂量—时间效应,随注射菌量递增依次出现不表露临床感染症状、表露临床感染症状而不出现死亡和大量死亡三种情形,稚鳖表露临床感染和出现死亡的时间均随注射菌量增大而明显缩短,绝大多数稚鳖表露临床感染和出现死亡的时限分别为2h和48h;(3)濒死稚鳖体内该菌的底限含量为3.3×106CFU/g,稚鳖体内菌注射含量可控安全范围为(1.2—8.8)×103CFU/g。

宽鳍鱲仔稚鱼发育

经干法授精及在人工培育条件下观察了宽鳍鱲仔稚鱼发育过程及特征。结果表明,宽鳍鱲受精卵平均直径为2.11±0.11 mm,在水温26~27℃条件下,宽鳍鱲仔稚鱼发育历时25 d。初孵仔鱼全长为5.29±0.14 mm,卵黄囊长为4.01±0.18 mm,孵化后120 h卵黄囊消失,营外源性营养;孵化后14 d仔鱼开始出现二室鳔及背鳍;孵化后17 d仔鱼各鳍鳍条发育基本完成;孵化后19 d仔鱼开始出现鳞片,进入稚鱼期;孵化后25 d稚鱼全长16.54±0.24 mm,全身鳞被,外部形态与成鱼基本相似,进入幼鱼期;宽鳍鱲仔稚鱼全长与日龄的线性方程为L=0.3954 t+5.9978(R^(2)=0.9819);体重和体长的幂函数方程为W=0.0024 L3.9114(R^(2)=0.9671),幂指数大于3,表明宽鳍鱲仔稚鱼生长为异速生长。

离水停食胁迫对中华鳖(Trionyx sinensis)翻身能力、血清生化、裙边质构及脏器相关功能酶活力的影响

中华鳖(Trionyx sinensis)历来有活品消费的习惯,离水停食是其批量销售环节必须承受的胁迫。因此,探究离水停食对其商品价值的影响过程与机制,对于明确其活体销售货架期具有重要指导价值和现实意义。以2020年5月20日同池起捕后离水停食处理0 d(S_(0)实验组)、4 d(S_(4)实验组)、8 d(S_(8)实验组)、12 d(S_(12)实验组)、16 d(S_(16)实验组)的雄性商品鳖[平均体质量(546.86±94.70)g]为研究对象,在常温条件下较系统开展了离水停食对其翻身能力、血清生化、裙边质构及脏器酶活力的影响研究。结果表明:(1)实验鳖连续翻身次数呈S_(4)≈S_(8)>S_(0)≈S_(12)≈S_(16),且均主要集中于1 min内;(2)血清TP、ALB、TC、LDL-C均无组间差异(P>0.05),GLU-O呈S_(0)≈S_(4)≈S_(8)≈S_(12)>S_(16),TG和HDL-C除S_(4)、S_(8)的TG含量小于S_(0)(P<0.05),S_(12)的HDL-C含量大于S_(0)(P<0.05)外,其余实验组间均无差异(P>0.05);(3)所测7项裙边质构指标中,仅硬度与连续翻身次数的排序完全重合,均呈S_(4)≈S_(8)>S_(12)≈S_(16);(4)肝脂肪酶和胃蛋白酶活力分别呈S_(4)>S_(0)≈S_(8)≈S_(12)≈S_(16)和S_(0)≈S_(16)>S_(4)≈S_(8)≈S_(12),肠淀粉酶活力除S_(16)实验组显著大于S_(0)、S_(4)(P<0.05)外,其余均无组间差异(P>0.05);(5)肝脏ATP酶和抗氧化酶活力随离水停食时间的延长总体上均呈阶梯式上升趋势,心脏抗氧化酶活力总体上在离水停食0~4 d、4~12 d、12~16 d分别呈下降、稳定和上升趋势,肺抗氧化酶活力总体上在0~4 d、4~8 d、8~12 d和12~16 d依次呈上升、下降、稳定和再次上升的趋势,S_(4)、S_(8)和S_(12)间在各脏器抗氧化酶活力值排序上明显表露错位的仅为脾脏GSH-PX,呈S_(4)<S_(12)<S_(8)(P<0.05)。研究结果可为中华鳖的生理生态研究和活销货架期的编制提供基础资料。

三种养殖模式下日本鳗鲡(Anguilla japonica)养成品体色和肌肉品质的差异

随机选取池塘专养(M1)、日本沼虾套养(M2)以及水库放养(M3)三种养殖模式养成的肛长(25.91±3.26)cm的日本鳗鲡作为研究材料,比较研究了三者间在表皮色差、背肌组织物理特性和肌肉营养成分组成及含量上的差异。结果表明:(1)M1表皮色差与M2、M3均具显著差异(P<0.05),三者背、腹间的体色差异程度呈M1>M2>M3(P<0.05);(2)背肌物性指标中均具显著差异的为粘着性、弹性和回复性,前者测定值呈M1>M3>M2(P<0.05),后两者均呈M3>M1>M2(P<0.05),M3背肌最发达,M1纵肌肌束纤维排列较M2紊乱;(3)肌肉营养成分中仅水分和灰分含量均具显著差异,依次呈M3>M1>M2(P<0.05)和M3>M2>M1(P<0.05),蛋白质含量高于脂肪含量的仅为M3;(4)三者间肌肉脂肪酸、氨基酸组成均完全相同,含量排序也均基本一致,但多种不饱和脂肪酸含量却均具显著差异(P<0.05)。

受短期饥饿胁迫下麦瑞加拉鲮鱼(Cirrhina mrigola)幼鱼的生长、肌体组分及其内脏消化酶活力的变化特征

以麦瑞加拉鲮鱼幼鱼为实验动物,进行短期饥饿对其生长、肌体组分及内脏消化酶活力的影响实验。结果表明,随着饥饿时间的延长,麦瑞加拉鲮鱼幼鱼各生长参数观测值,体内粗脂肪、碳水化合物和粗蛋白的含量以及能值均逐渐减小或减少;实验期间体内各组分的同期相对损失率以粗脂肪和碳水化合物为最高,且粗脂肪降幅高峰的出现时段总早于碳水化合物,而粗蛋白的消耗量和损失率则一直处于较低的水平。淀粉酶活力的损失量均高于同期其他消化酶,蛋白酶活力在13—16天间出现反弹现象,其第16天的酶活力值与实验起始值相当。

4种重金属离子对中华鳖(Trionyx sinensis)稚鳖的急性致毒效应

以5日龄中华鳖稚鳖为实验动物,采用静水停食实验法,在水温(27.4±1.3)℃条件下,开展了Hg2+、Cr6+、Cu2+、Zn2+对中华鳖稚鳖的急性毒性和加和等毒性强度联合毒性试验。结果表明,4种重金属离子对中华鳖稚鳖均呈现以蓄积为主导的急性毒发效应,Cr6+、Zn2+对中华鳖稚鳖的急性致毒高峰期明显滞后于Hg2+、Cu2+;4种重金属离子毒性大小依次为Hg2+、Cu2+、Cr6+、Zn2+,其对中华鳖稚鳖96h的半致死质量浓度分别为5.98、16.42、28.90和91.88mg/L;所构建的中华鳖稚鳖累积死亡概率与重金属质量浓度和实验时间之间的数学模型,以及半致死时间-质量浓度回归方程,可作为侦查和分析重金属离子排放时间和致中华鳖稚鳖大量死亡时间的重要计算工具;Hg2+、Cr6+、Cu2+、Zn2+离子两两组合在加和等毒性强度下对中华鳖稚鳖96h联合急性毒性所呈现的致毒特征与离子种类及其毒性强度匹配情形密切相关。

水库放养模式下日本鳗鲡养成品形态性状对体重和净体重的影响效应

随机选取25尾水库放养模式养成的同生群日本鳗鲡为研究对象,逐一测量其全长(X_1)、肛长(X_2)、头长(X_3)、吻长(X_4)、下颌长(X_5)、头高(X_6)、肛部体高(X_7)、头宽(X_8)、眼间距(X_9)、肛部体宽(X_(10))、肛围(X_(11))、体重(BW)、净体重(NW)等13项表型性状后,采用相关分析、通径分析和偏回归分析方法研究了日本鳗鲡形态性状对体重和净体重的影响效应。结果表明:(1)所测11项形态性状与体重、净体重的相关系数均达到显著水平(P<0.05);(2)经通径分析,被保留的肛部体宽(X_(10))、肛长(X_2)、头宽(X_8)、全长(X_1)和下颌长(X_5)等5项形态性状对体重、净体重相关指数分别为0.985和0.986。其中,对体重和净体重的直接作用均以肛部体宽(X_(10))为最大,分别为0.545和0.527,对体重和净体重产生的间接作用均以头宽(X_8)为最大,分别为0.715和0.699;(3)经多元回归分析,建立被保留的形态性状与体重和净体重间的回归方程分别为BW=17.669X_(10)+1.785X_2+8.292X_8+0.153X_1=13.900X_5-658.897和NW=15.505X_(10)+1.643X_2+8.209X_8+0.139X_1-12.030X_5-606.031。

4种消毒剂对麦瑞加拉鲮鱼幼鱼的急性毒性研究

2005年7～8月在浙江省余姚市青港野生苗种场，以体长（4．92±0．44）cm的麦瑞加拉鲮鱼幼鱼Cirrhina mrigola为实验动物，开展鱼安、二溴海因、菌毒清和溴氯海因等4种消毒剂对该鱼幼鱼的急性毒性试验。结果表明，鱼安、二溴海因、菌毒清和溴氯海因对麦瑞加拉鲮幼鱼的急性致毒时限为8h；鱼安对麦瑞加拉鲮鱼幼鱼2、4、6、8h的半致死浓度分别为16．070、16．267、15．780和15．687mg／L；二溴海因对麦瑞加拉鲮鱼幼鱼2、4、6、8h的半致死浓度分别为42．750、41．673、41．171和40．283mg／L；溴氯海因对麦瑞加拉鲮鱼幼鱼2、4、6、8h的半致死浓度分别为19．066、16．565、17．676和16．966mg／L；菌毒清对麦瑞加拉鲮鱼幼鱼2、4、6、8h的半致死浓度分别为6．267、5．785、5．451和5．451mg／L。麦瑞加拉鲮鱼幼鱼对鱼安、二溴海因、溴氯海因和菌毒清8h安全质量浓度分别为1．569、4．028、1．697和0．545mg／L，4种常用消毒剂的毒性大小依次为菌毒清、鱼安、溴氯海因和二溴海因。最后，还就鱼安、二溴海因、菌毒清和溴氯海因对麦瑞加拉鲮鱼幼鱼有效急性致毒实验时间的确定及其急性致毒效应特征，药物毒性蓄积系数MAC公式的解释与应用、诸药物间的致毒效果比较及其安全使用等进行了探讨．

中华鳖Trionyx sinensis(Wiegmann)对泥鳅Misgurnus anguillicaudatus(Cantor)幼鱼的捕食效应

以规格6m×4m×1.2m的室内水泥池为实验单元,A[(37.53±7.72)mm]、B[(63.13±12.95)mm]肛长组泥鳅幼鱼为猎物,采用捕食者-猎物间捕食效应研究方法,研究了中华鳖对泥鳅幼鱼的捕食效应。结果表明:(1)中华鳖捕食泥鳅幼鱼的时段主要集中于00:00—4:00,其对A肛长组泥鳅幼鱼所具的捕食选择性与A、B肛长组间初始数量的配置比例无关;(2)中华鳖捕食泥鳅幼鱼的功能反应属Holling-Ⅱ型,其对A、B肛长组泥鳅幼鱼的理论最大捕食量分别为16.13ind/d和9.06ind/d;(3)中华鳖对A、B肛长组泥鳅幼鱼的种内干扰模型可分别由各自的指数方程表达,用来描述实验鱼初始数量、实验期间实验鱼被捕食数量以及中华鳖个数等参数的统计关系,并指导确定合理的中华鳖和泥鳅的初始放养数量。

3种常见农药对中华鳖稚鳖的急性致毒效应研究

以5～7日龄的中华鳖稚鳖为试验动物,采用静水停食实验法,在水温(27.4±1.3)℃条件下,开展了乐果、三唑磷、氟虫腈对中华鳖稚鳖的急性毒性试验。结果表明,3种农药对中华鳖稚鳖均呈现以蓄积为主导的急性毒发效应,乐果对中华鳖稚鳖的急性致毒高峰期略滞后于三唑磷和氟虫腈;3种农药毒性强度大小依次为三唑磷、氟虫腈、乐果,其对中华鳖稚鳖96 h的半致死质量浓度分别为0.28μg/L、0.28 mg/L和124.4 mg/L;所构建的中华鳖稚鳖累计死亡概率与质量浓度和实验时间间数学模型和半致死时间—质量浓度回归方程可作为侦查和分析农药排放时间和致中华鳖稚鳖大量死亡时间的重要计算工具。

3种常见有机磷农药对麦瑞加拉鲮鱼幼鱼的急性毒性

开展了三唑磷、乙酰甲胺磷、增效水胺硫磷对麦瑞加拉鲮鱼幼鱼的急性毒性试验,结果表明:三唑磷对麦瑞加拉鲮鱼幼鱼24h,48h,72h,96h的半致死浓度分别为0.080mg/L,0.065mg/L,0.060mg/L,0.050mg/L;乙酰甲胺磷对麦瑞加拉鲮鱼幼鱼24h,48h,72h,96h的半致死浓度分别为113.783mg/L,114.451mg/L,113.366mg/L,113.214mg/L;增效水胺硫磷对麦瑞加拉鲮鱼幼鱼24h,48h,72h,96h的半致死浓度分别为0.736mg/L,0.549mg/L,0.469mg/L,0.280mg/L。麦瑞加拉鲮鱼幼鱼对三唑磷、乙酰甲胺磷、增效水胺硫磷96h安全质量浓度分别为0.005mg/L、0.028mg/L和11.321mg/L,3种有机磷农药的毒性大小依次为三唑磷、乙酰甲胺磷、增效水胺硫磷。最后,还就三唑磷、乙酰甲胺磷、增效水胺硫磷对麦瑞加拉鲮鱼幼鱼的急性致毒效应特征以及麦瑞加拉鲮鱼幼鱼对三唑磷、乙酰甲胺磷、增效水胺硫磷的安全浓度进行了评价。

四个人的家庭农场梦——浙江省余姚市水产养殖家庭农场走出一条特色发展之路

暖春三月，田野上油菜花竞相怒放，在乡间小路上行走耳边不时传来欢声笑语，走进余姚市青港渔绿园，除了池塘边几个悠哉垂钓者，在烧烤区还有一批年轻人在搞活动，垂钓园生意超乎想象的火爆……“老百姓生活水平提高了，不单单是今天，今年开年垂钓园的生意就一直不断，像我们这样的垂钓农庄生意是越来越红火了。”

南美白对虾生态型养-种-养技术

在南美白对虾收获后，大部分养殖池塘都有半年左右的空闲期。为了更好地开发和利用闲塘，提高池塘利用率，浙江省余姚市积极开展生态型养殖新技术的探索，已于2008年在多个试验点开展了南美白对虾生态型养种养技术试验，并取得了较高的经济效益，也为发展现代高效健康渔业和促进渔民增收开辟了新路。现就养种养技术要点总结如下：

稻鳖种养结合模式技术要点及经济效益

为改变稻田单一种植模式生产规模小、产品品质常规、技术单一落后、效益差和对土壤环境破坏严重等局面,提高稻田生产经济效益,2014~2015年开展了稻鳖种养结合模式试验与示范。结果表明：与传统稻田种植模式相比,在不破坏稻田土壤环境的情况下,种养结合模式下稻谷、中华鳖品质大大提升,经济效益增加5760元/667m2,值得推广。

余姚甲鱼文化及产业发展探寻

余姚地处浙东宁绍平原,因南有句余山、北有姚水,于是以山水之名命名为＂余姚＂,素有浙东名邑、文献名邦之称。余姚地理位置独特,境内姚江水系为封闭水系,发源于四明山中的太平山,北泻流经上虞,转而向东,穿越余姚南北双城之间,全长109千米,境内流长54千米;支流30余条,纵横交错,织成水网,并有众多湖塘水库,但只与宁波奉化江水系交汇在甬江三江口直趋入海,与其他淡水水系无交汇。

水温对棘胸蛙(Paa spinosa)蝌蚪行为及尾部皮肤和肝脏相关功能酶活力的影响

以1月龄棘胸蛙蝌蚪[体长(1.694±0.121)cm,体重(0.548±0.062)g]为实验对象,在观察水温对蝌蚪行为和尾部皮肤表观色泽Hunter L、A、B值影响的基础上,设置19°C(对照组)、21.5°C、23°C、24.5°C、26°C五个水温梯度,并以96h为水温胁迫时长,12d为水温恢复时长,研究了水温胁迫及恢复条件下棘胸蛙蝌蚪尾部皮肤ATP酶和抗氧化酶(SOD和CAT),以及肝脏抗氧化酶(SOD,CAT,GSH)活力的变化特征。结果表明:(1)棘胸蛙蝌蚪分布水层、集群状况、个体移动率均与其培育水温关系密切,14°C和26°C分别为可显著改变蝌蚪分布水层和个体移动率的水温临界;(2)L值可作为表征蝌蚪尾部皮肤感应培育水温的指示色差,水温26°C为致其发生显著改变的高温临界;(3)蝌蚪尾部皮肤ATP酶耐受水温的最适高限为24.5°C,适宜范围为21.5—24.5°C;(4)蝌蚪尾部皮肤和肝脏表露SOD酶活力的最适水温均为23°C,而表露CAT酶活力的最适水温则分别为23°C和24.5°C,水温26°C时肝脏SOD酶已表露受损;(5)蝌蚪肝脏表露GSH酶活力的最适水温为24.5°C,水温26°C为该酶表露受损的高温临界。

宽鳍鱲胚胎发育研究

为了解宽鳍鱲胚胎发育特征,在人工培育条件下对其胚胎发育过程进行观察,结果表明,宽鳍鱲成熟卵平均直径为(1.71±0.06)mm,受精卵平均直径为(2.11±0.11)mm,胚胎发育过程历经胚盘形成、卵裂、囊胚、原肠胚、神经胚、器官形成及孵出等7个阶段28个时期。不同水温条件下,胚胎发育所需时间及有效积温存在一定差异,在24~25℃条件下,胚胎发育历时44.5 h,所需有效积温为1079.13℃·h;在25~26℃条件下,胚胎发育历时41 h,所需有效积温为1046.47℃·h;在26~27℃条件下,胚胎发育历时39 h,所需有效积温为1039.36℃·h,宽鳍鱲胚胎发育所需时间随水温升高逐渐下降,孵化率呈先上升后下降的趋势。

氨氮急性攻毒对水产经济动物棘胸蛙(Paa spinosa)蝌蚪死亡率、排氨率、耗氧率及窒息点的影响

以体长(1.932±0.204)cm、体质量(1.386±0.055)g的棘胸蛙蝌蚪为实验动物,在水温(24±0.2)℃、DO(7.30±0.01)mg/L、pH 7.30±0.01条件下,采用静水停食法开展了氨氮对蝌蚪的急性攻毒实验,并以此为基础,测定了不同氨氮质量浓度胁迫下棘胸蛙蝌蚪的排氨率、耗氧率、氧氮比及窒息点。结果表明:(1)蝌蚪对氨氮急性攻毒具明显的运动避毒行为,濒死个体的背部皮肤和肝脏均具明显的色变症状;(2)氨氮对蝌蚪的急性致死率具明显的剂量—时间效应,24h、48h、72h、96h LC50依次为177.5、151.7、148.6和146.8mg/L,毒性时段蓄积程度系数呈持续下降趋势,24—48h、48—72h、72—96h的时段MAC值分别为84.04%、10.1%和5.86%;(3)蝌蚪夜均、昼均、日均及时段排氨率随氨氮质量浓度增加均呈阶梯式下降趋势,其中时段排氨率与对照组均无显著差异的为9.80mg/L实验组,夜均、昼均、日均及时段排氨率与对照组均无显著差异的仅为2.45mg/L实验组(P>0.05);(4)氨氮对蝌蚪呼吸耗氧具低毒兴奋效应,其夜均、昼均和日均耗氧率随氨氮质量浓度增加均呈先升后降趋势,峰值氨氮质量浓度范围均为4.90—7.35mg/L(P<0.05),与对照组均无显著差异的仅为14.70mg/L实验组(P>0.05),窒息点含氧量随氨氮质量浓度增加呈先降后升趋势,谷底出现于4.90mg/L实验组(P<0.05),与对照组无显著差异的仅为9.80mg/L实验组(P>0.05);(5)实验期间,蝌蚪氧氮比(O:N)波动于18.87—25.34之间,昼均和日均氧氮比(O:N)随氨氮质量浓度增加均依次呈"上升—稳定—下降—再稳定"之趋势,两者的峰值氨氮质量浓度范围分别为4.90—14.70mg/L和4.90—9.80mg/L,夜均氧氮比(O:N)呈先升后降趋势,峰值出现于7.35mg/L实验组(P<0.05)。

光唇鱼苗种繁育技术

光唇鱼(Acrossocheilus fasciatus)是一种溪流性特色经济鱼类,俗称淡水石斑鱼,属鲤形目、鲤科、光唇鱼属,喜生活于山涧溪流和江河中上游等激流环境中。该种鱼肉嫩味美、营养丰富、DHA和EPA含量高,颇受消费者青睐;体侧具条纹,体色鲜艳,具较高观赏价值。自然条件下喜食着生在水底石块上的苔藓及藻类,在净化水质方面也起到重要作用;人工养殖条件下喂食配合饲料生长良好。繁殖季节,在水底沙砾中产卵。现将光唇鱼苗种繁育关键技术简要介绍如下。