川续断根蛋白提取工艺的优化及分析

为开展川续断根的蛋白质组学研究,需对川续断根蛋白的提取工艺及SDS-PAGE凝胶电泳图谱进行分析。研究以川续断根为研究材料,用Tris-HCl法提取不同产地川续断根蛋白,用SDS-PAGE凝胶电泳技术对不同产地川续断根蛋白的差异条带进行分析,还对川续断根蛋白的提取工艺进行了响应面优化。结果表明:湖北川续断根中蛋白含量较高,贵州次之,云南较低;经凝胶电泳图灰度值分析,24 ku和34 ku处有两条蛋白条带在不同产地(云南、湖北、贵州)间显著差异表达(P<0.05);响应面优化法得到了川续断根蛋白最佳的提取工艺条件:提取温度16.84℃,提取时间0.84 h,pH值6.58,料液比1∶1.64。筛选的差异蛋白条带及优化的川续断根蛋白提取工艺,可为今后在蛋白质组层面进一步阐释不同产地川续断质量差异形成的分子机制提供基础资料。

红花龙胆愈伤组织诱导及其生理生化特性分析

为更好保存红花龙胆种质资源及研究其次生代谢产物,需建立高效的红花龙胆愈伤组织诱导体系,并对愈伤组织的生理生化特性展开研究。本研究利用植物组培技术,筛选红花龙胆愈伤的最佳外植体,运用响应面优化法对红花龙胆愈伤组织诱导体系进行优化,对愈伤组织继代培养过程中的生理生化指标(细胞活力,生长周期,可溶性蛋白含量和苯丙氨酸解氨酶活性)进行检测。结果显示,适合红花龙胆愈伤组织诱导的最佳外植体是根;愈伤组织诱导最佳培养基:MS+NAA 0.87 mg/L+6-BA 0.43 mg/L+KT 0.71 mg/L,诱导率97.62%;不同激素对愈伤组织诱导率大小的影响顺序:NAA>6-BA>KT,6-BA和KT两种植物激素的交互作用对红花龙胆愈伤组织诱导的影响极显著;愈伤组织的细胞活力、净增长量、可溶性蛋白含量和苯丙氨酸解氨酶活性在前42 d总体呈上升趋势,愈伤继代培养的最佳时间为42 d。本研究可为今后建立红花龙胆再生体系及利用愈伤组织研究其次生代谢产物提供基础资料。