多重连接依赖式探针扩增和变性高效液相色谱法检测Duchenne型肌营养不良症患者DMD基因的缺失/重复突变

目的比较多重连接依赖式探针扩增法（MLPA）和变性高效液相色谱法（DHPLC）检测Duchenne型肌营养不良症（DMD）患者DMD基因缺失／重复突变的效果。方法选择2004年10月-2005年10月在我院确诊的22位无关DMD男性患者，采用MLPA法对经DHPLC技术检测过的患者的DMD基因的缺失／重复突变进行突变筛查，同时对先证者的23位女性亲属进行基因的缺失／重复突变检测。结果DHPLC技术和MLPA法均检测出11位先证者具有DMD基因缺失突变，3位先证者具有DMD重复突变；MLPA法除能更精确地检测出上述突变外，还检测出DHPLC法未检测出的两位患者的DMD基因存在缺失突变。16个家系中18位可能的女性携带者中，12位经检测为缺失／重复突变携带者。两种方法均未检测到6位先证者及其女性亲属DMD基因具有缺失／重复突变。结论与DHPLC法和传统的多重PCR方法相比，MLPA法检测DMD基因的缺失／重复突变位置更为准确。MLPA法可用于检测先证者及家系中女性携带者DMD基因的缺失／重复突变。

小菜蛾全长cDNA文库的构建及质量分析

采用SMART (switchingmechanismat 5 endofRNAtranscript)技术 ,构建了小菜蛾 (Plutellaxylostel la)的全长cDNA文库。按TRIzol试剂盒的操作程序提取 4龄期小菜蛾总RNA ,以此为模板 ,通过PowerScript逆转录酶逆转录合成第一链cDNA ;再以第一链cDNA产物为模板 ,用LD PCR合成第二链cDNA。该cDNA产物经分级分离和体外包装 ,即获得小菜蛾cDNA原始文库 ,其滴度为 2 6× 10 6pfu/mL。扩增后的cDNA文库的滴度为 2 4× 10 10 pfu/mL。取适量扩增文库稀释并铺平板 ,挑取 6 0个独立噬菌斑 ,用PCR方法测得文库的重组率大于 96 % ,插入cDNA的长度平均为 1 6kb。对 6 0个独立噬菌体所插入的cDNA进行测序 ,克隆到了一个具有 5 和 3 非编码区的L2 7A核糖体蛋白基因。

对氧磷酶及其生理功能的研究进展

对氧磷酶是酯酶的一种,可能和人类的某些心血管疾病,如动脉粥样硬化的发生有关,研究证实,对氧磷酶还具有对抗细菌内毒素的毒性及降解有机磷化合物类神经毒剂的作用。

遗传病的分子基础的教学问题及解决策略

医学遗传学是医学教育的重要基础学科之一,在医学教育中的地位越来越重要。为了打造医学遗传学金课,在遗传病的分子基础一章的教学中,采取了避免学生已掌握知识的简单重复、增加新知识和新进展的教学策略,通过优化教学内容、强化突变与遗传病发生的因果逻辑等方式,增加表观遗传学、三核苷酸串联重复动态突变引起的遗传病、基因组印记及微缺失/微重复相关内容,力求为学生传授能反映学科新进展和新成果的教学内容,为后续章节的讲解铺垫坚实基础,并总结了遗传病的分子基础章节的教改体会。

新形势下医学遗传学绪论教学初探

由于分子生物学技术和信息科学的飞速发展,医学遗传学在人类遗传病发病基因的定位、克隆、功能研究、遗传病发病机制及遗传病的诊断、预防和治疗方面,均取得了长足进步,传统的医学遗传学尤其是绪论章节的教学,存在教学内容滞后、教学方式单一等问题,已经不能适应新形势的要求。文章在分析以往绪论教学存在问题的基础上,以创新思维的方式,进行了绪论教学的改革尝试,增加了学生自主学习的内容、适当拓展了能反映医学遗传学进展的教学内容,力求培养学生的自主学习能力及提高学生对医学遗传学的学习兴趣。

小菜蛾酯酶基因的克隆

根据已知的酯酶基因的保守性氨基酸序列设计简并引物 ,通过逆转录 -聚合酶链反应 (RT PCR)扩增出小菜蛾PlutellaxylostellaL .酯酶基因片段 ,然后按照测序结果再设计 1对特异引物 ,利用PCR方法 ,筛选小菜蛾的cDNA文库。将RT PCR获得的 1条长度为 3 3 0bp的目的条带 ,亚克隆入T -载体 ,测序结果表明共得到了 1 0个不同的酯酶基因片段。利用特异引物对小菜蛾的cDNA文库进行初筛 ,显示文库中存在有小菜蛾的酯酶基因。

面肩肱型肌营养不良症发病机制的研究进展

面肩肱型肌营养不良症,是一种常染色体显性遗传疾病,至今尚未找到其致病基因。大部分面肩肱型肌营养不良症患者和4q35区域3.3-kb的串联重复序列Z4D4的整倍缺失紧密连锁,几乎所有面肩肱型肌营养不良症患者,Southern杂交片段小于35 kb(少于11个D4Z4重复序列),而正常人群该片段为350 kb(11-150个D4Z4重复序列)。通过分子生物学研究与生物信息学分析,在4q35区域内,排除了FRG1、FRG2、ALP、ANT1、DUX4、YY I、HMGB2及Nu-c lolin等几个可能的候选基因;有关肩肱型肌营养不良症发病机制的位置变异效应假说,需要更多的证据支持;另一假说认为,面肩肱型肌营养不良症患者,D4Z4区域内类似沉默子的序列与转录抑制复合物相结合,由于D4Z4的缺失,该复合物不能形成并导致D4Z4上游基因的过表达,有关基因的过表达通过某种不明机制导致FSHD疾病的发生;D4Z4的缺失使4qter在细胞核内的定位异常,使许多基因的表达不正常,从而引起一系列的病理变化,并最终导致FSHD疾病的发生,也是FSHD发病的可能性机制之一。FSHD的发病相关基因和发病机制的研究有待深入。

《医学遗传学》课程教学面临的问题及解决对策

《医学遗传学》是医学院校临床医学及相关医学专业的限选课之一,内容抽象、繁多,但教学学时不足,尤其是随着该学科的快速发展,这种矛盾更为突出。为了解决教学中存在的问题,本文阐述了通过建设、选用案例版、立体化教材及细化平时成绩考核方式的途径,进行《医学遗传学》教学改革的尝试,以期通过提供更多的阅读资料、形式丰富的多媒体视听资源等,来提高学生的学习兴趣、培养学生的创新思维能力,让学生在多种信息的提取过程中,掌握现代医学遗传学的理论和实验技术,从而适应遗传病诊断、预防和治疗的后基因组时代的需求。

^3H—TdR的单个细胞核内吸收剂量估算

３Ｈ－ＴｄＲ的单个细胞核内吸收剂量估算申本昌陈冠英（河南省红十字血液中心，郑州４５００５３）氚标记的胸腺嘧啶脱氧核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）是一种极为重要的有机氚结合形式，它是ＤＮＡ合成的前体物，在基础医学研究中得到了广泛的应用。３Ｈ－ＴｄＲ发出的粒子是已...

ABO母婴血型不合的孕妇IgG效价测定及其临床意义

新生儿ＡＢＯ溶血与生理性黄疸有所不同，本病主要是由母婴ＡＢＯ血型不合引起，它主要发生在Ｏ型血产妇，其症状较轻，但出现早，加深快，严重者可导致黄疸，

基因组步移法克隆小菜蛾CYP9G2基因的上游序列

利用4种产生平端切头的限制性内切酶消化小菜蛾(Plutella xylostella)的基因组DNA,然后利用DNA连接酶的催化作用,在4种不同平端切头的小菜蛾基因组DNA上连接一个氨基化的基因组步移衔接头序列,针对衔接头及已克隆的CYP9G2基因的序列,设计两对PCR上、下游引物,进行PCR扩增、T-A克隆和阳性克隆的巢式PCR验证,通过测序克隆到了小菜蛾CYP9G2基因上游未知序列约1.8 kb。通过对该基因的上游序列进行信息分析,发现1个可能的节肢动物动物转录起始子(Inr),3个CAAT样盒及1个抗氧化剂样反应因子,共5个可能的顺式调控元件。研究还表明,利用基因组步移方法可以快速地克隆已知序列的上游未知序列,实验操作经济、简便,对于已知cDNA序列或部分基因组序列的基因,其上游调控序列的克隆,基因组步移具有较高的实用价值。

氚致淋巴细胞DNA单链断裂重接修复的检测方法

氚致淋巴细胞ＤＮＡ单链断裂重接修复的检测方法１．河南省红十字血液中心（郑州４５００５３）２．北京医科大学基础医学院申本昌１陈冠英２ＤＮＡ是细胞生命活动与遗传的物质基础，同时也是对辐射敏感的靶分子。随着社会的发展，各种核素如氚在自然界的分布总量也在呈增...

γ射线外照射致哺乳动物DNA单链断裂及其重接修复的研究

用核酸酶Ｓ１法研究了γ射线外照射致哺乳动物Ｃ５７小鼠离体培养的脾细胞ＤＮＡ单链断裂及其在３７℃条件下的重接修复结果表明，ＤＮＡ单链断裂数随着辐射剂量的加大而增加；在接近生理条件下，ＤＮＡ单链断裂可发生重接修复，修复过程可分为快修复期及慢修复期。

快速荧光法检测沙门氏菌的初步研究

沙门氏菌能引起人类和动物的沙门氏菌病，是细菌腹泻和食物中毒最常见的病原菌，常规培养方法分离和鉴别沙门氏菌操作复杂、费时，经研究发现，４－甲基伞形酮辛脂（４－Ｍｅｔｈｙｌｕｍｂｅｌｉｆｅｒｙｌ－ｃａｐｒｙｌａｔｅ，ＭＵＣ）即ＭＵＣ快速荧光法可快速检测食...

河南省部分RhD(一)献血者RhD基因多态性分析

目的 :探讨RhD(- )本省无关供血者中RhD基因的构成情况。方法 :采用PCR SSP法对 80名常规血清学RhD(- )本省供血者RhD基因外显子 2、3、4、5、6、7、9、10和内含子 4及RhCE基因内含子 4的特异性片段进行扩增。结果 :80名RhD(- )供血者中RhD基因完全缺失 5 3例 ,占 6 6 .2 % ;RhD基因部分缺失 7例 ,占 8.7% ,其中大部分为 3～ 9外显子缺失 ;RhD基因完整存在 2 0例 ,占 2 5 %。结论 :本省常规血清学RhD(- )无关供血者RhD基因存在高度多态性 ,提示本省人群RhD(- )特征有多种遗传机制 ,目前在白种人群中使用的DNA鉴定Rh血型的方法不适合我国人群 。

人微小抗肌萎缩蛋白基因转染大鼠骨髓间充质干细胞及其基因表达

目的构建人微小抗肌萎缩蛋白基因(microdystrophin)的真核表达载体,转染大鼠骨髓间充质干细胞(rMSC),研究其体外表达情况。方法限制性酶切PBSK-MICRO质粒的微小抗肌萎缩蛋白基因片段,插入到真核表达质粒pcD-NA3.1(+)的NotI位点内,克隆出真核表达载体pcDNA3.1(+)/micro dystrophin。通过酶切和测序对质粒进行鉴定。用脂质体将重组质粒转染入rMSCs中,经过G418筛选后,用RT-PCR及间接免疫荧光技术检测表达产物。结果pcDNA3.1(+)/micro dystrophin经过NotI、Hind III酶切鉴定及测序证实插入片断正确。提取转染重组质粒rMSCs的总RNA,进行RT-PCR可见mRNA的转录;对G418筛选后rMSCs进行免疫荧光检测可见细胞内亮丽的红色荧光,说明转染后的rMSCs有微小抗肌萎缩蛋白的表达。结论成功构建了人microdystrophin基因真核表达载体,将其转染入rMSCs内有微小抗肌萎缩蛋白的表达,为进一步研究体外修饰自体干细胞移植治疗DMD奠定了基础。

生物性别决定的复杂性

动物和植物的性别决定方式复杂多样,细菌的性别决定则比较简单。人类的性别决定方式为XX-XY型性别决定方式,Y染色体在人类男性的性别决定和发育中起决定作用,Y染色体上的基因启动了和性别决定有关基因的差异表达,进而启动了个体的性别发育过程。果蝇的性别决定最终取决于X染色体的数目和常染色体套数的比值(X/A)。高等植物多为雌雄同株,无明显的性染色体决定性别机制。细菌的性别由细菌是否含有致育因子即F因子而决定,含有F因子的菌株相当于雄性,不含F因子的菌株相当于雌性。总体来说,遗传组成是生物性别决定的物质基础,但环境因素对性别决定也有影响。主要阐述了生物界主要的性别决定方式及环境因素对性别决定的影响,综述了人类和果蝇性别决定的分子基础的研究进展。