结核分枝杆菌标准株mazEF6缺失株的构建

为构建结核分枝杆菌标准株H37Rv毒素-抗毒素系统maz EF6基因缺失突变株。采用聚合酶链反应(PCR)技术,分别从H37Rv和PUC-19K质粒上扩增出maz EF6基因的同源臂及卡那霉素抗性基因kan基因;应用融合PCR技术将maz EF6基因的同源臂和kan基因进行杂交拼接,获得目的融合片段,并将该融合片段克隆于p MD-19T(simple)载体形成自杀质粒p MD-19T-Δmaz EF6-kan,将构建的自杀质粒转化至大肠杆菌DH5a中;利用电穿孔技术将自杀质粒电转至H37Rv标准株中;并将该菌株涂于卡那霉素抗性改良罗氏培养基,培养3-4周后,刮取能在卡那霉素抗性培养基中生长的结核分枝杆菌单个菌落,以提取的阳性菌株全基因组DNA为模板,PCR扩增克隆片段,并测序。对所获得H37RvΔmaz EF6缺失突变株进行遗传稳定性检测。结果显示,该缺失株在15代内未发生回复性突变,成功获得H37RvΔmaz EF6缺失突变株。由此可知,本研究为今后研究毒素-抗毒素系统maz EF6基因的生物学功能奠定基础。

结核分枝杆菌毒素-抗毒素系统mazEF6缺失突变株的构建及其表型的初步探讨

为构建结核分枝杆菌毒素-抗毒素系统mazEF6缺失突变株,并对其表型进行初步探讨,首先用聚合酶链反应(PCR)分别从H37Rv标准株和PUC-19K质粒扩增出mazEF6基因的同源臂及卡那霉素抗性基因kan;然后应用融合PCR技术将mazEF6基因的同源臂与kan基因进行杂交拼接,获得目的融合片段,将该融合片段克隆于pMD-19T(simple)载体形成自杀质粒pMD-19T-ΔmazEF6-kan,并将自杀质粒转化至大肠埃希菌DH5α中;最后利用电穿孔技术将自杀质粒电转至H37Rv标准株中,在卡那霉素抗性改良罗氏培养基上筛选H37RvΔmazEF6缺失突变株单个菌落,提取阳性菌株全基因组DNA为模板,PCR扩增克隆片段并测序。将所获得的H37RvΔmazEF6缺失突变株进行遗传稳定性检测后,对其表型进行初步研究。结果显示,该缺失株在15代内未发生回复性突变;与野生株相比,缺失株生长速度缓慢且细菌形态短小。本研究证实,融合PCR技术便于快速获得结核分枝杆菌缺失突变株;结核分枝杆菌在缺失毒素-抗毒素系统mazEF6基因后生存能力下降,这为进一步研究毒素-抗毒素系统的作用奠定了基础。

铜柱测压器动态特性分析及计算机仿真

分析了采用静标体制的铜柱测压器系统产生动态误差的原因 ,介绍了塑性测量元件准动态标定的含义及意义 ;利用塑性状态铜柱的本构方程建立了铜柱测压器的数学模型 ,运用计算机对其进行了动态仿真 ,仿真结果与试验测量结果相符 。

新疆地区结核分枝杆菌北京/W系和非北京/W系间五种重要蛋白表达差异的初步研究

目的检测北京/W系和非北京/W系结核分枝杆菌HspX、Hsp65、38kDa、Ag85B和MPT64在基因、mRNA和蛋白水平有无差异,探讨5个重要蛋白对于北京/W系菌株广泛流行的可能作用。方法收集结核分枝杆菌临床分离株,其中北京/W系与非北京/W系菌株各30株,运用DNA直接测序法检测北京/W系和非北京/W系菌株HspX、Hsp65、38kDa、Ag85B和MPT64对应编码基因的PCR扩增产物,采用实时定量PCR技术检测细菌在对数生长期5个重要蛋白的编码基因mRNA的表达水平,使用Western blot技术检测细菌感染巨噬细胞24h后5个蛋白在不同菌株中的表达水平。结果统计分析采用t检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果 HspX、Hsp65、38kDa、Ag85B和MPT64对应编码基因的PCR扩增产物测序均未发现突变。HspX、Hsp65在北京/W系菌株中的mRNA在对数生长期的表达差异均无统计学意义(P>0.05),而在感染巨噬细胞24h后,细菌中两个热休克蛋白的表达高于非北京/W系菌株,差异有统计学意义(P<0.05)。在细菌感染细胞前后,北京/W系菌株中38kDa、Ag85B的mRNA和蛋白水平的表达均低于非北京/W系菌株,差异有统计学意义(P<0.05)。MPT64在mRNA和蛋白水平的表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论与非北京/W系菌株比较,北京/W系菌株中HspX、Hsp65高表达,38kDa、Ag85B表达较低,推测这几个蛋白表达的改变可能与北京/W系菌株的流行有一定的关系。

结核分枝杆菌耐药株与敏感株Ag85B表达的差异

目的比较结核分枝杆菌异烟肼耐药株与敏感株fbpB基因mRNA转录水平及蛋白水平表达的差异性。方法利用比例法对分离出来的细菌做药敏分析及鉴定试验,然后提取细菌的总RNA及蛋白质。利用qRT-PCR技术检测异烟肼耐药株与敏感株fbpB基因mRNA水平的差异,并用两个独立样本的非参数检验进行统计分析,再利用Western blot技术检测其蛋白水平有无差异,两个独立样本的t检验作统计学分析。结果结核分枝杆菌耐药株和敏感株mRNA水平表达量分别为0.80±0.20、0.66±0.12,蛋白相对于内参的表达量分别为0.96±0.12、0.53±0.08。耐药株在两个水平上均高于敏感株(P<0.05)。结论结核分枝杆菌对异烟肼产生耐药与fbpB基因编码的蛋白Ag85B有一定的相关性。

两种消毒方法对感染性疾病研究室消毒灭菌效果评价

目的:探讨两种方消毒方法对石河子大学医学院感染性疾病研究室消毒灭菌效果。方法:实验室分别用常规紫外线照射、酒精喷洒法和甲醛熏蒸法消毒灭菌。比较两种消毒方法对实验室空气、物体表面细菌的消毒灭菌效果。从罗氏培养基上挑取可疑菌落做抗酸染色,使用PCR检测16Sr RNA、MTP40基因。结果:消毒后两组空气灭菌率为82.01%和97.38%;物体表面杀菌率为88.72%和99.12%,甲醛熏蒸法消毒后空气和物体表面灭菌率均高于常规法,差异有统计学意义(<0.05)。常规法消毒后,个别部位检测到人型结核分枝杆菌,甲醛熏蒸法消毒后结核分枝杆菌检测为阴性。结论:甲醛熏蒸消毒显著提高对空气和物体表面普通细菌的灭菌率,对结核分枝杆菌消灭彻底,消毒灭菌效果优于常规法。

结核分枝杆菌标准株H37Rv mazEF3基因过表达菌株的构建及初步鉴定

为构建H37Rv mazEF3基因的过表达菌株,检测过表达菌株mazEF3 mRNA表达水平。使用穿梭质粒pMV361,把mazEF3基因连入其中,构建重组质粒pMV361-mazEF3;利用电穿孔技术,将穿梭表达质粒导入H37Rv中,并将该菌涂在卡那霉素培养基上初步筛选,提取阳性菌株质粒进行PCR、双酶切后送公司测序进一步验证;检测不同电转电压下mazEF3 mRNA表达水平,寻找最佳电转电压。结果显示,成功构建H37Rv mazEF3基因的过表达菌株,PCR、双酶切后目的基因,测序结果与已知mazEF3基因比对,同源性100%。实时荧光定量检测,电转电压为2300V时,构建的过表达菌株mazEF3 mRNA表达量最高。由此可知,成功构建及初步鉴定了mazEF3 mRNA过表达菌株,电转电压为2300V时,构建的过表达菌株mazEF3 mRNA表达量最高。

高膛压火炮测试用压力传感器静校装置设计

高膛压火炮测试用压力传感器安装在药筒底部测膛底压力。由于压力传感器受到附加应力的作用,使测试数据产生较大的误差。本文介绍一种模拟药筒底部安装条件的静校专用装置,该装置使压力传感器静态校准与实际膛底压力测试的安装条件基本一致,压力传感器与转接器整体进行校准,为研究压电式压力传感器的适用性提供了一套实验装置。

如何实施素质教育

素质教育作为一种着眼于开发人的潜能、全面完善和提高人的整体教育，它的提出和实施对教育事业的改革具有深远意义。尽管素质教育稳步推进，但是应试教育仍旧根深蒂固，在一些家长心目中还是“社会以文凭为本，教育以考试为本，学校以应试为本，家长以分数为本”。作为教师，我们要认真贯彻执行党的教育方针，不断深化素质教育。

铜柱测压动静差分析及修正公式探讨

介绍了铜柱测压系统产生动静差的原因及φ3.5×8.75铜柱动静差的变化规律。根据这一特定的物理现象,采用量纲分析方法简化变量,用正交表进行试验设计,并获得了这一物理过程的无量纲组合量的一般结构形式。借助于实验数据得到了动静差修正经验公式。经实验验证,该修正公式的有效性较好。

高膛压测试用压力传感器静态高压模拟研究

对于目前几种常用的弹道压力传感器采用静态高压模拟校准试验,得出一些规律性的结论,在分析试验结果后,提出了减少膛底压力测试误差的几种设想。

一种新型折角塞门气密性检测系统的制作与应用

针对铁路货车用球芯折角塞门在厂修期检修过程中气密性检测存在的不足,制作出结构简单、操作方便、装夹便捷、密封性好,实现浮动式夹紧密封的一种新型折角塞门气密性检测系统,提高折角塞门气密性检测的效率和质量,保障铁路货车的运行安全。

结核分枝杆菌毒素-抗毒素系统的研究进展

毒素．抗毒素系统 （ toxin-antitoxin system, TAS）最早是作为质粒的稳定系统而发现的，这一系统依赖不稳定的抗毒素阻止活性毒素从亲和性蛋白复合物中释放出来。在应激条件下，抗毒素被蛋白酶降解或者消耗，毒素释放后干扰或改变细胞的DNA复制、ATP和细胞壁合成，介导细胞死亡或耐药持久性的形成，毒素也可以作为一种抗防御蛋白进而中和细菌中质粒的抗性。

循环 miRNA 作为诊断结核病生物标志的研究

目的：检测血浆中microRNA（miR）-155-5p、miR-21-5p、miR-29a、miR-142-5p在健康对照组、活动性肺结核组以及潜伏结核感染组中的表达情况，探讨其作为诊断结核病生物标志的可能性。方法健康对照组60人、活动性肺结核组40人和潜伏结核感染组20人，利用反转录-荧光定量PCR检测其血浆中miR-155-5p、miR-21-5p、miR-29a、miR-142-5p的表达水平。结果与健康对照组相比，活动性肺结核组血浆中除miR-142-5p外，miR-155-5p、miR-21-5p和miR-29a都出现表达上调的现象，分别是健康对照组的10．13倍、7．34倍和2．74倍，差异有统计学意义（P＜0．05）；ROC曲线分析miR-155-5p、miR-21-5p和miR-29a，曲线下面积（AUC）分别为0．905、0．830和0．687。与健康对照组相比，潜伏结核感染组血浆中只有miR-155-5p表达上调，且是健康对照者的3．1倍，差异有统计学意义（P＜0．05），miR-21-5p、miR-29a和miR-142-5p表达无差异。与潜伏结核感染组相比，活动性肺结核组血浆中除miR-142-5p外，miR-155-5p、miR-21-5p和miR-29a均表达上调，分别是潜伏结核感染组的3．26倍、6．69倍和1．98倍，差异有统计学意义（ P＜0．05）。与活动性肺结核患者密切接触者中潜伏结核感染率为40．58％。结论 miR-155-5p、miR-21-5p和miR-29a在健康对照组和活动性肺结核组以及活动性肺结核组和潜伏结核感染组之间存在差异性表达，miR-142-5p在3组之间均无差异性表达。 miR-155-5p、miR-21-5p和miR-29a可能是潜在诊断活动性肺结核、潜伏结核感染的生物标志物。与活动性肺结核患者密切接触者中潜伏结核感染率较高。

实时荧光定量PCR对结核病潜伏感染快速诊断的研究

目的探讨7种细胞因子的mRNA表达水平作为诊断结核分枝杆菌潜伏感染生物标志物的可能性。方法健康对照64人,活动性肺结核50人,结核分枝杆菌潜伏感染60人,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结核特异性抗原刺激的外周血中TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-10、IFI35、CXCL10及Foxp3的mRNA表达水平。结果 7种因子相对表达量在活动性肺结核组分别为2.33±0.09、4.94±0.45、150±17.82、2.02±0.55、9.53±5.96、5.56±0.97、1.24±0.17,潜伏感染组分别为3.2±0.61、10.04±1.89、202±17.6、21.89±10.25、29.17±11.19、41.35±11.46、2.14±0.67,健康组分别为1.2±0.08、2.92±0.03、53±17.82、1.48±0.17、1.28±0.77、1.63±0.25、1.03±0.67。潜伏感染组与健康组相比7种细胞因子的mRNA表达水平,差异均有统计学意义(P<0.01),相应细胞因子检测的敏感性、特异性分别为95.1%、82.5%,92.5%、88.7%,91.9%、90.1%,88.2%、51.5%,74.2%、61.2%,81.8%、73.4%和80.4%、51.3%;潜伏感染组和活动性结核组比较除IFI35因子外,其余6种细胞因子的mRNA表达水平差异均有统计学意义(P<0.05),相应细胞因子检测的特异性、敏感性分别为90.6%、80%,88.6%、92.7%,91.9%、86.2%,57.6%、60%,50%、58%,76%、72.2%和66.7%、67.1%;健康对照组和活动性结核组相比较,7种细胞因子的mRNA表达水平差异均有统计学意义(P<0.01),相应细胞因子检测的敏感性、特异性分别为92.3%、90%,88.6%、86.7%,94.4%、86.7%,89.7%、65.8%,82.4%、63.3%,88.2%、70%和92.9%、72.1%。结核病密切接触者潜伏感染率为48.97%,健康组潜伏感染率为36%。结论结核病患者血清TNF-α、IFN-γ、IL-2mRNA水平升高,以潜伏感染者升高更显著,因此可作为诊断结核分枝杆菌潜伏感染的生物标志物。