胃镜和结肠镜检查患者焦虑情绪及影响因素研究

目的评估将要行胃镜检查和结肠镜检查患者的焦虑程度及其影响因素。方法纳入118例计划接受镇静后行胃镜和结肠镜检查的患者。患者进入内镜室前发放贝克焦虑量表,收集患者人口学统计数据,单因素和多因素Logistic回归分析胃镜和结肠镜检查患者焦虑情绪的影响因素。结果胃镜和结肠镜检查患者焦虑水平高于国内常模(P <0.01)。单因素分析显示,男性患者焦虑程度明显低于女性,不伴合并症患者低于伴合并症患者,大专以上教育程度患者焦虑程度低于教育程度为小学至高中的患者。多元Logistic回归分析显示,合并症和性别是接受胃镜和结肠镜检查患者焦虑情绪的主要影响因素。结论胃镜和结肠镜检查患者焦虑程度与合并症和性别有关,但与年龄和检查类别等因素无关。

参麦注射液对重症酒精性肝炎患者抗氧化作用及血清IL-6、IL-12、TNF-α水平的影响

目的:观察参麦注射液治疗重症酒精性肝炎的疗效,探讨其对抗氧化作用及患者血清白细胞介素(IL)-6、IL-12、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平的影响。方法:重症酒精性肝炎108例,按数字表法随机分为对照组和治疗组(每组均有54例)。参照指南对两组患者给予常规干预措施。对照组给予静脉滴注安慰剂,1次/d。治疗组给予参麦注射液,100 mL/次,静脉滴注。两组患者连续治疗6周。治疗6周后,比较两组患者肝功能[丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)]、凝血功能[凝血酶原时间(PT)和凝血酶原活动度(PTA)]、Maddrey判别函数(MDF)评分以及临床疗效。治疗前及治疗6周后,采取酶联免疫吸附法检测两组患者的血清GSH-PX、MDA、IL-6、IL-12、TNF-α水平。结果:治疗6周后,治疗组患者的肝功能[AST、ALT、TBIL]、PT、MDF低于对照组以及PTA高于对照组,以上差异均有统计学意义(P<0.01)。治疗6周后,治疗组患者的总有效率(87.04%)高于对照组70.37%,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗6周后,治疗组患者血清GSH-PX水平高于对照组及血清MDA、IL-6、IL-12、TNF-α水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:在常规治疗基础上,参麦注射液视力重症酒精性肝炎的效果确切,改善氧化损伤反应及抑制炎性因子IL-6、IL-12、TNF-α水平可能与其疗效有关。

蓖麻毒蛋白A链与抗表皮生长因子受体单克隆抗体偶联物的抗肿瘤效应

目的:将蓖麻毒蛋白(ricin)A链(RTA)与表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)mab偶联形成免疫毒素(immunotoxin,IT),并评价该偶联物的体外抗肿瘤作用。方法:从蓖麻籽中提纯RTA,采用N-琥珀酰胺-3-(2-吡啶二硫)丙酸酯[N-succinimidyl-3-(2-pyridyldithio)-pro-pionate,SPDP]为偶联剂制备ITEGFR mab-RTA,以SDS-PAGE检测RTA的提取及IT的偶联,以DAB显色法检测IT对人肝癌HepG2细胞的结合能力,以间接ELISA方法测定IT的免疫反应性,以CCK-8法测定IT的体外抗肿瘤作用。结果:RTA从蓖麻籽中提取后,与EGFR mab成功偶联。IT基本保留了EGFR mab对HepG2细胞的结合能力和免疫反应性,及对HepG2细胞和LO2细胞表现了不同的体外细胞毒作用。结论:EGFR mab-RTA具有特异性抑制肝癌细胞增殖的作用,有望成为新型的抗肝癌药物。

抗CD71单抗与蓖麻毒蛋白A链免疫毒素的制备及其体外抗肝癌细胞效应的研究

目的因抗CD71单抗具有靶向定位特性,及利用蓖麻毒蛋白A链(RTA)的细胞毒性,将两者进行偶联,构建免疫毒素CD71 Mab-RTA,并研究其体外抗肝癌细胞效应。方法从蓖麻籽中提纯RTA,以N-琥珀酰胺-3-(2-吡啶二硫)丙酸酯[N-succinimidyl-3-(2-pyridyldithio)-propionate,SPDP]作为偶联剂,偶联抗CD71单抗,构建免疫毒素(IT),以SDS-PAGE检测IT,以间接ELISA方法测定IT的免疫反应性,以WST-1法测定IT的体外抗肝癌细胞效应。结果蓖麻籽经过研磨、过滤、亲和层析、凝胶层析、离子交换层析等步骤成功提纯RTA。提纯的RTA与CD71 mab进行偶联成功构建免疫毒素CD71 Mab-RTA,SDS-PAGE结果显示,在非还原状态下,为一条分子量>116kD的单一电泳条带,在还原状态下,为三条电泳条带,分别位于约55 kD处、约32 kD处及约28 kD处。间接ELISA结果显示,免疫毒素与单抗的曲线走势一致,但各浓度下OD值均较单抗组略低。WST-1结果显示,IT在各浓度梯度下均表现出对HepG_2细胞和LO_2细胞不同的杀伤作用(P<0.05)。结论 CD71 mab-RTA基本保留了免疫反应性,及表现出对HepG_2细胞和LO_2细胞的不同体外细胞毒效应,提示对肝癌细胞具有较好的靶向细胞毒作用,有望成为新型的抗肝癌药物。

碱剩余对重症急性胰腺炎患者早期死亡的预测价值

目的:探讨碱剩余对重症急性胰腺炎患者早期死亡的预测价值。方法:采用回顾性分析方法,比较急性胰腺炎患者早期死亡组和早期存活组入院后碱剩余值的差异,及高、低碱剩余组早期死亡率的差异,并将碱剩余评估效能与其他3项评分系统进行比较。结果:早期死亡组碱剩余值动态变化低于早期存活组(P<0.05),低碱剩余组早期死亡率高于高碱剩余组(P<0.05),碱剩余与其他3项评分系统评估预后效能有一定差异。结论:碱剩余有助于重症急性胰腺炎预后评估和指导治疗。

己酮可可碱治疗重症酒精性肝炎疗效评价

目的评价己酮可可碱治疗重症酒精性肝炎的效果。方法64例重症酒精性肝炎患者随机分为治疗组（服用己酮可可碱）和对照组（服用安慰剂），分别比较两组的GGT、AST、TBIL、PTA、MDF及总有效率。结果经过4周治疗，两组GGT、AST、TBIL、MDF均较治疗前显著下降，PTA较治疗前显著升高，差异均有统计学意义（P〈0.05），治疗组的变化幅度更大，组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。总有效率治疗组81.8％，对照组58.1％，差异有统计学意义（P〈0.05）。结论己酮可可碱治疗重症酒精性肝炎疗效确切。

肝癌的分子靶向治疗进展

原发性肝癌（primary hepatocellular carcinoma，HCC）是指肝细胞或肝内胆管细胞发生的癌，为我国常见恶性肿瘤之一。晚期肝癌预后很差，放化疗很难使病人受益。因此，寻求更为有效、副作用小的治疗手段成为医学界的新目标。进入二十一世纪，分子靶向治疗（molecular targeted therapy）的研究取得了重大进展，把癌症的治疗推向了一个前所未有的新阶段。

胃神经鞘瘤超声内镜下被误诊为胃间质瘤4例并文献复习

目的为了提高超声内镜(EUS)对胃神经鞘瘤的检出率。方法回顾分析2008年5月-2015年6月温州医科大学附属第一、第二医院和台州市第一人民医院4例病理及免疫组化确诊为胃神经鞘瘤但经EUS误诊为胃间质瘤的临床资料及EUS的影像特征并文献复习。结果 4例胃神经鞘瘤均为女性且均为良性,胃镜下4例病灶均为单发,有3例位于胃体,1例位于胃底;EUS下病灶均起源于胃固有肌层,病灶处呈低回声团块,回声均匀,边界清楚,内部回声均未见钙化灶或囊性变;2例病灶周围可见光晕现象。文献复习发现:胃神经鞘瘤好发于女性;周围光晕现象可能为胃神经鞘瘤的特征性表现;钙化、囊性液化改变在胃神经鞘瘤中较少见,在胃间质瘤中较常见。结论位于固有肌层的胃神经鞘瘤与胃间质瘤在EUS下很难区分;对病灶位于胃体、超声图像示病灶起源于固有肌层,呈低回声、回声均匀、边界清楚的女性患者,需仔细观察病灶内部回声是否有钙化、囊性变以及病灶周围是否有光晕现象,综合考虑,除需考虑胃间质瘤外还要排除胃神经鞘瘤的可能性。

羊栖菜多糖对软脂酸诱导的HL-7702细胞凋亡的保护作用

目的:探讨羊栖菜多糖(SFPS)对软脂酸诱导的肝细胞凋亡的保护作用及其可能机制。方法:SFPS不同浓度(25、50、100μg/mL)预处理24h后,0.5mmol/L软脂酸(PA)作用48h诱导正常人肝细胞株(HL-7702)凋亡。MTT比色法检测SFPS对细胞增殖的影响;Annexin V-FITC标记法检测细胞的凋亡;RT-PCR法检测凋亡调控基因Bcl-2、Bax的表达并计算其比值(Bcl-2/Bax)。结果:0.5mmol/L PA处理48h的HL-7702细胞存活率下降为正常对照组的64.9%,细胞凋亡率为35.1%,Bax表达上升,Bcl-2表达及Bcl-2/Bax比值明显下降(均P<0.05);与模型组相比,SFPS不同浓度(25、50、100 ug/ml)预处理后细胞存活率逐渐升高,细胞凋亡率显著降低,Bax表达逐渐下降,Bcl-2表达及Bcl-2/Bax比值逐渐上升(均P<0.05)。结论:SFPS对PA诱导的肝细胞凋亡有较好的保护作用,其作用机制可能与调节Bcl-2、Bax基因的表达有关。

HBeAg特异性细胞免疫反应体外抗乙肝病毒作用

目的探讨体外HBeAg特异性细胞免疫反应对乙型肝炎病毒(HBV)mRNA表达及蛋白合成的影响。方法自正常人外周血单核细胞中诱导培养树突状细胞(DC),经不同浓度的HBeAg负载后与自身T细胞共同培养,诱导产生HBeAg特异性T细胞,同时设与无HBeAg刺激的DC共同培养的T细胞、单纯T细胞为对照组,作用于HepG2.2.15细胞系,逆转录PCR(RT-PCR)检测HepG2.2.15细胞内乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝核心抗原(HBcAg)的mRNA水平,酶联免疫法(ELISA)检测细胞培养上清中HB-sAg和乙肝e抗原(HBeAg)水平。结果经HBeAg刺激激活的T细胞可以有效地抑制HBsAg、HBcAg mRNA的表达(P<0.05)及HBsAg、HBeAg的合成(P<0.05),且随着HBeAg刺激浓度的升高,对上述指标的抑制率逐渐上升。结论HBeAg特异性细胞免疫反应可显著抑制HBV mRNA和蛋白的表达,为开发HBeAg相关的治疗性疫苗奠定理论基础。

乙肝表面抗原-CD40L胞外段融合蛋白的设计和生物活性预测

目的:探讨乙肝表面抗原-CD40L胞外段融合蛋白设计的合理性。方法:应用Gene Constructionkit2.5、DNAStar软件和www.expasy.org网站提供的分析方案分析重组体的开放读框以及融合蛋白的柔性、亲水性、抗原性、表位等性质,并作了二级结构模拟分析。结果:重组体CMV启动子下游有完整的目的基因ORF,融合蛋白二级结构水平未出现新的抗原性及表位,亲水性无改变,Linker部位抗原性低,呈中性且柔性高,不影响两端的蛋白质二级结构及融合蛋白空间构象。结论:重组体设计合理,融合蛋白很大可能保留了乙肝表面抗原和CD40L胞外段的生物学活性,为进一步研究提供了理论依据。

东亚钳蝎镇痛抗肿瘤肽体外靶向肝细胞癌的实验研究

背景:肝细胞癌(HCC)是全球最常见的恶性肿瘤之一,目前手术、介入、放化疗等常规治疗效果均不理想,开发有效、毒副作用相对较小的新药成为研究者关注的重点。目的:观察东亚钳蝎镇痛抗肿瘤肽(AGAP)基因真核表达载体对HCC细胞的靶向表达和毒性作用。方法:真核表达质粒pAFP-AGAP经酶切和测序鉴定后转染甲胎蛋白(AFP)阳性人HCC细胞株HepG2以及AFP阴性人宫颈癌细胞株HeLa和正常人肝细胞株L02。逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测AGAP mRNA表达,CCK-8方法检测细胞毒性作用。结果:各组细胞转染质粒pAFP-AGAP后,AGAPmRNA表达仅见于AFP阳性HepG2细胞,而AFP阴性HeLa细胞和L02细胞均无AGAP mRNA表达。HepG2细胞转染质粒pAFP-AGAP 48 h后形态发生明显改变,细胞生长显著受抑(P<0.01),48 h和72 h时抑制率分别为44.4%和74.6%,而HeLa细胞和L02细胞的形态和生长均未受明显影响。结论:AGAP基因真核表达载体可实现HCC基因治疗的靶向性和高效性,有望成为HCC靶向基因治疗的有力工具。

假单胞菌外毒素体外靶向抗肝细胞癌的实验研究

目的:构建携铜绿假单胞菌外毒素PE38基因及甲胎蛋白(AFP)启动子的重组载体,并研究其在体外对AFP阳性肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)的靶向杀伤作用。方法:构建重组免疫毒素表达质粒pAFP-PE38,通过转染细胞观察其作用,RT-PCR法测定PE38 mRNA表达,CCK-8法检测细胞毒性。结果:各组细胞转染质粒pAFP-PE38后仅AFP阳性的HepG2细胞表达PE38 mRNA,且形态发生改变,生长显著受抑(P<0.01),48 h和72 h抑制率分别为27.2%、58.3%,而AFP阴性的PC-3和HeLa细胞未受明显影响。结论:PE38基因真核表达载体可实现HCC基因治疗的靶向性和高效性,有望成为肝细胞癌靶向基因治疗的有力工具。

肝癌靶向性AGAP表达载体构建及生物信息学分析

目的:构建肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)特异性镇痛抗肿瘤肽(analgesic-antitumor peptide,AGAP)基因真核表达载体,利用计算机辅助分析和预测所表达蛋白质的理化和结构特征,为探索生物毒素靶向抗肝癌作用奠定基础。方法:提取东亚钳蝎总RNA,用RT-PCR法扩增出AGAP基因,与载体pGL3/AFP连接构建重组质粒,酶切及测序鉴定,并利用蛋白质分析软件对其表达的蛋白二级结构水平及一些生物学特性进行预测,并转染HepG2细胞检测其是否表达。结果:重组质粒所表达的目的多肽经软件分析,发现在二级结构上没有变化,亲水性、抗原性等生物学活性也未受影响,转染HepG2细胞后能成功表达。结论:人AFP基因顺式作用元件调控AGAP真核表达载体构建成功。

HBVS-ecdCD40L融合基因构建及相应融合蛋白的二级结构预测

目的构建HBVS—ecdCD40L融合基因，并利用软件对其相应融合蛋白的二级结构进行预测。方法利用分子生物学技术将HBVS基因与人CD40L胞外段基因进行融合，构建融合基因及其真核表达载体，并利用蛋白质分析软件对相应融合蛋白二级结构水平的一些生物学特性进行预测。结果融合基因序列与设计一致，其相应氨基酸序列经软件分析，并与HBsAg和CD40L胞外段氨基酸序列分析结果比较，发现在二级结构上几乎无变化，亲水性和抗原性等生物学活性几乎未受影响。结论HBVS-ecdCD40L融合基因构建成功，软件分析表明融合过程未影响HBsAg和人CD40L胞外段的生物学活性，为进一步研究奠定基础。

体外负载HBeAg对乙型肝炎免疫耐受期患者树突状细胞功能的影响

目的探讨HBeAg对体外活化乙型肝炎免疫耐受期患者树突状细胞（DC）功能的影响。方法将24例患者分为HBV-1组（免疫耐受期）、HBV-2组（低或非HBV复制期），并设正常对照组，自各组外周血单核细胞中诱导培养DC，经HBeAg体外负载后，分别检测各组负载前后的DC表型、DC在同种异体混合淋巴细胞反应中的刺激能力和细胞因子的分泌。结果（1）与其他两组比较，HBV-1组患者DC表面分子表达率降低、刺激同种异体T淋巴细胞增殖和分泌IL-12的能力较弱；（2）经HBeAg刺激后的DC表面分子表达率升高，3组间CD86、人类白细胞抗原-DR表达率无明显差异，HBV-1组患者DC的CD80表达率较其他两组降低（P〈005）；（3）混合淋巴细胞反应实验显示，HBeAg负载的DC刺激同种异体T淋巴细胞增殖能力增强，在DC：T比例为1：5、1：10、1：20时，各组之间的刺激指数无明显差异；（4）HBeAg负载后的DC分泌IL-12水平较负载前明显增高，3组间细胞因子水平无明显差异。结论免疫耐受期乙肝患者存在DC成熟障碍和功能缺陷，HBeAg体外负载可提高DC功能，从而可能对增强免疫耐受期患者的HBeAg特异性免疫应答具有重要作用。

肝硬化患者双评分法评估PLT ALB PT水平比较

目的采用CTP及MELD两个评分系统探讨肝硬化患者血小板（platelet，PLT）、白蛋白（albumin，ALB）、凝血酶原时间（prothrombin time，PT）含量变化及临床意义，并了解评分系统优劣。方法101例肝硬化患者按Child—Pugh分级分为Child A级37例、Child B级18例、Child C级46例，按MELD评分分为〈18分和≥18分两组分别为69例和32例，另选正常对照组32例，检测其PLT、ALB、PT并进行对比分析，并对各水平做相关性分析。结果肝硬化患者Child—Pugh分级各组的PLT、ALB水平均低于正常对照组（P〈0．01），而PT水平均高于正常对照组（P〈0．05），肝硬化A级与C级患者的PLT水平差异有统计学意义（P〈0．01），肝硬化各级患者的ALB水平差异均有统计学意义（P〈0．01）。MELD评分各组及对照组之间的PLT、ALB、PT水平差异均有统计学意义（P〈0．01）。PT与PLT、ALB之间还存在负相关（P〈0．01）。结论肝硬化患者检测PLT、ALB、PT水平变化有助于病情的判断。CTP及MELD两个评分系统在本院均适用，MELD更为灵敏。

肠气囊肿症1例报告

临床上肠气囊肿症（pneumatosis cystoides intestinalis，PCI），亦称肠壁囊样积气症，是指分布于消化道黏膜下和（或）浆膜下多发性充满气体的囊肿。本病的确切发病率仍不明确，可发生于新生儿到老年人任何年龄组，可发生于消化道任何部位。因其临床少见且表现缺乏特异性，易造成漏诊和误诊。我院诊治的1例PCI。现报道如下：

L02脂肪变模型中氧化应激的发生及羊栖菜多糖的干预作用

目的建立人正常肝细胞株(L02)脂肪变模型,探讨软脂酸(PA)对肝细胞氧化应激的作用及羊栖菜多糖(SFPS)对脂肪变肝细胞氧化还原系统的影响。方法采用0.5 mmol/L的PA诱导L02细胞建立脂肪变模型,并予以不同浓度(25、50、100μg/m L)SFPS进行干预。Annexin V-FITC标记法检测细胞的凋亡,MTT比色法检测细胞增殖活力,测定细胞内过氧化产物丙二醛含量(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)。结果 SFPS可抑制PA对L02细胞增殖活性的下降和凋亡率的上升,降低MDA含量,升高SOD水平,不同浓度组间比较差异有统计学意义且具有剂量依赖性。结论 L02细胞脂肪变性时发生明显的氧化应激,羊栖菜多糖能在一定程度上减轻氧化损伤、抗细胞凋亡。

血清B7-H3与PCT和sICAM-1水平测定在早期诊断重症急性胰腺炎合并感染患者中的价值

目的分析血清协同刺激分子B7家族3(serum co-stimulatoy molecule B7 family 3,B7-H3)、降钙素原(procalcitonin,PCT)、可溶性细胞间黏附分子-1(soluble intercellular adhesion molecule-1,CAM-1)水平测定在早期诊断重症急性胰腺炎合并感染患者中的价值,旨在为临床早期诊治提供参考依据。方法选取2016年1月至2017年6月温州医科大学附属第二医院收治的重症急性胰腺炎患者232例,作为研究组,其中合并感染患者116例,作为感染组,未合并感染患者116例,将其作为非感染组,另选取同期进行健康体检的人群232例,作为对照组,对所有患者在入院第1、4、7天进行血清B7-H3、PCT及sICAM-1水平动态检测,分析其临床诊断价值。结果与对照组比较,研究组患者在各个时间点的血清B7-H3、PCT及sICAM-1水平均提高,差异有统计学意义(P均<0.05);与非感染组比较,感染组在各个时间点的血清B7-H3、PCT及sICAM-1水平均提高,差异有统计学意义(P均<0.05),三项指标水平均在第4天提高,之后均降低。结论对重症急性胰腺炎合并感染患者进行血清B7-H3、PCT及sICAM-1水平的测定,对疾病的早期诊断具有非常重要的价值,有助于临床对患者病情及疾病预后进行及时评估,为疾病及时诊治提供指导。