猪捷申病毒Swine/CH/IMH/03株VP1蛋白的原核表达及其反应原性

根据猪捷申病毒(PTV)Swine/CH/IMH/03株的基因组序列(GenBank登录号:DQ355222)设计了1对引物,采用RT-PCR方法扩增出了PTV的VP1基因片段,将其克隆到表达载体pET-32a(+)中,构建了重组质粒pET-VP1,经测序鉴定正确后,将其转化感受态细胞BL21(DE3)中,并进行IPTG诱导表达。结果表明,重组菌可表达分子质量为45 ku的融合蛋白,在1.0 mmol/L IPTG诱导6 h后,重组菌的表达效果最好,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的63.4%,表达的蛋白以包涵体的形式存在于菌体中。表达产物经Ni柱纯化后,薄层扫描显示,目的蛋白的纯度达到了97%。Western-blot结果显示,纯化后的VP1蛋白能与PTV Swine/CH/IMH/03株阳性血清发生特异性的免疫印迹反应,表明,原核表达的VP1蛋白具有良好的反应原性。

正链RNA病毒感染性克隆的构建策略及影响因素

利用全长cDNA构建感染性克隆是拯救RNA病毒的基础和关键,也是反向遗传技术的核心。文章综述了构建正链RNA病毒感染性克隆的基本思路和关键技术,总结了影响克隆感染性的因素,并对感染性克隆技术的应用做一简述。

猪流行性腹泻病毒S蛋白受体结合域的分析

以猪流行性腹泻病毒(PEDV)可溶性的猪氨基肽酶N受体为靶蛋白对PEDV S1基因特异性肽库进行3轮生物淘选,然后对30个淘选的噬菌体克隆进行测序。序列分析发现,2个噬菌体克隆展示无义氨基酸序列,其余28个噬菌体克隆展示的氨基酸序列位于PEDV S蛋白的第249-529位氨基酸区域,这个区域被命名为MRR。利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统对MRR基因进行真核表达。Western blot结果表明,表达的MRR重组蛋白能够与兔抗PEDV多克隆抗体反应。

猪流行性腹泻病毒N蛋白的真核表达及其亚细胞定位的初步分析

以构建的含有编码猪流行性腹泻病毒CV777株核衣壳蛋白(N)基因的阳性质粒pMDT-18-N为模板,用含有KpnⅠ和XhoⅠ酶切位点的上、下游引物扩增获得N基因,该PCR产物经KpnⅠ和XhoⅠ双酶切后定向克隆到经相同双酶切的真核表达载体pcDNA3.1(+)中,经过酶切鉴定和测序鉴定,将构建的重组质粒命名为pcD-NA3.1(+)-N,且未发现碱基的缺失和插入。用脂质体法将pcDNA3.1(+)-N转染Vero E6细胞,在48 h后,以针对猪流行性腹泻病毒核衣壳蛋白的鼠源`多抗血清进行Western blot、免疫荧光检测,并运用共聚焦显微镜分析N蛋白的亚细胞定位。结果表明N基因能在真核细胞Vero E6中正确表达,共聚焦分析结果表明N蛋白在细胞质和细胞核中定位。

流式细胞仪的原理及其在畜牧兽医中的应用

流式细胞分析,即流式细胞术,是用流式细胞仪测量液相中悬浮细胞或微粒的一种现代分析技术。它是众多不同学术背景、不同科技领域相结合的结晶,是物理学、生物学、医学等综合运用的产物。文章就流式细胞仪的原理及其在畜牧兽医中的应用做一综述。

犬细小病毒JN株的分离鉴定及VP2基因序列分析

本研究从疑似犬细小病毒感染犬粪便中分离鉴定一株犬细小病毒,并进行了VP2基因序列分析。分离株病毒命名为JN株,分离株病毒对猪红细胞的血凝效价为1∶512,Reed-Muench法测定分离株病毒TCID50为10-3.5/0.1mL,动物回归试验显示攻毒犬能复制出犬细小病毒病的典型临床症状和病理变化,VP2基因序列分析表明该分离株为CPV-2a亚型,与GenBank中的8株CPV VP2基因序列核苷酸同源性在98.7%～99.6%之间。

猪传染性胃肠炎病毒PCR检测方法研究进展

猪传染性胃肠炎是由猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)引起的以脱水、严重腹泻、呕吐、肠绒毛萎缩、初生仔猪高死亡率为主要特征的一种接触性传染病,是造成哺乳期仔猪死亡的主要疫病之一。我国20世纪50年代开始有该病的报道,给我国养猪业造成了重大经济损失。如能在发病早期快速确诊该病,对于本病的防治具有非常重要的作用。猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻和猪轮状病毒病在临床症状、病理变化、流行病学等方面高度相似,仅靠临床症状很难确诊。因此,建立准确的猪传染性胃肠炎病毒的检测方法意义重大。本文综述了国内近几年PCR检测方法研究进展。

兔出血症病毒VP60蛋白研究进展

兔出血症是由兔出血症病毒引起的一种发病率高、致死率高的烈性传染病,以肝坏死和肺出血为典型组织病变。兔出血症病毒VP60蛋白是该病毒主要的结构蛋白和免疫原性蛋白,能够诱导机体发生免疫应答,产生保护性抗体,因此关于该蛋白的结构、表达及功能是研究该病毒的一个重要内容。本文综述了国内学者近几年关于VP60蛋白的基因、表达和变异研究进展情况,希望能为兔出血症病毒研究提供参考。

猪捷申病的流行、诊断与防治

猪捷申病是由小RNA病毒科猪捷申病毒(porcine teschovirus,PTV)引起的一种病毒性传染病,是一种危害猪只健康的重要疫病,其临床症状表现为脑脊髓灰质炎、繁殖障碍、肺炎、下痢、心包炎和心肌炎以及皮肤损伤。该病自2003年在我国内蒙古被首次发现以来,近几年在黑龙江、云南、江西和广东等地养猪场相继被发现,表明该病在我国呈流行扩大之势。本文结合近几年国内学者的研究综述了该病的流行、诊断和防治策略,为广大兽医工作者和养猪从业者提供参考。

河南省进口肉类指定口岸对本省养殖业影响

随着河南省经济快速增长,人民收入水平提高,河南省居民饮食结构发生了较大变化,突出表现为对肉类及制品的消费需求越来越旺盛。河南是人口第一大省,肉类消费总量处于全国前列。但因耕地较多,其他土地类型可承载的养殖数量有限,肉类消费已不能自足,近年肉类进口量也逐年增多。为满足人民日益增长的肉类消费需求,经多方努力,河南省建成进口肉类指定口岸。肉类口岸作为河南省对外开放的新高地,在带来极大贸易便利的同时,也将对河南省养殖业带来深远影响。

数字PCR的原理及在动物传染病诊断上的应用

数字PCR技术(digital PCR,dPCR)是近几年在分子生物学领域迅速发展起来的新型革命性基因检测技术,属于第三代PCR技术。相较于前两代PCR,数字PCR具有高度灵敏、绝对定量、扩增效率高、不需要建立标准曲线的优势,因此,近年来数字PCR在稀有基因突变检测、转基因检测、病原微生物检测、拷贝数变异分析、食品检测等领域得到了广泛应用。随着数字PCR技术的成熟和数字PCR仪的普及,该技术必将在动物传染病诊断中发挥重大作用。

一例副猪嗜血杆菌的分离培养及药敏试验

副猪嗜血杆菌(HPS)主要危害保育猪群,引发以脑膜炎、关节炎、多发性浆膜炎等为主要特征的传染病,猪群一旦发病,病死率较高,给养猪业造成重大经济损失。从疑似发生副猪嗜血杆菌病的河南濮阳某猪场无菌采集病料,并进行触片镜检、分离培养、生化试验。结果成功分离到了副猪嗜血杆菌,药敏试验显示,分离菌株对氟苯尼考、泰妙菌素、氟甲砜霉素、头孢菌素、丁胺卡那霉素、头孢噻肟高敏,对红霉素、克林霉素、庆大霉素、环丙沙星、恩诺沙星、链霉素、土霉素低敏。根据药敏试验结果,对发病猪群进行治疗,取得了良好的治疗效果。

一例副猪嗜血杆菌的分离培养及药敏试验

副猪嗜血杆菌（HPS）是革兰氏阴性细小杆菌，属于巴斯德杆菌科嗜血杆菌属，主要危害保育猪群，引发以脑膜炎、关节炎、多发性浆膜炎等为主要特征的传染病，猪群一旦发病，病死率较高，给养猪业造成重大经济损失。试验从疑似发生副猪嗜血杆菌病的河南濮阳某猪场无菌采集病料，并进行触片镜检、分离培养、生化试验。结果表明，试验成功分离到了副猪嗜血杆菌，分离菌株对氟苯尼考、泰妙菌素、氟甲砜霉素、头孢菌素、丁胺卡那霉素、头孢噻肟高敏，对红霉素、克林霉素、庆大霉素、环丙沙星、恩诺沙星、链霉素、土霉素低敏。根据药敏试验结果，对发病猪群进行治疗，取得了良好的治疗效果。

国内猪捷申病病毒研究进展

猪捷申病病毒(Porcine teschovirus,PTV)属于小RNA病毒科(Picornaviridae)捷申病毒属(Teschovirus)成员,主要引起猪的脑脊髓灰质炎、生殖障碍、肺炎、下痢、心包炎和心肌炎等临床症状.2003年首次在我国被发现,引起了猪病研究人员的广泛关注.本文综述了近几年国内对猪捷申病毒的研究进展,以期为猪捷申病毒研究者提供参考.

宁远县规模猪场伪狂犬病野毒感染情况的调查

为调查了解湖南省宁远县规模猪场伪狂犬病野毒感染情况,选取该县具有代表性的30个规模猪场采集557份血样,通过gpI-ELISA抗体检测试剂盒检测猪伪狂犬病野毒感染抗体(PRVgpI抗体)。结果表明,557份血清中,PRVgp I抗体阳性率为2.51%,该县17个乡镇、街道(舜陵、桐山街道除外)中,8个乡镇(街道)的规模猪场检出PRVgpI抗体。结果表明,宁远县规模猪场猪伪狂犬病野毒感染率较低,但分布区域较广。

河南濮阳食品农产品出口现状对策研究

濮阳是河南省粮棉主要产区之一,但农产品出口一直不容乐观,为了分析我市食品农产品出口的优劣条件以及影响和制约出口增长的主客观因素,充分挖掘农产品出口潜力,促进濮阳外贸经济再上新台阶,对濮阳食品农产品现状进行分析并提出建议措施。

猪流行性腹泻病毒核衣壳蛋白与感染细胞核磷蛋白的共定位分析

【目的】阐明猪流行性腹泻病毒(PEDV)核衣壳蛋白与病毒感染细胞核仁成分B23.1蛋白的共定位特征。【方法】分别参照GenBank中PEDV CV777株的N基因序列(AF353511)和编码人细胞核仁蛋白B23.1基因序列(BC050628.1),设计、合成扩增N基因和B23.1基因的引物,利用RT-PCR技术扩增了N基因和Vero E6细胞的B23.1基因的cDNA,分别克隆到真核表达载体pAcGFP1-C1和pDsRed2-N1,获得重组质粒pAcGFP1-C1/N和pDsRed2-N1/B23.1,共转染Vero E6细胞。【结果】Western blots分析表明这些融合蛋白在转染的Vero E6细胞中表达;共聚焦显微镜技术分析表明在共转染Vero E6细胞中猪流行性腹泻病毒N蛋白与Vero E6细胞核磷蛋白B23.1发生共定位。【结论】为进一步鉴定PEDV N蛋白中核仁定位信号和N蛋白核仁定位机制提供可靠依据。