北京市478人犬伤者对狂犬病的知识、态度和行为

目的了解北京市478个犬、猫伤者对狂犬病相关知识知晓情况、态度及行为特点,为在该地区开展狂犬病预防提供依据。方法应用描述流行病学研究方法,对受伤后就诊的患者进行问卷调查,询问受伤史、狂犬病相关知识的知晓及犬伤后处置情况等。结果调查478名犬伤者,咬伤部位以上肢为主,占76%。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级犬伤者所占比例分别为24%、70%和6%;被咬前知道狂犬病的占82%,了解狂犬病预防知识的占55%;被咬后能自行正确处理伤口的占59%,规范接种疫苗的占99%,抗体注射者占22%。结论北京市犬伤人群对狂犬病知识的了解程度不高及伤后正确预防处理措施的比率均偏低,因此,建议疾病预防控制机构应对一般人群的普遍预防和对高危人群的重点预防相结合,通过多种途径加强对狂犬病预防控制知识的宣传教育。

云南省狂犬病病人和犬类感染狂犬病病毒及M基因序列分析

目的调查云南省部分地区狂犬病病人和疫点犬群携带狂犬病病毒（rabies virus,RABV）状况及RABV膜基质蛋白（matrixprotein,M）基因序列分析,为狂犬病防控提供科学依据。方法 2008-2009年在云南省采集犬脑组织标本606份,狂犬病病人唾液8份,脑脊液1份,用直接免疫荧光试验检测RABV抗原,用RT-PCR检测RABV核酸,对阳性标本进行M基因序列测定和分析。结果所有标本经检测,RABV抗原和/或核酸阳性16份,其中疫点扑杀的貌似健康犬脑组织3.10%（10/323）,狂犬病病人唾液5份、脑脊液1份。狗肉餐馆屠宰犬的脑组织283份均为阴性。云南16株RABV的M基因核苷酸和氨基酸同源性分别为88.5%～100%和85.2%～99.5%。它们与中国人用疫苗株aG核苷酸和氨基酸同源性分别为83.9%～85.7%和82.3%～93.6%;与人用疫苗株CTN181核苷酸和氨基酸同源性分别为99%～99.7%和98.5%～99%。系统进化分析表明,云南16株RABV均属基因Ⅰ型并可分为进化Ⅰ和Ⅱ群并分别与泰国等东南亚国家和相邻省份流行株具有较近的亲缘关系。结论云南省狂犬病流行与周边省份和东南亚地区的狂犬病传播扩散有一定关系;狂犬病疫点部分貌似健康犬携带RABV并具有传染源意义;云南狂犬病病毒株M基因与我国人用狂犬病疫苗CTN株的同源性和亲缘关系较近,但与aG株同源性存在。

BHK-21和BSR细胞用于RFFIT检测的一致性研究

目的比较BSR和BHK-21两种细胞分别引入快速荧光灶抑制试验(RFFIT)检测体系后其检测结果的差异。方法将BSR、BHK-21两种细胞分别引入RFFIT体系后,检测106份人血清样品中狂犬病毒中和抗体,并分析结果的相关性和一致性。结果两种方法结果之间有较好的直线相关关系(r=0.859),并有正向回归关系,直线回归方程:Y=2.261+0.737X(P<0.01);经同一份样品的重复检验,两种方法检测的稳定性较好。结论 BHK-21细胞系可以用于国内RFFIT检测体系。

狂犬病早期临床表现与实验室诊断研究

目的对狂犬病的早期临床表现及实验室诊断进行分析,以提高临床早期诊断水平。方法对北京地坛医院2010年9月—2011年10月收治的经实验室检查确诊的9例狂犬病患者进行前瞻性研究,找出早期特异性表现,并对实验室特异性检测结果进行分析。结果所有患者在病程第1～2天均有低热、烦躁、完全失眠而不困倦等表现,这种状态可持续至病程的第3～4天。恐水、恐风、畏光等特征性症状多出现于病程的第3天及以后。所有患者外周血白细胞计数及中性粒细胞百分比明显升高,均值分别为(15.55±5.25)×109/L、(84.24±6.16)%。部分患者ALT、AST、BUN、CRE升高。所有患者CK明显升高,均值为(6931.9±1586.3)U/L。患者血液、脑脊液、唾液标本经反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测,狂犬病病毒核酸为阳性者分别为2例(2/9)、2例(2/5)、4例(4/6)。8例(8/9)血液中的狂犬病病毒中和抗体滴度升高。结论低热、烦躁、完全失眠而不困倦等症状较恐水、恐风、畏光等出现更早,为狂犬病的早期特征。RT-PCR检测血液、脑脊液、唾液标本的狂犬病病毒核酸与快速免疫荧光灶抑制试验检测血清相结合,可作为狂犬病实验室诊断的有效方法。

探针导向重组酶介导等温扩增法检测MTB rpoB基因突变的应用价值

目的建立可快速检测MTB rpoB基因516位点突变的探针导向重组酶介导等温扩增法(probedirected recombinase amplification,PDRA)。方法设计4条探针[1条野生型探针(P-W)及3条突变型探针(P-GGC、P-GTC、P-TAC)]和1条共同的下游引物,分别构建TB-516-W、TB-516-GGC、TB-516-GTC和TB-516-TAC4种检测体系,在39℃条件下恒温扩增40 min。通过阳性阈值时间判定MTB rpoB基因516位点是否发生突变及其突变类型;通过同一探针检测对应的重组质粒确定该检测体系的敏感度;通过不同探针检测某一种重组质粒,根据阳性阈值时间确定该检测体系的特异度。应用建立的PDRA方法检测6株利福平耐药MTB菌株和35份MTB培养阳性的痰标本,并与一代测序结果进行比较。结果 4种检测体系检测对应重组质粒的敏感度为1000拷贝/μl。4种检测体系的特异度良好,探针与靶序列完全匹配时,阳性阈值时间早;探针与靶序列不完全匹配时,阳性阈值时间晚,具有稳定的阳性阈值时间差值,体系TB-516 W,TB-516-GGC,TB-516-GTC和TB-516-TAC的阳性阈值时间差值分别为7.0、5.8、10.0、7.0 min。PDRA检测6株MTB利福平耐药菌株和35份MTB培养阳性痰标本的结果与测序结果一致。结论本研究初步建立了可应用于MTB利福平耐药rpoB基因516位点突变检测的PDRA方法,该方法检测敏感度高,特异度好,具有一定的实验室应用价值。

人乳头瘤病毒6型和11型通用型含内源性内参的重组酶介导的等温扩增技术检测方法的建立

目的建立一种通用型含内源性内参的重组酶介导的等温扩增技术(EIC-RAA)检测人乳头瘤病毒6型(HPV-6)和11型(HPV-11)的方法,以实现HPV-6和HPV-11的简单、准确、快速筛查。方法针对HPV-6和HPV-11的L1片段保守区域设计通用型引物和探针并结合核糖核酸酶P(RNaseP)基因引物和探针作为内参建立了检测HPV-6和HPV-11的EIC-RAA方法;用系列浓度稀释的质粒和不同亚型HPV样本核酸检验其灵敏度、重复性和特异度;收集的230份临床样本进行EIC-RAA和商业化HPV PCR-荧光探针法检测,并对结果进行比较。结果建立的EIC-RAA方法可在39℃条件下30min内实现HPV-6和HPV-11的检测,其灵敏度为10copies/reaction,重复性好,特异度高,EIC-RAA检测结果与商业化HPV PCR-荧光探针法检测结果的符合率为100%。结论建立了一种检测HPV-6和HPV-11的EIC-RAA方法,该检测方法具有简单、准确、快速的优点,在HPV-6和HPV-11的筛查中具有潜在的应用价值。

双重平行检测批量样品对两个实验室RFFIT检测效能的评价

快速荧光灶抑制试验(RFFIT)是世界卫生组织(World Health Organisation,WHO)推荐的狂犬病病毒中和抗体检测标准方法之一,国内进行RFFIT检测的不同实验室之间互评可促进该方法推广时的标准化。病毒病预防控制所和中国药品生物制品检定所对200例人血清进行了双重平行RFFIT检测。结果显示双方检测中和抗体效价几何均值(genomic means titration,GMT)为1.89、1.84I U/mL,差别无统计学意义(t=-0.94,P>0.05);血清中和抗体阳性率为95.00%、93.00%,差别无统计学意义(χ2=0.71,P>0.05);双方结果定性一致率为89.00%,发生结果定性不一致的22例(11.00%)血清双方检测结果均<1I U/mL;67例双方检测结果均<1I U/mL的血清样品中有22例(32.84%)发生结果定性不一致。

肠道病毒亚型在不同人群中的分布特点及致病风险分析

目的分析肠道病毒不同基因型在正常儿童、腹泻患病儿童、手足口患病儿童和脑炎脑膜炎患病儿童中的分布特点以及对不同肠道病毒致病风险的评估。方法对河北361份正常组粪便标本、273份腹泻组粪便标本以及湖南320份手足口组粪便标本、105份脑炎脑膜炎组脑脊液标本和182份正常组粪便标本采用巢氏一步方法检测标本中肠道病毒,并对阳性标本进行测序分析基因型。结果河北361份正常组粪便标本阳性率为16.34%(59/361)。273份腹泻组粪便标本阳性率为18.68%(51/273)。湖南320份手足口组粪便标本阳性率为85.31%(273/320)。105份脑炎脑膜炎组脑脊液阳性率为23.81%(25/105),182份正常组粪便标本阳性率为18.68%(34/182)。阳性率差异在5组患儿中有统计学意义(χ2=466.4,P<0.0001)。结论肠道病毒在5组患儿分布存在差异,统计结果显示,肠道病毒是导致腹泻的危险因素,EV71和CVA与患手足口病高度相关,EV71与脑炎脑膜炎患病存在相关关系。

免疫PCR技术在微量非核酸分子检测方面的应用进展

免疫PCR(Immuno-PCR,IPCR)技术是一种结合了酶联免疫吸附测定(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)的特异性和聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR)的高灵敏度的检测方法。与ELISA相比,IPCR由于PCR技术指数扩增的能力,检测灵敏度可以达到fg/mL。由于具有高灵敏度,IPCR在微量非核酸分子检测方面有着广泛的应用前景。本文主要介绍了传统IPCR和改良IPCR的原理和优缺点,概述了IPCR技术在病毒、细菌、寄生虫、肿瘤标志物、真菌、食品等方面的应用进展,总结了影响IPCR技术检测的因素并展望了IPCR技术的发展趋势。

血液中念珠菌重组人甘露聚糖结合凝集素蛋白磁珠富集联合重组酶辅助聚合酶链式反应检测方法的建立

目的建立重组人甘露聚糖结合凝集素蛋白(M1蛋白)磁珠富集病原体结合重组酶辅助聚合酶链式反应(RAP)巢式核酸扩增技术检测血液中白色念珠菌和热带念珠菌的方法,以实现对白色念珠菌血症和热带念珠菌血症的早期诊断。方法针对白色念珠菌和热带念珠菌的内转录间隔区的高度保守区域的设计引物探针,建立检测白色念珠菌和热带念珠菌的RAP检测方法;用梯度稀释的标准菌株核酸和临床常见的血流感染病原体核酸检验灵敏度、重复性、特异性;用模拟样本进行M1蛋白磁珠富集血浆白色念珠菌和热带念珠菌RAP和实时荧光PCR的检测,并对结果进行比较。结果建立的双重RAP方法灵敏度为2.4~2.8拷贝/反应,重复性好,特异性高;M1蛋白磁珠富集病原体结合双重RAP方法可在4 h内完成对血浆中白色念珠菌和热带念珠菌的检测,<10 CFU/ml的病原体富集后进行RAP检测样本数较PCR检测样本数多。结论本研究建立了检测血液中白色念珠菌和热带念珠菌的双重RAP方法,该检测方法具备准确、快速、减少污染物的优点,在念珠菌血症快速检测中具有较好的应用潜力。

病毒性脑炎患者脑脊液和血清配对标本疱疹病毒和肠道病毒的检出率比较分析

目的比较病毒性脑炎患者脑脊液、血清配对标本中疱疹病毒属病毒,肠道病毒的检出率。方法采集2017年12月至2018年2月湖南省长沙市儿童医院诊断疑似病毒性脑膜炎患儿109例脑脊液、血清配对标本,采用一步法巢式实时荧光定量RT-PCR和实时荧光定量PCR法分别进行肠道病毒和疱疹病毒属病毒检测,分析不同标本类型病毒检出率。运用SPSS17.0对检测结果进行统计分析。结果109例患者的配对标本人疱疹病毒6型(human herpes virus type 6, HHV6)、单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus,HSV)、EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)、巨细胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)、肠道病毒(Enterovirus group A type 71,EV-A71)血清阳性率分别为7.34%、4.59%、7.34%、9.17%、10.09%,脑脊液阳性率分别为5.50%、2.75%、0、5.50%、6.42%。结果显示两种类型标本病毒检测结果的差异有统计学意义(P<0.05)。在脑脊液和血液样本中,可检出EV-A71病毒阳性的最长时间分别为发病后2 d和7 d,可检出CMV病毒阳性的最长时间分别为发病后3 d和26 d,可检出HHV6病毒阳性的最长时间分别为发病后7 d和8 d,可检出HSV1病毒阳性的最长时间均为发病后12 d;在血清样本中,可检出EBV病毒阳性最长时间为发病后10 d,而脑脊液样本在发病10 d内均无法检出该病毒。结论EV-A71是导致该地区病毒性脑炎的最主要的病原体,血清标本病毒总体阳性率高于脑脊液标本。血清内脑炎相关的大多数病毒的存活时间较长于脑脊液中。提示对于病毒性脑炎患儿病原检测,时间具有重要意义,可根据发病时间合理选择标本类型进行测定。

病毒性脑炎脑膜炎症候群病原学研究进展

脑炎脑膜炎症候群是由细菌、病毒、寄生虫等多种病原体感染引起的中枢神经系统疾病.病毒性脑炎脑膜炎较为常见,主要病原体为虫媒病毒、肠道病毒、副粘病毒、疱疹病毒、弹状病毒和腺病毒等.本文概述了病毒性脑炎脑膜炎症候群病原学研究进展,并展望了病毒性脑炎脑膜炎症候群研究发展趋势.

利用二代测序技术在不明原因发热的血液样本中检测到人细环病毒

目的阐明不明原因发热（fever of unknown origin，FUO）的血液样本中用常规方法难以检测到的潜在病原。方法利用二代测序技术序列非依赖的特性对病原核酸进行随机捕获，随后采用多重链置换扩增（multiple displacement amplification, MDA）方法进行富集。在得到测序结果后，进行宏基因组数据分析，构建进化树，最终实现对未知病原的鉴定。结果对10份不明原因发热的血液样本进行宏基因组二代测序分析时未发现引起发热的常见病原体序列，但发现了大量人细环病毒（Torque teno Virus，TTV）存在的现象。将所有相关测序读长进行组装拼接，并计算得到的一致性序列在匹配的参考序列上的基因组覆盖度。在对组装出的置信序列进行进化分析后，发现其分属于α TTV、β TTV和γ TTV三个属。结论对本研究中发现的TTV的基因组特征、进化特征以及作为免疫水平评估的意义进行了分析。而对于本研究中只检测出三个属的TTV的现象，可能是因为TTV具有潜在的病原性以及感染性疾病所导致的宿主免疫水平低下，也有可能是由于其他非感染性病因导致的宿主免疫水平降低所导致。

1996-2009年中国狂犬病流行病学分析

目的分析1996-2009年中国狂犬病流行特征,探讨流行相关因素,明确防治重点,为制定防治措施提供参考依据。方法用Excel 2003和MapInfo 7.0软件对收集到的1996-2009年中国狂犬病疫情资料进行整理和分析,对近14年来中国狂犬病流行概况、三间分布特征以及疫情动态特征进行描述,并绘制相关统计图表。结果 14年来除西藏和青海之外的省份均有狂犬病病例报告,共报告狂犬病22 060例,发病率总体呈现上升趋势。狂犬病报告累积病例数居前6位的省(自治区)为广西、湖南、贵州、广东、江西和湖北,6省共报告狂犬病14 920例,占全国报告病例总数的67.63%。全国报告病例男女性别比为2.23∶1,职业分布以农民为主,其次为学生和散居儿童,三者占全部报告病例数的88.52%,夏秋季为高发季节。我国狂犬病暴露后处置率较低。结论控制疫苗价格,继续加强对狂犬病高发地区的疫情防控工作,控制狂犬病的蔓延。提高狂犬病暴露后人群的预防治疗率,控制犬的数量、提高犬的免疫率及加强对犬的贸易管理。

狂犬病毒中和抗体检测快速荧光灶抑制试验的建立

目的建立检测狂犬病毒中和抗体的快速荧光灶抑制试验（RFFIT），检测狂犬病毒中和抗体滴度。方法以狂犬病标准毒株CVS-11为标准攻击毒，制备三代病毒，建立CVS—11病毒库；以国际标准抗狂犬病毒血清为对照血清，参考法国巴斯德研究所的RFFIT操作标准，建立适应于中国狂犬病毒中和抗体检测的RFFIT方法，并验证该方法的特异性、稳定性和重复性。结果成功建立了检测狂犬病毒中和抗体的RFFIT试验，验证该试验方法的特异性为100％；重复性试验表明，在本实验室和不同实验室的检测结果P值均〉0．5，具有很好的重复性。结论RFFIT方法的建立进一步完善了中国狂犬病的实验室检测技术，也将提升中国狂犬病的整体监测能力。

2010年中国狂犬病疫情分析

目的 了解我国狂犬病持续流行相关影响因素,以其对防控工作提供基础数据.方法 采用统计分析和描述流行病学的方法对我国2010年狂犬病的流行情况进行分析.结果 2010年全国23个省817个县（区）报告狂犬病病例为2048例,较2009年下降7.46％.病例以儿童和老人发病率较高,职业以农民（69.14％）为主,男女发病比为2.44：1.全国哨点监测共上报640例个案,致伤动物以犬（87.50％）为主,暴露方式以咬伤为主,病例的暴露后自行处理率、疫苗注射率及被动免疫制剂使用率仍然较差.门诊监测病例暴露后预防处置除个别省外大部分监测点疫苗注射率达98％以上,但Ⅲ度暴露后被动免疫制剂的使用率不高.结论 2010年全国狂犬病疫情有所缓解,门诊病例暴露后预防处置情况良好,但个案病例暴露后预防处置情况依然没有得到改善.

中国狂犬病毒感染分布状况调查

目的了解中国狂犬病不同流行区狂犬病毒的感染分布情况。方法采集中国狂犬病高、中、低发病区动物脑组织以及疑似病例标本，利用直接免疫荧光法（DFA）和RT-PCR法检测狂犬病毒感染。结果DFA法检测3007份犬脑组织标本，狂犬病毒阳性率为8．4％（254／3007），再经RT-PCR法验证，狂犬病毒阳性率为30．7％（78／254）。DFA法检测93份伤人犬和猫的脑组织标本，狂犬病毒阳性率为67．7％（63／93），再经RT-PCR检测全部为阳性。此外，调查区域的黑线姬鼠、鼬獾和疑似病例标本中也检测到狂犬病毒。不同省份以及同一省份不同发病地犬狂犬病毒感染率差异无统计学意义。结论中国狂犬病流行区家养犬（猫）中存在较高的狂犬病毒感染率，野生动物中也有狂犬病毒感染。

湖南省1979-2010年狂犬病流行特征及其毒株遗传关系分析

目的分析1979-2010年湖南省狂犬病流行特征及分离病毒N基因特征,探讨疫情波动影响因素及病毒进化情况。方法采用回顾性与描述性流行病学方法对湖南省32年来,狂犬病疫情数据进行统计分析;利用PubMed-Entrez Search程序建立GenBank、EMBL报道的湖南省境内分离的狂犬病毒N基因序列本地数据库,应用生物信息学方法分析病毒N基因特征与变异情况,参考贵州与广西2个高发省份分离的部分狂犬病毒及国内疫苗株CTN-1-V N基因序列,运用Clustal W 1.83软件进行多重序列比对,运用MEGA 5.0.4软件构建N基因系统进化树,分析湖南省分离毒株与贵州、广西分离株亲缘关系及病毒遗传特征差异。结果 32年来,湖南省累计报告狂犬病病例12 576例,总发病率0.69/10万;全省124个县(市、区)均有疫情报告;病例集中于湘南与湘中地区;7～10月份发病数较多(43.23%);农民所占比例最大(64.35%)。58株毒株N基因全序列平均GC含量为44.49%,AT含量为55.51%,平均单链分子量为409.7 KDa;氨基酸组成含量最高的为亮氨酸(Leu),含量最低的为色氨酸(Trp);58株毒株与贵州、广西及国内疫苗株有较近亲缘关系;58株病毒全部属于狂犬病毒基因I型。结论 32年来,湖南省狂犬病疫情存在较大波动;所分离的58株毒株遗传较稳定,未发生关键性变异。

广西2004-2008年狂犬病高发因素分析

目的分析广西2004-2008年狂犬病流行病学特征和2006--2008年健康犬脑带毒检测结果，探讨广西狂犬病高发因素及相关性。方法收集分析2004--2008年广西疾病监测信息系统和全国狂犬病监测系统资料，DFA和RT-PCR法检测2006--2008年健康犬脑标本。结果2004—2008年间广西共报告狂犬病2463例，年发病率0．98／10万。疫情波及95个县，高发县数量减少，低发县数量增多，中西部地区疫情增长迅速。病例四季没有显著高峰。高发人群为农民、儿童和散居儿童，〈20岁和≥40岁发病较多。病例犬伤占83．79％；病例多为Ⅲ级暴露，占78．5％；受伤部位上下肢占83．17％，头面颈部占10．56％。67．88％的病例未处理暴露伤口，18．31％注射狂犬疫苗，3．63％Ⅲ级暴露病例注射被动免疫制剂；潜伏期的中位数为60d。2006--2008年健康犬脑狂犬病毒RT—PCR检测阳性率分别为1．92％、0．93％和0．89％。结论暴露后处置未能规范实行、地域内存在大量的狂犬病毒感染的健康犬是广西狂犬病高发的两个重要因素。

中国2007年狂犬病流行特征分析

自1996年以来，我国狂犬病疫情一直持续上升，2007年达到近年来最高点3302例，病例数仅次于印度，居世界第二位。为明确我国狂犬病疫情最新地理分布区域和流行特征，进一步开展防控工作，特对收集的2007年狂犬病疫情资料进行汇总和分析。