陕西省部分地区零售肉中沙门氏菌和奇异变形杆菌Ⅰ类整合子检测与耐药分析

采用PCR技术检测2007—2008年分离于陕西省的443份零售肉中63株沙门氏菌和29株奇异变形杆菌Ⅰ类整合子,得到其在菌株中的流行情况;使用限制性内切酶酶切和DNA序列分析技术确定Ⅰ类整合子所携带的耐药基因盒;采用国家临床实验室标准化委员会(CLSI)推荐的琼脂稀释法测定Ⅰ类整合子阳性菌株对14种抗生素的药敏性。结果表明:10株(16%)沙门氏菌含有Ⅰ类整合子,其大小主要为1281bp和1842bp两种类型,携带的耐药基因分别为IntI1-blaPSE-1和dhfrXII-orf-aadA2;7株(24%)变形杆菌含有Ⅰ类整合子,主要为1123、1526、1590bp 3种类型,携带的耐药基因分别有IntI1-blaPSE-1、aadB-aadA2和dfr17-aadA5。分离自陕西省零售肉中携带有多种Ⅰ类整合子的沙门氏菌和奇异变形杆菌均为多重耐药株,耐药基因分别介导对氨基糖苷类、β-内酰胺类和甲氧苄氨嘧啶类抗生素的抗性。奇异变形杆菌中Ⅰ类整合子检出率比沙门氏菌高,且种类较为丰富。

纤维素与清洁能源

本文介绍了纤维素在乙醇的发酵制备、生物制氢、沼气的发酵制备、生物柴油等方面的应用,存在的问题以及解决方法.说明了纤维素在清洁能源方面具有巨大的应用价值.

固氮菌及其共生体系修复土壤重金属污染

重金属是土壤中的重要污染物。近年来,人类活动引起的重金属向土壤环境的释放呈加剧的趋势。介绍了土壤重金属污染的主要修复方法及其特点,重金属对微生物的毒害以及微生物抗重金属毒害机理,固氮菌及其共生体系修复土壤重金属污染的研究进展以及展望。重金属污染区一般氮素缺乏,通过固氮菌可以方便、低成本地降低污染度,使土壤趋于无污染。

生物沥滤法去除污泥中重金属的研究进展

介绍了污泥的处理方法,生物沥滤法去除污泥中重金属的机理及影响因素,并探讨了污泥农用的前景。

沙门氏菌抗生素抗性机理研究进展

沙门氏菌的多重耐药性问题已经成为世界范围内的公共卫生和经济问题。目前沙门氏菌抗生素抗性机理的研究主要集中以下方面:(1)基因突变与抗生素抗性;(2)外排泵与抗生素抗性;(3)耐药基因编码的钝化酶和灭活酶引起的抗生素抗性;(4)可移动的细菌遗传耐药基因元件及其转移与抗生素抗性。本文基于以上几个方面综述了与沙门氏菌抗生素抗性机理研究相关的研究动态和研究进展。

2007—2008年西安地区鸡肉源沙门氏菌相关特性分析

目的:研究260株2007—2008年分离于西安市零售鸡肉中沙门氏菌的药敏性、血清型和基因型,以确保食品安全。方法:使用临床实验室标准化委员会(the Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)推荐的琼脂稀释法测定沙门氏菌的药敏性;世界卫生组织(WHO)推荐的玻片凝集法测定沙门氏菌的血清型;使用美国疾病预防控制中心推荐的脉冲场凝胶电泳法确定沙门氏菌的DNA酶切图谱,BioNumerics软件分析电泳结果,确定沙门氏菌的基因型。结果:沙门氏菌对萘啶酮酸、环丙沙星、左氧氟沙星、加替沙星、氨苄西林、阿莫西林-克拉维酸、头孢哌酮、头孢曲松和头孢西丁的耐药率分别为81.4%、29.2%、22.4%、21.8%、34.6%、37.7%、32.6%、23.1%和1.9%。260株沙门氏菌共涵盖21个血清型,以肠炎沙门氏菌(Salmonella Enteritidis)、舒卜拉沙门氏菌(S.Shubra)、印第安纳沙门氏菌(S.Indiana)、鼠伤寒沙门氏菌(S.Typhimurium)、丘古沙门氏菌(S.Djugu)、德尔卑沙门氏菌(S.Derby)、维尔肖沙门氏菌(S.Virchow)、奥兹马森沙门氏菌(S.Othmarschen)和沙门氏菌Ⅱ(SalmonellaⅡ)等比较常见。6.1%的舒卜拉沙门氏菌和22.6%的印第安纳沙门氏菌至少可耐15种抗生素,耐药性最强。4种最为常见的肠炎沙门氏菌、舒卜拉沙门氏菌、印第安纳沙门氏菌和鼠伤寒沙门氏菌均表现为基因型多样性,不同血清型沙门氏菌的流行状况随时间和地点的改变呈现出不同规律性。结论:西安市鸡肉源沙门氏菌的药敏性、血清型和基因型具有多样性特征,存在耐药现象。

陕西关中畜禽肉及凉拌菜中沙门氏菌污染分析

为了解陕西省关中地区食品中沙门氏菌的污染状况及分布,初步确定污染沙门氏菌的高危食品种类,为沙门氏菌检测、监测和食品安全控制提供理论依据。本研究按照GB/T 4789.1-2003规定的方法采集陕西省西安、杨凌和宝鸡等地超市和农贸市场的零售肉样品443份,凉拌菜样品209份;使用选择性培养基分离沙门氏菌,采用PCR技术对沙门氏菌进行鉴定。结果发现5大类食品中,鸡肉被沙门氏菌污染的状况最为严重(69.9%),其他食品污染率由高到低依次为羊肉(55.3%)、牛肉(30.1%)、猪肉(19.4%)和凉拌菜(9.6%);肉类食品的污染状况(45.2%)远高于凉拌菜(9.6%);从超市采集的零售肉样品沙门氏菌污染率(46.8%)低于从农贸市场采集的零售肉样品(54.6%);西安地区零售肉沙门氏菌污染率最高,其次分别为杨凌和宝鸡地区;杨凌地区即食凉拌菜沙门氏菌污染率最高(6.7%),其次分别为宝鸡(2.9%)和西安(0%)。从结果可得出,陕西关中地区的零售肉和即食凉拌菜已在不同程度上受到沙门氏菌污染。

弯曲菌快速检测技术研究及应用进展

弯曲菌是引起人类食源性腹泻的主要病原菌之一,快速及特异地检测该致病菌对控制弯曲菌病传播至关重要。本文综述了近年来基于蛋白、核酸和其他水平的技术在弯曲菌快速检测中的应用研究,并对未来弯曲菌检测技术的发展趋势和研究方向进行展望,以期为快速、准确、高效、低成本、高通量的弯曲菌检测方法的建立提供参考。

猪源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药性及其SCCmec基因分型研究

为了解陕西猪场耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的耐药表型及其SCCmec基因型分布情况,我们于2009年1月～7月在陕西地区6个规模化猪场,采集鼻腔拭子共计173份,利用选择性培养基分离金黄色葡萄球菌(SA),采用多重PCR方法扩增其中是否含有nuc基因和mecA基因进行MRSA鉴定;以琼脂稀释法进行药敏试验;并通过多重PCR方法对SCCmec进行基因分型。结果显示,调查的6个猪场中有2个猪场分离到MRSA,共分离到83株SA,其中有14株(16.9%)为MRSA,均为SCCmec-IVb型;药敏结果显示MRSA除对CFP、CHL、AMK和VAN敏感外,对CIP、OXA耐药率分别为57.1%和92.6%,对FOX、TET、ERY、甲氧嘧啶和卡那霉素的耐药率均为100%。结果显示了猪源SCCmec-IVb型MRSA株具有多重耐药特点,与人源SCCmec-IV型MRSA株耐药谱存在较大差异,这一结果提示猪源MRSA容易通过猪及其产品感染人。

胚胎干细胞的特点及应用

本文介绍了胚胎干细胞的特点,阐述了它在细胞分化、育种、器官移植、基因治疗、寻找新药、基因功能研究等方面的应用及其存在问题。

食源性大肠杆菌耐药性检测

采用美国临床实验室标准化委员会(National Committee of Clinical Laboratory Standard简称NC-CLS)推荐的琼脂稀释法,以大肠埃希氏菌ATCC25922、粪肠球菌ATCC29212和金黄色葡萄球菌ATCC29213为质控菌株,对411株分离自鸡肉和凉拌菜的大肠杆菌进行了6大类共12种抗生素的药敏性检测。结果表明受试菌株对四环素的耐药率(98.3%)最高,其次是链霉素(71.3%)、奈定酮酸(68.4%)、阿莫西林(67.6%)、氨苄青霉素(61.8%)、环丙沙星(50.6%)、氯霉素(48.4%)、卡那霉素(40.6%)、庆大霉素(36.7%),所有受试菌株对阿米卡星的敏感性最强,仅有11.9%(49)的耐药率,其次是头孢西丁(14.1%)和头孢哌酮(29.9%)。247(60.1%)株分离菌表现5重以上耐药性,其中鸡肉分离株占236株。

空肠弯曲菌中规律成簇间隔短回文重复序列(CRISPR)的检测与结构分析

规律成簇间隔短回文重复序列(clustered regularly interspaced short palindromic repeats,CRISPR)是近年在原核生物中发现的针对噬菌体等外源遗传物质的干扰而进化出的获得性和可遗传性生物免疫系统。因其序列的高度多态性及携带遗传信息的可追溯性,成为分子分型方法的理想位点。本研究对江苏地区分离的86株空肠弯曲菌基因组进行CRISPR结构的检测和分析。结果表明:36%的菌株基因组含有CRISPR结构,32株含有确定CRISPR结构的菌株均只含有1个CRISPR结构,CRISPR序列长度范围为92～366 bp;重复序列与数据库中出现频率最高的重复序列一致;识别到的间隔序列共111条,共分为17种类型,有10种类型的间隔序列与CRISPR DB数据库中公布的一致,有7种间隔序列为新报道的间隔序列,共55条,占总间隔序列的49.5%。通过同源性比对发现,间隔序列除与来自同属同种的质粒或噬菌体具有同源性外,有些还与其他致病菌的质粒或噬菌体具有同源性,这种现象说明空肠弯曲菌与其他致病菌可能存在基因的水平转移等信息交流方式。另外,通过CRISPR结构间隔序列的多样性,可以将38株空肠弯曲菌野生菌株分为5种不同的谱型。研究结果为空肠弯曲菌利用CRISPR结构进行分型和溯源提供数据基础。

含内标的多重实时PCR法同时检测空肠弯曲菌和结肠弯曲菌

目的建立含内标的多重实时荧光PCR法同时检测空肠弯曲菌和结肠弯曲菌。方法针对空肠弯曲菌特有hipO基因和结肠弯曲菌特有ceuE基因设计引物探针,设计并优化内标DNA添加量。测试了方法的特异性、灵敏度以及在鸡肉中的检出限。结果内标的最适添加量为10~4copies/PCR。所建立方法对空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的灵敏度分别达到4.7copies/PCR和5.23copies/PCR;对115株空肠弯曲菌、49株结肠弯曲菌和42株非目标菌株在3种不同类型的实时荧光PCR仪上的特异性均达到100%;对鸡肉中空肠弯曲菌和结肠弯曲菌的检出限达到10CFU/25g,与传统检测方法一致。采用所建立的方法对50份市售生鲜鸡肉进行检测发现,空肠弯曲菌阳性率为12%(6/50),结肠弯曲菌阳性率为4%(2/50);传统国标检测方法除了1份空肠弯曲菌阳性样品未得到分离确认,其余PCR阳性样品均在平板上分离确认。结论该方法特异性强、灵敏度高、开放性好、含有内标可防止"假阴性",可应用于食品中2种重要致病性弯曲菌的快速同步检测。

空肠弯曲杆菌多酶脉冲场电泳基因分型研究

为提高脉冲场电泳(PFGE)技术对空场弯曲杆菌的分型效果,利用6种限制性内切酶对33株空肠弯曲杆菌进行了基因分型研究,结果发现,BamHⅠ是单酶中分型效果最好的一种限制性内切酶,结合KpnⅠ和SacII,可以提高PFGE在空肠弯曲杆菌基因分型中的效果。

大肠埃希氏菌耐药性水平传递研究

以实验室分离大肠埃希氏菌菌株E11-83(耐链霉素)和E6-203(耐萘啶酮酸)为供体及受体菌,研究供体及受体菌的含量比、接合培养介质、氧气量、抗生素诱导、接合时间、温度等因素对接合率的影响。结果发现,供体与受体菌比例为1∶8时,接合率最高,为2.4×10-4;有氧条件下膜接合率最高,为2.5×10-4;添加低质量浓度阿莫西林对于大肠埃希氏菌的接合率影响较小;培养16 h接合率达到最高,为3.5×10-4;接合温度27℃时接合率最高,为3.1×10-4。

我国酸雨的危害及控制现状

主要探讨了我国酸雨的危害及控制现状,为环境保护工作者提供参考,以期提高全民环境保护的意识。

空肠弯曲菌快速检测试剂盒研制及AOAC验证

本文自主研制出含内标的空肠弯曲菌实时荧光PCR快速检测试剂盒,并根据美国分析化学家协会(AOAC)微生物方法对试剂盒进行验证。结果表明,该试剂盒对115株目标菌和118株非目标菌的检测特异性为100%,灵敏度达6.4 CFU/mL。将试剂盒反复冻融30次,目的基因的Ct值无显著变化。稳健性测试结果显示,除了一株空肠弯曲菌对增菌液体积较为敏感外,增菌液体积、菌体裂解时间和DNA添加量均不影响其余10株空肠弯曲菌和5株同属的其它弯曲菌的检测结果。采用生产3 d、生产4个月和1年的3个批次试剂盒进行批间重复性测试和保质期测试,结果显示3批试剂盒对16株弯曲菌的检测结果一致,且11株空肠弯曲菌的Ct值无明显差异。对人工添加鸡肉、蔬菜和牛奶样品以及鸡肉实际样品检测结果显示,试剂盒方法与传统检测方法基本一致,未出现“假阴性”。试剂盒开放性好,可在不同品牌仪器上使用,含有的内部扩增对照可防止“假阴性”,可应用于食品中空肠弯曲菌的快速检测。

上海进口水产品中副溶血性弧菌耐药性、 毒力基因和遗传特征

为研究上海进口水产品中副溶血性弧菌的耐药性、关键毒力基因携带情况以及遗传进化关系,为其科学预警和溯源提供数据支持,针对2017—2019年从上海口岸进口水产品中分离的68株副溶血性弧菌,分析其抗生素敏感性、关键毒力基因携带情况和多位点序列分型。副溶血性弧菌对氨苄西林耐药率最高(98.53%),对其余抗生素耐药率相对较低,对左氧氟沙星和氯霉素均敏感。对9种抗生素中介耐药,其中氨基糖苷类、哌拉西林、环丙沙星和头孢西丁中介耐药率较高。20.59%菌株耐2种及以上抗生素。发现1株携带trh,均不携带tdh。共鉴定出65种ST型,其中52种为新发现ST型。未发现菌株地域来源、食品类型与ST型之间存在明显关联,但在不同时间同一国家同种类型食品中发现相同独特ST型菌株。上海地区进口水产品中副溶血性弧菌遗传高度多样,存在中介耐药和多重耐药现象,存在高致病潜力菌株,需要引起重视。

霍乱弧菌荧光RAA快速检测方法的建立和应用

为了建立一种快速检测霍乱弧菌的方法,试验采用重组酶介导的等温扩增(Recombinase-aided amplification, RAA)方法对霍乱弧菌进行检测,并进行了特异性试验、灵敏度试验、模拟样品12 h增菌培养前后的检测、100份水产品的实际检测。结果表明:副溶血性弧菌、创伤弧菌等12株非霍乱弧菌的标准菌株DNA扩增结果为阴性;对霍乱弧菌分离株的检测限为6.7×10^(2)cfu/mL;增菌培养前,模拟样品中的霍乱弧菌最低检测限为6.7×10^(2)cfu/mL,增菌培养12 h后最低检测限为6.7×10^(-2)cfu/mL;荧光RAA方法与细菌分离划线方法对100份水产品的检测结果一致,30 min即可得到检测结果且仪器便携度高。说明试验建立的荧光RAA方法具有特异性强、灵敏度高、操作简单等优点,适用于现场大批量样品检测。

重组酶介导扩增技术快速检测水产品中副溶血性弧菌

目的建立重组酶介导扩增技术(recombinase aid amplification,RAA)快速检测副溶血性弧菌的分析方法。方法根据副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)tlh基因序列设计特异性引物,经引物筛选,建立副溶血性弧菌的RAA的快速检测方法。结果该方法在30 min即可观察到检测结果。特异性试验结果表明RAA方法检测副溶血性弧菌与其他弧菌属菌种不存在交叉反应,灵敏度试验分析结果表明RAA方法检测副溶血性弧菌检出限为5.3 CFU/mL。用100份样品验证RAA方法的可靠性,结果显示RAA方法和传统划线方法结果符合率为100%,表现出高度一致性。结论本研究建立的RAA检测方法具有特异性强、灵敏度高、操作简便、快速等优点,可用于水产品中副溶血性弧菌的检测。