利用微卫星标记分析青紫蓝獭兔的保种效果

本研究通过分析青紫蓝獭兔的遗传变异情况,从而掌握青紫蓝獭兔的保种现状,以便对兔群的保种模式和方案提供进一步指导。基于目前已有的青紫蓝獭兔资源群体,筛选出23个微卫星位点,分别统计青紫蓝獭兔1、4、5世代的遗传多样性参数,利用荧光标记的微卫星引物进行扩增,经毛细管电泳后判型,分析等位基因数(A)、有效等位基因数(Ae)、期望杂合度(He)、观测杂合度(Obs He)和多态信息含量(PIC)。结果显示:原始世代的A、Ae、He、Obs He和PIC分别为3.1739、2.1043、0.4524、0.5174和0.3878,第4世代为3.0870、1.9847、0.4481、0.5420和0.3807,第5世代为3.1739、1.8771、0.4245、0.4935、0.3574。经卡方检验3个世代各遗传多样性参数差异不显著,提示该保种场较好地保存了青紫蓝獭兔原有的遗传多样性。

獭兔MITF不同可变剪接体对黑色素沉积的影响

小眼畸形相关转录因子(microphthalmia-associated transcription factor,MITF)在哺乳动物皮毛的黑色素形成中发挥了重要作用,而兔MITF基因功能及其不同可变剪接体对黑色素沉积的影响还未见报道。基于此,根据NCBI预测结合文献报道,设计MITF编码区特异性引物,采用RT-PCR结合TA克隆测序的方法,鉴定兔MITF基因的6种可变剪接体:MITF X1、MITF X2、MITF X3、MITF X4、MITF X5和MITF X6。通过进化树分析,发现6个可变剪切体归为一个分支,与人和猩猩的进化距离最近。进一步构建MITF不同剪接体的过表达载体,转染到家兔黑色素细胞中,发现MITF蛋白亚细胞定位于细胞核中;通过荧光定量检测发现MITF X1~X4过表达显著增加GPNMB的mRNA表达量(P<0.05),MITF X1~X3过表达显著增加TYR的mRNA的表达量(P<0.05),MITF X2过表达显著增加PMEL-17的mRNA表达量(P<0.05),其余MITF剪接体的过表达对下游基因表达量的影响不显著(P>0.05);通过黑色素含量测定,发现MITF X1~X6剪接体显著增加黑色素细胞中总黑色素和真黑色素的含量(P<0.05),提示MITF N端的剪接变化并不影响黑色素沉积功能,但不同剪接体的下游信号通路存在差异。

家兔毛乳头细胞的分离、培养和鉴定

毛囊经历周期性生长期,受其基部的真皮乳头细胞调节。本研究用显微切割和二步酶消化相结合的方法处理家兔触须,分离、培养毛乳头细胞,并通过碱性磷酸酶活性检测和蛋白免疫印迹对分离的细胞进行鉴定。结果发现,分离的原代毛乳头细胞呈现向四周放射性贴壁生长,且以长梭形纤维样多极向排列;低代数的毛乳头细胞有明显的凝集性现象,随着代数的增加,凝集性现象越来越不显著,至第10代凝集现象消失,第15代左右细胞停止增殖;经检测,分离的毛乳头细胞有很高的碱性磷酸酶活性,能够表达毛乳头细胞标志性蛋白α-SMA和VIM,表明所分离细胞为家兔的毛乳头细胞,为后期开展毛囊发育的生物学研究提供体外模型。